长枝木霉代谢物对极细链格孢产毒抑制机制解析

【目的】明确长枝木霉(SC5)代谢粗提物对极细链格孢(ABL2)产毒抑制机制。【方法】以富士苹果的叶片为供试材料,通过生长速率法、LC-MS和RT-qPCR技术测定了SC5代谢粗提物对ABL2菌落生长、6种非寄主选择性毒素产生及产毒相关基因表达的抑制作用。【结果】质量浓度为0.5 mg·mL^(-1)的SC5代谢粗提物对ABL2菌落生长和致病力具有显著的抑制作用,第6天时抑制率分别为38.08%和76.96%;同时,0.5 mg·mL^(-1) SC5代谢粗提物对ABL2菌株产生的非寄主选择性毒素TEN、ALT和TeA均具有显著抑制作用,其中处理2d后对毒素的抑制作用最显著,其含量分别降低69.39%、98.51%和48.99%,并且其合成相关基因TES、TES(1)、PksA和PksJ的表达量显著下调,分别降低89.02%、98.20%、46.49%和40.13%,但是对ABL2菌株非寄主选择性毒素ATX-I含量和参与编码其合成的PksF基因表达量具有提升作用。【结论】质量浓度为0.5mg·mL^(-1)的SC5代谢粗提物对ABL2菌株生长和致病力具有抑制作用,可能通过调控ABL2菌株TES、TES(1)、PksA和PksJ基因下调表达,进而降低TEN、ALT和TeA的毒素的产生量及致病力。

胍基乙酸对育肥猪生长性能、屠宰性能、血清生化指标、肌纤维特性及肌肉发育相关调节因子基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮中添加胍基乙酸对育肥猪生长性能、屠宰性能、血清生化指标、肌纤维特性及肌肉发育相关调节因子基因表达的影响。选取体重[(86.00±1.00)kg]相近的杜长大三元杂交猪48头,随机分为3组,每组4个重复,每个重复4头猪(公母各占1/2)。对照组饲喂基础饲粮,T1组在基础饲粮中添加500 mg/kg胍基乙酸,T2组在基础饲粮中添加500 mg/kg胍基乙酸+200 mg/kg甜菜碱。预试期3 d,正试期38 d。结果表明:1)T1组和T2组的末重、平均日增重和平均日采食量显著高于对照组(P<0.05);T1组和T2组的料重比显著低于对照组(P<0.05),且T2组的料重比显著低于T1组(P<0.05)。2)与对照组相比,T2组的胴体重有升高的趋势(P=0.079)。T1组和T2组的屠宰率和眼肌面积显著高于对照组(P<0.05)。3)与对照组相比,T1组和T2组的第19天血清低密度脂蛋白含量有降低的趋势(P=0.084)。T1组和T2组的第38天血清尿素含量显著低于对照组(P<0.05);T1组和T2组的第38天血清总蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),且T2组的第38天血清总蛋白含量显著低于T1组(P<0.05)。4)T1组和T2组的肌纤维横截面积显著高于对照组(P<0.05)。5)与对照组相比,T2组的肌肉生肌因子5(Myf5)基因相对表达量有升高的趋势(P=0.093)。T2组的肌肉肌细胞生成素(MyoG)基因相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加胍基乙酸和甜菜碱能提高育肥猪生长性能、屠宰性能和肌纤维横截面积,促进肌纤维的增殖与分化,且联合添加胍基乙酸与甜菜碱的促生长效果优于单独添加胍基乙酸。

