结核病Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗免疫保护效果研究

目的研究Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法将雌性C57BL/6N小鼠40只,随机分为5组,即Mtb8.4/hIL-12嵌合基因、Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、空载体组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清液检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行细胞毒性T细胞(CTL)杀伤检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果Mtb8.4/hIL-12嵌合基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻,其效果优于卡介苗(BCG)组和Mtb8.4基因疫苗组。结论hIL-12与Mtb8.4构建成嵌合基因疫苗后,使Mtb8.4基因疫苗的免疫效力得到很大提高。

结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12表达质粒联合免疫的细胞免疫应答观察

目的观察结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答。方法15只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFUBCG免疫1次。ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1493.340±8.128pg/ml、747.489±48.676pg/ml)显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强。结论hIL-12表达质粒能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答。

Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗免疫原性

目的:构建克隆结核分枝杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗,并在COS7细胞中表达,研究该疫苗的免疫原性。方法:克隆Mtb8.4/hIL12嵌合基因,并导入真核表达载体pCIneo中,构建pCIneoMtb8.4/hIL12重组真核质粒。用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等鉴定后,转染COS7细胞,用RTPCR和Westernblot鉴定Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平的表达。用Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗免疫C57BL/6N小鼠,收集脾细胞培养上清检测细胞因子的水平,并用乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定细胞毒性T细胞(CTL)的杀伤作用。结果:pCIneoMtb8.4/hIL12重组质粒构建成功。以其转染COS7细胞后,Mtb8.4/hIL12嵌合基因在转录水平获得表达。Mtb8.4/hIL12嵌合基因疫苗能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,IFNγ和IL2的分泌增加,IL4的分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强。结论:成功地构建pCIneoMtb8.4/hIL12重组质粒,并在COS7细胞中表达。构建的Mtb8.4/hIL12基因疫苗具有较强的免疫原性,可明显诱导CTL的杀伤活性。

人白细胞介素12表达质粒与Mtb8.4基因疫苗联合免疫增强对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果

本课题旨在研究结核分枝杆菌Mtb8.4基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠所诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.40只C57BL/6N小鼠随机分为Mtb8.4基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组)、Mtb8.4基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组,基因疫苗、空载体和PBS,经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次.BCG组经尾部皮下注射1×106CFUBCG免疫1次.免疫4周后,每组处死3只小鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脾细胞培养上清中细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性.每组其余5只小鼠用结核杆菌H37Rv强毒株经尾静脉攻击,4周后,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.结果显示,联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-γ和IL-2水平(分别为1493±8pg/ml、748±49pg/ml),显著高于Mtb8.4基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少,特异性CTL杀伤活性增强,对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果,使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数显著减少,组织病变明显减轻,其效果与卡介苗(BCG)组相当,优于Mtb8.4基因疫苗组.表明hIL-12表达质粒与Mtb8.4基因疫苗联合免疫后,能够增强Mtb8.4基因疫苗所诱导的细胞免疫应答,使Mtb8.4基因疫苗的免疫效力得到很大提高.

结核菌Mtb8.4基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究Mtb8.4基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL/6N小鼠32只,随机分为4组,即Mtb8.4基因疫苗组、BCG组、pcDNA3.1(+)组和PBS组。小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv强毒株静脉攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z-N染色查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,能够诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-2分泌增加,IL-4分泌减少,特异性CTL活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。

结核分枝杆菌mtb8.4/hIL12嵌合基因的克隆及真核表达质粒的构建

目的 :克隆结核分枝杆菌mtb8.4 /hIL12嵌合基因 ,构建其真核表达质粒 ,并进行鉴定。方法 :采用基因工程技术 ,首先以 pcDNA 3.1(+) -mtb 8.4为模板 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增出mtb 8.4 -linker基因 ,与pCI-neo载体进行连接重组 ,构建成pCI-neo -mtb 8.4 -linker(pML)重组质粒 ,然后以pORF -hIL12质粒为模板 ,经PCR扩增出hIL - 12基因 ,将hIL -12基因与pML质粒进行连接重组 ,构建成mtb 8.4 /hIL12嵌合基因真核表达质粒 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定。结果 :mtb 8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功。结论 :mtb 8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建 ,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病mtb 8.4

