从血细胞快速抽提DNA的方法探讨

在提取白细胞ＤＮＡ经典方法的基础上，改进从血细胞快速抽提ＤＮＡ的方法．应用２０％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００为溶血剂，以酚／氯仿／异戊醇混合液为抽提剂，能从３ｍＬ的全血中提取６０～９０μｇ的优质ＤＮＡ，具有快速、经济。

中国大麦叶绿体DNA和核糖体RNA基因限制性片段长度多型性

本文报道了我们对我国不同大麦区80份大麦品种叶绿体DNA和核糖体RNA基因限制性片段长度多型性的研究。结果表明:rDNA间隔序列长度存在丰富的多样性,80份材料中出现了8种长度变异炎型共组成8种表现型。长度变异类型及其表现型在地理分布上存在着明显的区域性。推测这种分布上的地区性与植物对环境的适应性有关。所用的两个叶绿体DNA克隆片段未检测到限制性片段长度多型性,说明栽培大麦叶绿体DNA变异程度低。

两用核不育系水稻叶绿体DNA的比较研究

以典型籼稻和粳稻作对照,运用叶绿体特异引物对湖南省应用较广的部分两用核不育系叶绿体DNA进行比较研究。对两用核不育系进行叶绿体DNA的ORF100、ORF29-TrnCGCA片段进行扩增及片段大小比较以及rps16基因内含子和TrnTUGU-TrnLUAA转录间区2个序列进行扩增、测序及序列比较。结果表明,株1S、陆18S、株77S、H628S、88S、白天鹭S、G0543S、G03S、1103S和W6154S的叶绿体DNA的ORF100、ORF29-TrnCGCA两片段的大小均与典型的籼稻一致,其他材料则与典型粳稻相同;叶绿体DNA碱基多态性较丰富的2个区域rps16基因内含子和TrnTUGU-TrnLUAA间区的测序后发现4个籼粳稻特异位点,这4个位点对两用不育系叶绿体籼粳属性的判断与ORF100、ORF29-TrnCGCA片段的结果一致。根据育出组合的数量和质量,带有粳型血缘细胞质的两用核不育系如准S、810S、中心S、C185S和培矮64S等显现了一定的优势,通过籼粳稻杂交选育具粳稻血缘的籼型不育系是提高杂交水稻产量的有效途径之一。

基因工程与外源DNA导入技术

基因工程是把目的基因与适当的载体相连接形成重组ＤＮＡ， 并引入到适当的寄主细胞中进行复制和表达； 外源ＤＮＡ 导入技术是将供体总ＤＮＡ的片段， 在自花受粉后一定时期内， 使其沿着花粉管通道或其他方法进入胚囊， 转化受精卵或其前后的细胞． 基因工程方法思路清晰、原理清楚、目的明确， 但操作繁琐， 费用高； 外源ＤＮＡ导入技术简便易行， 费用低， 但目的性不强， 工作量大． 如将两种方法结合使用， 可降低费用， 提高整合率．

应用聚合酶链反应检测宫腔滋养细胞DNA的研究

目的 :依据孕妇宫腔内存在滋养细胞的理论 ,寻找一种非创伤性产前基因诊断的新方法。方法 :用聚合酶链反应 (PCR)对 1 5例孕 6～ 1 2周孕周初产妇宫腔胎儿脱落细胞的 DNA进行特异扩增 ,扩增的基因为 Y染色体短臂单拷贝基因片段 (DYS1 4) ,扩增片段的大小为2 39bp。结果 :8例妊娠男性胎儿中 7例出现特异扩增带 ,检出率为 87.5%。 7例妊娠女性胎儿未出现扩增带 ,无假阳性。本次研究的符合率为 93.3%。结论 :聚合酶链反应检测孕妇宫腔滋养细胞 DNA具有较高的灵敏度和特异性 ,孕早期宫腔冲洗作为非创伤性产前基因诊断的一种取材方法可应用于临床。