黄绿卷毛菇有机挥发物对白菜型油菜幼苗生长影响的机理研究

[目的]微生物VOCs可作为信号分子,在不同物种间的相互作用中起重要作用。它可以直接或间接地调节植物生长发育和耐逆性。本文旨在初步探明黄绿卷毛菇(Floccularia luteovirens)挥发性有机化合物(volatile organic compounds,VOCs)对白菜型油菜(Brassica rapa)生长影响的机理。[方法]本研究通过生理学与转录组学方法,研究了黄绿卷毛菇VOCs对白菜型油菜幼苗生长的影响。测量了黄绿卷毛菇VOCs处理12 d后白菜型油菜的生物量、可溶性糖含量及光合指标,提取了黄绿卷毛菇VOCs处理了2 d后油菜叶片的总RNA进行了转录组测序、RT-qPCR验证,并对转录组数据进行了GSEA、GO及KEGG分析。[结果]黄绿卷毛菇VOCs处理增加了油菜幼苗生物量,提高了叶绿素含量、光合指标和叶片可溶性糖含量。转录组学分析结果表明,黄绿卷毛菇VOCs处理后,叶片中有338个差异表达基因(DEGs),其中220个DEGs表达上调,118个DEGs表达下调。GSEA分析结果表明,有丝分裂细胞周期、肌球蛋白结合、跨膜转运蛋白活性、激素介导的信号通路、光系统Ⅱ等途径被诱导。GO富集分析结果表明,大部分GO条目与蛋白折叠、与氧化还原酶活性和与含硫S化合物相关的跨膜转运蛋白有关。KEGG富集分析结果表明,DEGs主要富集在植物-病原体相互作用、淀粉和蔗糖代谢、碳代谢、苯丙烷类生物合成、RNA降解、氨基糖和核苷酸糖代谢等途径。[结论]黄绿卷毛菇VOCs通过调节光合作用、营养平衡、激素途径和代谢途径,影响白菜型油菜生长,并且可能在植物响应逆境胁迫中发挥作用。

基于GEO数据库永久性房颤的生物信息学分析及潜在有效药物预测

目的探讨PAF的治疗靶点及药物,为其临床诊疗提供新的理论和方法。方法利用GSE2240芯片,选择GPL96基因注释平台采集10例PAF患者和20例窦性心律对照者右心耳芯片数据。应用limma软件包筛选DEGs;应用clusterProfiler软件包进行GO、KEGG富集分析;应用STRING11.0在线数据库进行PPI分析,筛选关键基因;应用CMAP数据库筛选与DEGs负相关的小分子药物。结果PAF组共筛选出184个DEGs。GO:DEGs参与多种信号通路等生物过程。KEGG:DEGs主要富集于PI3K-Akt信号通路、松弛素信号通路、AGE-RAGE信号通路、细胞外基质与其受体的相互作用、蛋白质的消化与吸收、HIF-1信号通路等。PPI:10个关键基因,其中7个表达上调,3个表达下调。成功筛选到11种与永久性房颤DEGs负相关的小分子药物,其中布美他尼、石蒜碱最有潜力成为治疗PAF的有效药物。结论NKCC1是PAF潜在的治疗靶点;布美他尼,石蒜碱是潜在治疗PAF的有效药物。

亲鸽饲粮添加黑水虻幼虫粉对乳鸽生长性能、抗氧化及肠道物理屏障功能的影响

试验旨在探究亲鸽饲粮添加黑水虻幼虫粉对乳鸽生长性能、血清免疫指标、抗氧化功能、肠道形态发育及紧密连接蛋白相关基因表达的影响。试验选取192只体重相近且健康的1日龄乳鸽和96对产蛋日期相近的7月龄亲鸽,随机分成4组,每组6个重复,每个重复8只乳鸽和4对亲鸽,每对亲鸽以“2+2”哺育模式哺育乳鸽。对照组饲喂基础日粮,0.5%、1.0%、1.5%黑水虻幼虫粉组分别饲喂含0.5%、1.0%和1.5%黑水虻幼虫粉的试验饲粮,试验期28 d。结果显示:与对照组相比,黑水虻幼虫粉组乳鸽28日龄体重显著提高(P<0.05);0.5%、1.0%黑水虻幼虫粉组血清IgM和IgG含量显著提高(P<0.05);血清总抗氧化能力和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性以及回肠谷胱甘肽过氧化物酶和T-SOD活性显著提高(P<0.05),乳酸脱氢酶活性和血清丙二醛含量显著降低(P<0.05);回肠SOD1、SOD2和CAT mRNA相对表达量均显著提高(P<0.05);肠道绒毛高度、绒隐比和肌层厚度显著提高(P<0.05),隐窝深度显著降低(P<0.05);回肠Claudin-3、Occludin和ZO-1 mRNA相对表达量均显著提高(P<0.05),Claudin-2 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮添加0.5%~1.0%黑水虻幼虫粉更有利于乳鸽生长,提高其免疫和抗氧化功能,改善肠道的物理屏障功能。

