金黄色葡萄球菌DPO-PCR快速检测方法的建立与应用

为建立检测金黄色葡萄球菌（SA）的PCR方法,以SA Sa442基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物（DPO）,建立了SA的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,在45~65℃退火温度范围内均能高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感,该方法的灵敏度为2.27×102cfu/m L,同时DPO引物特异性强,与其他菌株无非特异性扩增反应。利用该方法和行标法分别对采集的175份样品进行检测,均共计检出13份SA阳性样品,两者符合率为100%。作者建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性,为快速准确检测SA提供新的检测手段。

食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。

荧光PCR高分辨率熔解曲线分析法检测食源性金黄色葡萄球菌

以sa442为靶基因,结合特异性引物,建立了一种快速检测鉴定食品中常见的金黄色葡萄球菌的HRM(高分辨率熔解曲线)real-time PCR法,对该法进行特异性验证,敏感性分析及重复性评价,并实现了其在人工染菌鸡肉样本检测的初步应用。结果表明,该方法具有较强的特异性,对8株金黄色葡萄球菌目标菌株均产生特异性溶解曲线,Tm值为(77.34±0.287)℃,而沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157等8种肉产品中常见的食源性非目标病原菌均不产生扩增曲线;灵敏度高,该法对阳性重组质粒PMD18-sa442的检测限为2.00×102 copies/mL;重复性强,同一样品于试验内及试验间的变异系数分别为(0.76±0.52)%和(1.34±0.45)%;且该法可初步应用于人工染菌鸡肉样(染菌量5、10、20 cfu/25 g样品匀浆)的检测。所建立的金黄色葡萄球菌HRM real-time PCR法具有特异性好、灵敏度高、重复性强的特点,能应用于食品样本的检测,为金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法。