Junk DNA的功能诠释

在庞大的基因组序列中数量占绝对优势的序列因为不编码蛋白质或RNA产物 ,一直被人们称为 junkDNA .事事讲究经济效率的生物在长期的进化中 ,应该不会让大量无功能的“垃圾”堆积在充满活力的生命细胞中 .近年来的研究已揭示junkDNA具有重要的功能 ,随着研究的深入 ,一定会发现越来越多的junkDNA决非垃圾 。

低温敏感不育水稻育性敏感时期的DNA含量

常规品种特青、叶片以及N-10S的叶片，30℃和23℃条件下的DNA含量经统计学检验表明，没有显著差异；但特青的幼穗中，30℃条件下的DNA含量均低于可育条件下的含量，其中花粉母细胞减数分裂期统计学检验表明不育条件下DNA含量显著低于可育条件下的DNA含量．

水稻败育过程中花粉DNA和蛋白质含量的研究

用ＤＡＰＩ和ＦＩＴＣ染色荧光显微术测量花粉ＤＮＡ和蛋白质含量，探讨光敏核不育水稻农垦５８ｓ在自然长日照下花粉败育的生理生化机制。研究表明，败育从花粉母细胞减数分裂初期已经开始，此期农垦５８ｓ的ＤＮＡ绝对含量和蛋白质相对含量均低于对照农垦５８，在单核中期降低更加明显，因而，阻止了花粉的进一步发育，引起败育。表明农垦５８ｓ育性与核酸、蛋白质代谢有关。

温敏核不育系株1S籼粳的属性研究

温敏核不育系株1S是生产上广泛应用的水稻优良早籼型不育系品种。以典型籼稻和粳稻为对照,采用ISSR、SRAP和TRAP三种分子标记方法对株1S核DNA进行分子遗传学分析。结果表明,株1S核DNA以籼型基因为主,但含有部分粳型特异性片段,具有一定的粳型血缘;3种分子标记方法都能建立株1S所特有的分子指纹。对株1S叶绿体DNA中ORF100、ORF29-TrnCGCA、TrnTUGU–TrnLUAA、rps16基因内含子等序列分析表明,株1S为籼型叶绿体,对照材料培矮64S、准S为粳型叶绿体;株1S在TrnTUGU–TrnLUAA片段中存在2个特异碱基。利用籼型细胞质和含有适量粳稻血缘的两用核不育系可能是长江中下游双季稻区高产稳产早稻组合的育种途径。

一种快速提取玉米基因组DNA的方法

实验以SDS为主要提取试剂,建立了用于玉米叶片基因组DNA的微量快速提取方法。结果表明:利用此方法提取的玉米叶片基因组DNA具有使用药品少、操作简单、迅速、成本低等优点,每人每工作日可以提取180～250个DNA样品,一个样品可供80～100次PCR反应使用。此DNA提取方法可有效用于玉米的转基因成分检测。

应用套式聚合酶链反应技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

目的依据孕妇血浆中存在游离胎儿ＤＮＡ的理论，寻找一种非创伤性产前基因诊断的新方法。方法用套式聚合酶链反应技术对１２例１２～４０孕周的初产妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ进行特异性扩增，扩增的基因为Ｙ染色体短臂单拷贝基因片段（ＤＹＳ１４基因），扩增片段的大小分别为２３９ｂｐ和１９８ｂｐ，１２例孕妇均采用母体血浆直接作为模板进行套式聚合酶链反应扩增。结果１０例妊娠男性胎儿孕妇中有８例血浆中出现ＤＹＳ１４基因扩增带，检出率为８０％（８／１０），其中６例两次套式聚合酶链反应扩增均为阳性，２例第２次扩增才出现阳性扩增带，套式聚合酶链反应可明显提高检测灵敏度（从６０％提高到８０％）。２例妊娠女性胎儿孕妇血浆两次均未出现阳性扩增带，无一例假阳性结果。本项研究的性别总符合率为８３３％（１０／１２）。结论套式聚合酶链反应检测母体血浆中游离胎儿ＤＮＡ的灵敏度和特异性较高，作为非创伤性产前基因诊断的一种方法可应用于临床。

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA(RAPD)的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠(SDS)法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。