干旱胁迫对马铃薯类黄酮和类胡萝卜素合成关键酶基因表达的影响

利用马铃薯抗旱二倍体材料H145和对干旱敏感二倍体材料H214,通过半定量RT-PCR方法研究了干旱胁迫0、7、10、12、14d时叶片和根系中3-二氢黄酮羟化酶(F3H)基因、黄酮合成酶(FLS)基因和β-胡萝卜素羟化酶1(HYD-1)基因的表达状况。结果表明:干旱胁迫过程中马铃薯品系H145和H214叶片和根系中F3H基因、FLS基因、HYD-1基因的表达量在轻度或中度干旱胁迫下有不同程度的增加,但品系H145在干旱的早期叶片中F3H基因表达量比根系中增加快,并且叶片中FLS基因和HYD-1基因受干旱诱导的表达持续时间比根系中长;品系H214叶片中F3H基因受干旱诱导表达持续的时间比根系中长,在干旱的早期叶片里FLS基因和HYD-1基因表达量没有根系中增加快。说明F3H、FLS和HYD-1基因参与了马铃薯抗旱反应,但不同的品系这些基因起作用的方式可能不同。

川芎嗪对大鼠慢性缺氧性肺动脉高压的保护作用及其与NOS基因表达的关系

以慢性常压缺氧的方法复制了大鼠慢性缺氧性肺动脉高压模型,观察了川芎嗪(LTZ80mg·kg^(-1),iP)对慢性缺氧性肺动脉高压的预防作用及cGMP含量(血浆和肺小动脉)和肺组织一氧化氮合成酶(NOS)基因的mRNA表达之变化.结果表明,慢性缺氧大鼠肺动脉平均压明显升高,但cGMP含量明显降低,肺组织NOS基因mRNA表达明显减弱;cGMP含量与肺动脉平均压呈明显负相关;LTZ对正常大鼠肺动脉压、cGMP含量和肺组织NOS基因的mRNA表达无明显影响,但可使慢性缺氧大鼠上述指标逆转.结果提示慢性缺氧大鼠肺组织NOS基因mRNA表达降低是慢性缺氧性肺动脉高压发病的机制之一,而LTZ增强了慢性缺氧大鼠肺NOS基因mRNA的表达可能是其预防慢性缺氧性肺动脉高压发生的重要机制.

贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化

背景与目的:实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀(depleteduranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因表达谱。方法:用难溶性贫铀氧化物(dUO2)作用腺病毒-12/SV40病毒永生化的人支气管上皮细胞(BEAS-2B),通过观察不同代龄细胞的倍增时间、血清抗性、半固体琼脂克隆形成率及裸鼠成瘤性,鉴定细胞的恶性转化特性;用213个肺癌相关基因的芯片对贫铀诱发的转化BEAS-2B细胞的基因表达谱进行检测。结果:贫铀作用后的第5代BEAS-2B细胞倍增时间明显缩短,血清抗性显著增强;第10代细胞具有锚着独立性生长特性(半固体琼脂克隆形成);第15代裸鼠体内成瘤。二甲亚砜(DMSO)对贫铀诱发的BEAS-2B细胞恶性转化有明显保护效果。213个肺癌相关基因的芯片检测结果表明,转化细胞中有70多个基因的表达水平发生明显改变,其中10余个基因表达水平明显下降。结论:贫铀在体外具有致癌性。

人组织era基因mRNA的表达谱

目的 研究人 era基因 m RNA在不同组织、不同细胞系的表达水平 .方法 用 α([32 p]d CTP标记人 era编码区基因作为探针 ,分别用 Northern杂交和斑点杂交分析含 12种不同成人组织 m RNA的 Multiple tissue northern(MTN)blot膜和含 76种成人、胎儿及常用细胞系 m RNA的 Multipletissue expression (MTE) array膜 ,并用同位素扫描系统对杂交结果进行图像分析 .结果 Northern blot杂交所检测的 12种组织中均有位于 2 .2 kb处的杂交条带 ,斑点杂交显示人era m RNA在所检测的 76种组织中均有表达 ,但表达水平有很大差异 ,在神经系统、某些胎儿组织以及某些肿瘤细胞中高表达 .结论 人 era m RNA表达于所有检测的组织或细胞系 ,可能为一种组成性表达的基因 .