人IL-12表达质粒联合含信号肽Mtb8.4基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果

目的研究结核分枝杆菌含信号肽Mtb8.4(MS)基因疫苗与人白细胞介素12(hIL-12)联合免疫小鼠后,诱导的细胞免疫应答及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法将40只C57BL/6N小鼠随机分为联合免疫组(MS基因疫苗+hIL-12组)、MS基因疫苗组、卡介苗(BCG)组、空载体组和PBS组。将基因疫苗、空载体和PBS,经肌内注射免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次;BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次。采用ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清中细胞因子的水平;用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测免疫小鼠细胞毒性T细胞的杀伤活性。用结核杆菌强毒株H37Rv静脉攻击小鼠后,计数肺和脾组织中结核杆菌的菌落数。对小鼠的部分肺和脾组织作病理切片,经HE染色观察组织病变的程度,经ZN染色检查抗酸杆菌,观察该疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果联合免疫组能诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液中IFN-γ和IL-2的水平,与BCG组相当,显著高于MS基因疫苗组,IL-4分泌减少,特异性CTL的杀伤活性增强,对小鼠结核杆菌感染有较好的免疫保护效果。表现为小鼠肺和脾组织中结核杆菌的菌落数显著减少,组织病变明显减轻,其效果与卡介苗(BCG)组相当,但优于MS基因疫苗组。结论以hIL-12表达质粒与MS基因疫苗联合免疫后,能显著增强MS基因疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。

结核分枝杆菌新抗原Mtb8.4基因的克隆与真核表达

目的克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建成重组质粒pcDNA3.1(+)-Mtb8.4,并在真核细胞中进行表达。方法提取人结核杆菌H37Rv株的基因组作为模板,进行PCR扩增,获得Mtb8.4目的基因后,与pcDNA3.1(+)载体进行连接重组,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列分析等多种方法进行鉴定;重组质粒转染COS-7细胞48h后,用RT-PCR方法鉴定Mtb8.4在转录水平的表达情况。结果pcDNA3.1(+)-Mtb8.4真核表达载体构建成功;转染COS-7细胞后,Mtb8.4在转录水平成功表达。结论pcDNA3.1(+)-Mtb8.4真核表达质粒的构建成功以及Mtb8.4在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究该真核表达质粒的免疫保护效果及制备结核病pcDNA3.1(+)-Mtb8.4DNA疫苗奠定了基础。

一种新的分枝杆菌抗原Mtb8.4

Mtb8.4是最近从结核杆菌培养滤液中纯化分离出的一种低分子蛋白抗原,具有很强的细胞免疫活性,本文综述了Mtb8.4在结构、细菌分布、生物学活性及用途等方面的研究进展。

结核病Mtb8.4基因疫苗构建、表达及诱导的细胞免疫应答

目的制备结核病Mtb8.4基因疫苗,并研究其免疫原性。方法克隆结核杆菌新抗原Mtb8.4基因,导入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组质粒pcDNA3.1(+)Mtb8.4,转染COS7细胞后,用RTPCR检测Mtb8.4基因在细胞内正确表达。将Mtb8.4基因疫苗肌肉注射免疫C57BL/6N小鼠,第3次DNA免疫后4周,处死小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效、靶比例分别为100∶1、50∶1、10∶1进行CTL杀伤检测。结果Mtb8.4基因疫苗组免疫小鼠脾细胞培养上清中γ干扰素(IFNγ)和白细胞介素2(IL2)含量分别为787.317±45.586pg/ml和319.953±57.978pg/ml,BCG组分别为1486.540±39.600pg/ml和767.043±50.269pg/ml,BCG组IL4的含量为90.580±10.998pg/ml,明显高于其他各组(P<0.01)。效靶比为100∶1、50∶1、10∶1时,Mtb8.4基因疫苗组的CTL活性分别为55.3%、35.7%、9.2%,BCG组分别为28.9%、21.4%、9.8%。Mtb8.4基因疫苗主要使抗原特异性Th1型细胞免疫应答增强,细胞因子IFNγ和IL2分泌增加,IL4分泌减少,CTL活性增加;而BCG使IFNγ、IL2和IL4分泌均增加。结论结核病Mtb8.4基因疫苗能诱导较强的Th1型细胞免疫应答,可作为结核病的候选疫苗。

枯草芽胞杆菌表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原摇瓶发酵条件优化

为了建立枯草芽胞杆菌摇瓶发酵表达牛分支杆菌Mtb8.4抗原的制备方法,对已构建的含有pNC-HisE-Mtb8.4质粒的分泌表达载体,在枯草杆菌表达系统中进行分泌性表达,采用单因素影响试验方法,在摇瓶水平上进行了表达产量优化。结果表明,各因素的最佳条件是2SY培养基、接种浓度为6%、18h最佳种子阶段,在33℃的培养温度下振荡培养48h,目的蛋白的表达量能够达到750mg/L。该表达条件的确立,为后期生产工艺放大奠定了基础。