七彩红竹中类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶基因的克隆及功能分析

类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶(Flavonoid-3-O-glucosyltransferase,3GT)是花青苷(Anthocyanins)生物合成途径中的关键酶,它主要负责将不稳定的花色素转变为稳定的花色素苷,虽然目前已经从其他植物中克隆获得类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶,但是对竹子中的类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶并不清楚。该文以产生花青素的七彩红竹(Indosasa hispida Mc Clure cv.Rainbow)为材料,首先通过3GT的同源比对后设计3GT基因特异引物,获得3GT基因片段;然后运用RT-PCR及RACE技术从七彩红竹茎中克隆得到完整的3GT基因(Ih3GT)。结果表明:Ih3GT基因的c DNA全长序列为1 730 bp,含有1个1 425 bp的开放阅读框(ORF),编码474个氨基酸;系统进化分析显示,七彩红竹3GT与其他禾本科植物的3GT聚类到同一个分支;该基因推断的蛋白与水稻(Oryza sativa)3GT蛋白的相似性为69%,与二穗短柄草(Brachypodium distachyon)3GT的相似性为67%;经氨基酸序列比对,推断七彩红竹3GT含有糖基转移酶基因家族特有的结构域PSPG-box;半定量PCR的结果显示,七彩红竹3GT基因在微红的幼茎中大量表达,而在其他组织中并不表达,说明Ih3GT具有组织表达特异性。该结果为今后深入研究七彩红竹花色苷的形成机理、鉴定Ih3GT酶活性以及利用Ih3GT基因培育竹子新品种奠定了基础。

hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段。测序正确后,利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTER-Tpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。用脂质体转染法,将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况,以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用。结果:经酶切鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确。转染hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后,SKOV3细胞的增殖受到抑制,出现明显凋亡。结论:hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达,并发挥其促凋亡作用。构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体,可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径。

Wnt3、Wnt3a在胃癌组织中的表达及意义

目的:探讨Wnt3、Wnt3a、Wnt5a、Wnt8a和β-catenin基因在胃癌及慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)组织中的表达及在胃癌发生、发展中的作用.方法:应用Real-time RT-PCR方法检测26例CAG和40例胃癌组织中Wnt3、Wnt3a、Wnt5a、Wnt8a mRNA的表达情况,Westernblot检测β-catenin蛋白的表达.结果:Wnt3和Wnt3a mRNA的表达在胃癌组织中较CAG中升高(1.9940±0.1311vs1.3349±0.2487,P<0.05;2.3033±0.3979vs1.2835±0.2815,P<0.05),并与胃癌的淋巴结转移及TNM分期具有相关性,而Wnt5a和Wnt8a在两种组织中的表达无显著差异(P>0.05),Western blot结果显示β-catenin蛋白在胃癌中表达升高(0.6290±0.1369,0.2341±0.0975,P<0.05).结论:Wnt/β-catenin信号通路在胃癌组织中呈活化状态,而Wnt3和Wnt3a可能在启动此通路的激活过程中起到了主要作用,并参与了胃癌的发生发展.

基因表达数据判别分析的随机森林方法

目的探讨随机森林算法在基因表达数据分类研究中的应用。方法通过实际基因表达数据考核其应用效果,并通过模拟试验进一步验证和研究在存在大量无差异表达基因情况下对分类产生的影响。结果随机森林算法对基因表达数据的分类具有较高的准确性,但随着基因数量的增加其判别效果呈下降的趋势,在差异表达基因之间具有相关性时,下降趋势明显减慢,能够获得较理想的分类效果。结论随机森林算法对基因表达数据的分类研究有较好的判别效果。

PGC-1β和PRC基因多态性位点与优秀耐力运动员运动能力的关联性及机制研究

目的:探讨过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子1家族基因多态性位点与优秀耐力运动员运动能力的关联性及作用机制。方法:应用Case-Control实验设计,分析47个单核苷酸多态性位点在235名优秀耐力运动员和504名对照组的分布特征。采用双荧光素酶报告基因的方法分析阳性关联多态性位点的生物学功能。结果:1)过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子1β的4个多态性位点,rs17110586、rs32579、rs2161257、rs17600568,过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子相关共活化因子的2个多态性位点:rs7114388、rs4817960的基因型和等位基因在优秀运动员与对照组分布频率有显著性差异;过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子1β的rs251466仅等位基因分布频率达到显著性。2)rs17600568和rs4917960不改变相对荧光素酶活性。rs2161257下调相对荧光素酶活性,但2个纯合子之间没有显著性差异。rs251466、rs17110586、rs32579和rs7114388上调相对荧光素酶活性,但rs32579,2个纯合子之间没有显著性差异;其余3个多态性位点在2个纯合子之间有显著性差异,在运动员频率高的基因型有显著高的相对荧光素酶活性。结论:rs17110586和rs17114388与优秀耐力运动员的运动能力状态关联,并且上调基因转录。

脂多糖对类风湿关节炎患者外周血单核细胞TLR2、TLR4 mRNA及其蛋白表达的影响

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血单核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLR)2、4mRNA和蛋白的表达及脂多糖(LPS)对其表达的影响。方法:收集已确诊的RA患者5例(DAS28≥2.6),健康自愿者5例;体外分别分离培养受试者PBMCs作为RA组和健康组,下设空白组与LPS组,其中LPS组给予100μg/L LPS进行刺激,细胞培养24 h后,FQ-RT PCR检测单核细胞TLR2、TLR4 mRNA表达;Western blot检测单核细胞TLR2、TLR4蛋白表达。结果 :给予LPS刺激后,RA组与健康组PBMCs TLR2、TLR4 mRNA及其蛋白的表达均高于相应组刺激前(P<0.001);给予LPS刺激前和刺激后RA组PBMCs TLR2、TLR4 mRNA及其蛋白的表达水平均明显高于健康组(P<0.001)。结论:LPS可刺激RA患者PBMCs已高表达TLR2、TLR4的表达水平更高,可能与机体的炎症反应有关。

食管鳞癌细胞系EC-109中缺氧诱导因子-1α的表达意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌细胞系EC-109中的表达及其意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测HIF-1αmRNA和蛋白在常氧及缺氧状态下在食管鳞癌EC-109细胞中的表达.结果:HIF-1αmRNA在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中过表达(P<0.05),在缺氧24h时HIF-1αmRNA表达最高,其后随时间延长表达下降;HIF-1α蛋白水平在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中无明显上调(P>0.05).结论:低氧可诱导食管鳞癌EC-109细胞中HIF-1αmRNA的过度表达,缺氧状态下HIF-1α蛋白水平较常氧时无明显增加.

雌激素对雌性大鼠颏舌肌肌质网Ca^(2+)-ATPase活性及其基因表达的影响

目的:观察雌激素对雌性大鼠颏舌肌细胞肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)Ca2+-ATPase活性及其基因表达的影响,探索其影响颏舌肌功能的分子生物学机制。方法:将30只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(control)、去卵巢组(ovariectomy,OVX)、去卵巢回补激素组(ovariectomy with 17β-estradiol,OVX+E2)。术后6周,处死动物,提取颏舌肌SR。采用定磷法检测颏舌肌SR Ca2+-ATPase活性,荧光定量RT-PCR测定SR Ca2+-ATP酶mRNA表达的变化。结果:OVX组血清雌激素水平及子宫湿重较对照组明显降低(雌二醇P<0.01;子宫湿重P<0.01),而OVX+E2组与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05)。OVX组颏舌肌SR Ca2+-ATP酶活性较对照组明显降低(P<0.01);OVX+E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05)。OVX组颏舌肌SR Ca2+-ATPase mRNA表达较对照组明显降低(P<0.01);OVX+E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与正常组相比差别无统计学意义(P>0.05)。结论:成年雌性大鼠雌激素水平的变化可引起颏舌肌SR Ca2+-ATP酶活性及其mRNA表达的变化,雌激素可能通过该途径改变颏舌肌功能.