结核杆菌Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建与表达

目的 克隆结核分枝杆菌Mtb8.4 /hIL12嵌合基因 ,导入真核表达载体pCI neo ,并在真核细胞中进行表达。方法 采用基因工程技术 ,首先以 pcDNA3.1(+) -Mtb8.4为模板 ,经聚合酶链反应 (PCR)扩增出Mtb8.4 linker基因 ,与 pCI neo载体进行连接重组 ,构建成pCI neo Mtb8.4 linker(pML)重组质粒 ,然后以 pORF hIL12质粒为模板 ,经PCR扩增出hIL 12基因 ,将hIL 12基因与 pML质粒进行连接重组 ,构建成Mtb8.4 /hIL12嵌合基因真核表达质粒 ,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定 ;重组嵌合质粒转染COS - 7细胞后 ,用RT PCR方法鉴定Mtb8.4 /hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况。结果 Mtb8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功 ;转染COS - 7细胞后 ,Mtb8.4 /hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。结论 Mtb8.4 /hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS- 7细胞中的成功表达 ,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病Mtb8.4

结核分支杆菌Mtb8.4真核、原核表达质粒的构建与表达

低分子质量蛋白抗原Mtb8.4是一种非常重要的结核分支杆菌抗原,为了研制结核病核酸疫苗和进行结核病的诊断,分别将其构建到原核和真核载体中进行表达。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv基因组DNA为模板,PCR扩增目的基因Mtb8.4,扩增产物酶切后分别克隆到真核表达载体pJW4303和原核表达载体pGEX-4T-1中,构成重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4,用限制性内切酶消化,PCR扩增及DNA序列分析等多种方法鉴定;并将正确构建的原核表达载体转入E.coliBL21(DE3)plysS中,IPTG诱导表达。结果表明,重组真核表达载体pJW-Mtb8.4和重组原核表达载体pGEX-Mtb8.4构建成功。构建的真核重组质粒pJW-Mtb8.4即可作为结核病DNA疫苗。原核表达载体pGEX-Mtb8.4在BL21(DE3)plysS中成功表达,将表达蛋白进行纯化,作为保护性结核分支杆菌抗原以便检测DNA疫苗的免疫效果。

不同剂量脑脊液标本对Gene Xpert MTB/RIF检查结果的影响

目的评估不同剂量脑脊液标本对Gene Xpert MTB/RIF检查结果的影响。方法选取2017年1月1日~2020年12月31日武汉市金银潭医院收治的结核性脑膜炎患者116例,按随机数字表法分为高剂量组和低剂量组,每组58例。对高剂量组与低剂量组患者均行腰椎穿刺,分别收集脑脊液5 ml、2 ml进行Gene Xpert MTB/RIF检查,比较两组患者脑脊液标本Gene Xpert MTB/RIF检查的阳性率。结果高剂量组患者脑脊液标本Gene Xpert MTB/RIF检查阳性率(67.24%)高于低剂量组(24.14%),比较差异有统计学意义(P<0.001)。结论高剂量脑脊液标本Gene Xpert MTB/RIF检查结果的阳性率高,能有效帮助对疑似结核性脑膜炎患者的早期诊断。

Gene Xpert MTB/RIF技术在结核病诊断中的应用

目的探讨Gene Xpert MTB/RIF技术在结核分枝杆菌(MTB)快速检测中的应用价值。方法收集2020年1月至2022年10月在南昌市第九医院就诊的疑似结核病患者送检的314例痰样本,分别采用Gene XpertMTB/RIF技术、抗酸染色法以及液体培养法进行检测,比较3种检测方法MTB阳性检出率,并以液体培养法检测结果为“金标准”,评估Gene Xpert MTB/RIF技术对MTB的检测效能。结果314例样本经GeneXpertMTB/RIF技术、抗酸染色法和结核分枝杆菌液体培养法检测,其阳性率分别为36.94%、12.10%和36.31%,Gene Xpert MTB/RIF技术和液体培养法MTB的阳性检出率高于抗酸染色法,差异有统计学意义(P<0.05)。以液体培养法为“金标准”,GeneXpertMTB/RIF技术MTB的检测敏感度为95.61%,特异度为96.50%;抗酸染色法的检测敏感度为31.58%,特异度为99.00%;Gene Xpert MTB/RIF技术的敏感度高于抗酸染色法,差异有统计学意义(P<0.05)。经Kappa分析发现Gene Xpert MTB/RIF技术与液体培养法检测MTB的一致性好(Kappa=0.918),而抗酸染色法与液体培养法检测结果的一致性较差(Kappa=0.357)。相比抗酸染色法,Gene XpertMTB/RIF技术有更高的正确检出率,联合使用可有效降低MTB的漏检率。结论GeneXpertMTB/RIF技术在MTB检测中具有敏感度高、特异性好等特点,有较高的临床应用价值。

牛源结核分枝杆菌pknB基因生物信息学分析

为了解牛源结核分枝杆菌关键蛋白的生物学功能,应用生物信息学方法对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶pknB蛋白的结构及生物学特性进行了预测。结果显示:牛源结核分枝杆菌pknB蛋白是一类Ⅱ型跨膜蛋白,其跨膜区位于蛋白中部,亲水性强但缺乏能够分泌表达的信号肽;高级结构中无规则卷曲和α螺旋占比较高,分别为44.73%和32.27%,延伸链和β转角含量较少;pknB蛋白定位在细胞内质网的可能性最高,其次为细胞质,而定位在细胞核、高尔基体和线粒体的可能性最低;存在多个优势抗原表位,其中B细胞抗原表位有12个,分值大于25分的T细胞表位有8个;存在65个潜在的磷酸化修饰位点,它们可能与MRA_3902、MRA_3400、cfp17等多种蛋白发生相互作用。结果说明:pknB蛋白作为一种跨膜蛋白具有良好的免疫原性,并参与宿主的NF-κB信号通路进而影响细菌增殖,可以作为抗结核病疫苗研发及快速诊断试剂盒研制的候选靶标蛋白。

痰涂片镜检、基因芯片技术及GeneXpert MTB/RIF对疑似肺结核患者的检测效能分析

目的分析痰涂片镜检、基因芯片及多色巢式荧光定量聚合酶链反应(GeneXpert MTB/RIF)对疑似肺结核患者的检测效能。方法选取2017年1月至2022年12月该院收治的疑似肺结核患者97例作为研究对象,均实施痰涂片镜检、基因芯片、GeneXpert MTB/RIF及痰液罗氏培养检查。以痰液罗氏培养结果为金标准,探究不同检测方式及联合检测对疑似肺结核的诊断效能,采用Kappa值检验与金标准诊断结果的一致性。结果痰液罗氏培养检测结果显示,97例疑似肺结核患者阳性55例,阴性42例,阳性检出率为56.70%(55/97)。痰液罗氏培养检出非结核分枝杆菌18株,包括鸟分枝杆菌4株,胞内分枝杆菌9株,偶发分枝杆菌1株,堪萨斯分枝杆菌3株,海分枝杆菌1株。痰涂片镜检检出阳性34例,真阳性29例,阳性检出率为35.05%(34/97),基因芯片检出阳性41例,真阳性37例,阳性检出率为42.27%(41/97);GeneXpert MTB/RIF检出阳性44例,真阳性37例,阳性检出率为45.36%(44/97)。基因芯片、GeneXpert MTB/RIF灵敏度、准确率高于痰涂片镜检,基因芯片与GeneXpert MTB/RIF敏感度一致,但基因芯片特异度高于GeneXpert MTB/RIF。非结核分枝杆菌中,痰涂片镜检检出鸟分枝杆菌1株、胞内分枝杆菌2株,基因芯片检出胞内分枝杆菌1株,GeneXpert MTB/RIF检出鸟分枝杆菌1株。痰涂片镜检、基因芯片、GeneXpert MTB/RIF三项联合检出阳性55例,真阳性53例,三项联合检测灵敏度为96.36%(53/55)、特异度为95.24%(40/42)、准确率为95.88%(93/97),均高于单一方法检测的灵敏度与准确率,差异均有统计学意义(P<0.05)。痰涂片镜检与痰液罗氏培养一致性为68.04%(Kappa=0.59);基因芯片与痰液罗氏培养一致性为77.32%(Kappa=0.70);GeneXpert MTB/RIF与痰液罗氏培养一致性为74.23%(Kappa=0.66);三项联合与痰液罗氏培养一致性为95.88%(Kappa=0.89)。结论较GeneXpert MTB/RIF、痰涂片镜检技术,基因芯片诊断效能及一致性更高,且3种技术联合诊断效能更高,临床可根据需求选择适宜诊断技术。