反义寡聚脱氧核苷酸（ODN）衍生物抑制乙肝病毒抗原表达的研究

为比较针对中不同基因的ＯＤＮ硫代衍生物阻断乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的抗原表达，合成了与核心蛋白编码基因起始码上游序列（＃１８９３－１９０７），多聚酶蛋白编码基因起始码上游及内部序列（＃２２９７－２３１３，＃２７９７－２８１３）３．５ｋｂＲＮＡ３′端起始负链ＤＮＡ合成序列（＃ｌ８１７－１８３１）互补的寡聚脱氧核苷酸硫代衍生物［Ｃ－ＯＤＮ，Ｐ－ＯＤＮ，ＰＭ－ＯＤＮ，ＰＢＳ－ＯＤＮ］，分别在ＨＢＶ短暂表达和稳定表达细胞培养系统中观察其抑制ＨＢＶ抗原表达的作用。结果发现，当培养液中ＯＤＮ浓度为２０μｍｏｌ／Ｌ时，四种ＯＤＮ均能抑制ＨｅｐＧ２２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ（乙肝表面抗原）的产生（抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，２４．５％；ＰＯＤＮ，１３．４％；ＰＭ－ＯＤＮ，３８．４％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，２８．４％）；与ＨＢＶＤＮＡ双体质粒共转染ＨｅｐＧ２细胞后部分ＯＤＮ可明显抑制ＨＢＶＤＮＡ在细胞内表达（ＨＢｅａｇ分泌抑制率分别为：Ｃ－ＯＤＮ，５２％；ＰＭ－ＯＤＮ，７０％；Ｐ－ＯＤＮ，４８％；ＰＢＳ－ＯＤＮ，１８％）。用测定上清中人白蛋白的结果证明，Ｃ－ＯＤＮ的细胞毒作用最低。对Ｃ－ＯＤＮ的作用机理及进一步发展ＯＤＮ的应用也进行了?

中国明对虾Imd免疫信号通路相关基因克隆及表达分析

Imd免疫信号通路在无脊椎动物抗革兰氏阴性菌方面起到十分重要的作用。在已知中国明对虾Imd通路下游核转录因子Relish基因全长的情况下,利用同源克隆方法获得了Imd通路上游基因Imd的cDNA序列,命名为FcImd,该基因全长783bp,5’非编码区45bp,3’非编码区255bp,开放阅读框483bp,编码160个氨基酸,包括一个位于C端的死亡结构域。同源性分析表明,FcImd基因氨基酸序列与其他甲壳动物的氨基酸序列高度保守,与凡纳滨对虾和日本囊对虾的同源性分别为99%和88%。于鳗弧菌感染后的1,3,6,12,24,48,96,144h记录实验组和对照组的累积死亡率,并分别取血淋巴用于检测中国明对虾Imd及Relish基因在不同时间点的表达量变化情况。结果显示:鳗弧菌感染后,实验组Imd和Relish表达量均显著高于对照组(P<0.05),其中Imd表达量呈先升高后降低趋势,Relish表达量在1h时达到最高,然后呈逐渐降低趋势。中国明对虾感染鳗弧菌后Imd和Relish基因呈不同步上调表达,说明Imd和Relish基因的表达与弧菌刺激密切相关,提示Imd和Relish基因参与了对虾抗菌反应的Imd信号转导通路。

‘黄冠’梨类甜蛋白编码基因PbPR5的克隆及其表达特性分析

【目的】分离和克隆类甜蛋白基因Pb PR5,了解其在‘黄冠’梨不同组织、不同发育阶段以及受到非生物胁迫和植物生长调节剂处理时的表达情况。【方法】以‘黄冠’梨(Pyrus bretschneideri‘Huangguan’)组培苗为试验材料,从水杨酸(salicylic acid,SA)处理的c DNA文库中克隆获得该基因全编码区序列,命名为Pb PR5,对其进行生物信息学分析,并研究该基因在盐、聚乙二醇(EG6000)、SA和乙烯(ETH)处理后的表达情况;以12 a生‘黄冠’梨的叶片和果实为材料,探究该基因在叶片和果实不同发育阶段的表达模式。【结果】Pb PR5的c DNA序列长度为741 bp,编码224个氨基酸残基;该基因的基因组DNA序列长度为813 bp,包含1个内含子。生物信息学分析表明,Pb PR5蛋白与其他植物PR5基因编码的氨基酸序列相似性较高。实时荧光定量PCR分析表明:Pb PR5基因在‘黄冠’梨组培苗的根,茎,叶中均能表达,其中根部的表达量高于茎和叶;盐和干旱胁迫诱导了该基因表达,根和茎中的表达高峰均出现在处理后6 h,叶在盐胁迫后24 h和干旱后12 h出现表达高峰;SA和乙烯也诱导了该基因在叶片中的表达。在不同发育阶段的叶片中,老叶表达量最高,成熟叶次之,幼叶中不表达;在不同发育阶段的果实中,成熟果实中表达量最高,幼果期和膨大期果实表达量较低。【结论】Pb PR5基因在‘黄冠’梨各组织中非组成型表达,并且在‘黄冠’梨抵御生物和非生物胁迫过程中可能具有重要的生物学功能。