半巢式实时荧光定量PCR体外诊断技术(GeneXpertMTB/RIF)检验在肺结核诊断中的应用效果分析

探讨PCR检测在肺结核诊断中的应用效果。方法 选取2023年1月-2024年1月本院653例疑似肺结核患者,所有患者分别半巢式实时荧光定量PCR体外诊断技术(GeneXpertMTB/RIF)与涂片抗酸染色检查,并与结核杆菌培养试验结果(金标准)对比,分析诊断结果。结果 GeneXpertMTB/RIF系统检查准确度、灵敏度及特异度较涂片抗酸染色检查高,而漏诊率及误诊率比涂片抗酸染色检查低(P<0.05)。结论 GeneXpertMTB/RIF系统检验在肺结核诊断中应用效果明显,不仅具有较高的诊断准确率,且可以为疾病诊断提供参考,值得采纳。

Gene MTB/RIF、TB-IGRA检测与传统组织病理学检查在脊柱结核诊断中的应用价值

目的:评估传统组织病理学(简称“病理”)检查与Gene MTB/RIF(简称“Xpert”)、γ干扰素释放试验(TB-IGRA)在脊柱结核诊断中的应用价值。方法:回顾性分析2017年11月~2020年6月在我院经临床诊断为“脊柱结核”的131例患者资料,男79例,女52例;年龄18~90岁(50±18.0岁);颈椎7例,胸椎39例,胸腰段11例,腰椎57例,腰骶椎12例,骶椎5例。所有患者术前进行TB-IGRA检测,然后通过穿刺或手术获得病灶组织,分别进行病理检查与Xpert检测。病理检查结果分四类:Ⅰ类为确诊结核、Ⅱ类为倾向于结核,Ⅲ类为疑诊结核,Ⅳ类为未确诊结核。Ⅰ类、Ⅱ类病理结果支持脊柱结核诊断,Ⅲ类、Ⅳ类不支持脊柱结核诊断。计算三者的阳性率与阴性率。以病理检查为参照标准,计算Xpert、TB-IGRA的敏感度、特异度,三者单独检测的阳性率、联合检测的阳性率分别进行比较,计算Kappa值评估两者的一致性,并绘制Xpert、TB-IGRA检测的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线并计算曲线下面积(area under curve,AUC),评估Xpert、TB-IGRA检测的价值。结果:所有患者中,病理确诊为结核85例(64.9%,95%CI为56.6%~73.2%),病理未确诊结核46例(35.1%,95%CI为26.8%~43.4%);Xpert检测阳性79例(60.3%,95%CI为51.0%~68.1%),阴性52例(39.7%,95%CI为31.9%~49%),发现RNA聚合酶β亚基的编码基因(rpoB)突变6例(4.6%,95%CI为0.95%~8.20%);TB-IGRA检测阳性99例(75.6%,95%CI为68.1%.83.0%),阴性32例(24.4%,95%CI为17.0%~31.9%)。病理检查与Xpert检测联合诊断脊柱结核89例(67.9%,95%CI为59.02%~75.32%),未确诊结核42例(32.1%,95%CI为24.68%~40.98%)。病理检查与TB-IGRA检测联合诊断脊柱结核107例(81.7%,95%CI为74.97%~88.39%),未确诊结核24例(18.3%,95%CI为11.61%~25.03%)。Xpert检测敏感度为87.1%(74/85),特异度为91.3%(42/46);TB-IGR检测敏感度为90.6%(77/85),特异度为52.2%(24/46)。病理检查与Xpert检测联合诊断脊柱结核的阳性率为67.9%(89/131);病理检查与TB-IGRA检测联合诊断脊柱结核的阳性率为81.7%(107/131);三者联合诊断脊柱结核的阳性率为82.4%(108/131)。以临床诊断结果作为参照,TB-IGRA联合病理检查阳性率高于病理检查(χ^(2)=9.435,P=0.002),三者联合检测阳性率高于病理检查(χ^(2)=9.855,P=0.002),也高于Xpert与病理检查联合(χ^(2)=16.681,P<0.001)。病理检查与Xpert两种检测确诊脊柱结核的Kappa值为0.76(95%CI为0.631~0.873),一致性好;病理检查与TB-IGRA两种检测确诊脊柱结核的Kappa值为0.46(95%CI为0.295~0.616),一致性较好。Xpert检测诊断脊柱结核的AUC为0.892;TB-IGRA检测诊断脊柱结核的AUC为0.751。结论:TB-IGRA检测敏感性较高,Xpert检测特异性较高,并且能发现利福平耐药突变;二者联合病理学检查对诊断脊柱结核具有较高的应用价值。