超高速液相测定西洋参中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1的含量研究

目的:建立测定西洋参中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1含量的超高速液相色谱法。方法:采用Waters Acquity UPLC BEHC_(18)(100 mm×2.1 mm,1.7μm)柱分离,以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2ml·min^(-1),柱温为35℃,在203 nm处检测。结果:人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1在测定范围内有良好的线性关系,其平均回收率为97.36%～99.23%,RSD为1.16%～1.39%(n=6)。结论:本法操作简便,准确度高,重复性好,可作为西洋参质量控制方法之一。

HPLC法同时测定腰息痛胶囊中3种活性成分含量

目的 建立HPLC法同时测定腰息痛胶囊中的三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。方法 采用Omini MP C_(18)(4.6 mm×200 mm,5μm)为色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速为0.7 ml/min;检测波长为203 nm;柱温为25℃。结果 三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)分别在40.402~1010.500,40.480~1012.000,41.480~1037.000μg范围内呈线性关系(r<0.99);平均加样回收率分别为97.8%,97.5%,98.7%(RSD<2.0%,n=6);精密度、重复性等试验均符合规定。结论 此法简便易行、结果科学,可为中西药复方制剂腰息痛胶囊中的3种皂苷类成分定量控制提供技术依据。

人参皂甙Rb_1与Re对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的 观察人参皂甙Rb1与Re对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响 ,并比较两者的效应差异。方法 结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血再灌注动物模型 ;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞 ,利用光学显微镜进行细胞计数。结果 (1)透射电镜发现缺血再灌注组缺血区出现心肌凋亡细胞 ,假手术组未发现心肌凋亡细胞 ;(2 )缺血再灌注组心肌细胞凋亡数为 134 45± 45 6 1个 /视野 ,人参皂甙Rb1治疗组 5 1 6 5± 13 71个 /视野 ,人参皂甙Re治疗组 90 6 6± 19 2 2个 /视野 ,三组间有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论 心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡 ,人参皂甙Rb1和Re均可显著减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡。证实人参皂甙Rb1与Re均有抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡 ,减轻心肌缺血再灌注损伤的作用 ;人参皂甙Rb1的抗心肌细胞凋亡作用较Re的效果为佳。

HPLC法测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1的含量

目的:建立同时测定人参三七颗粒中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Sunfire C_(18)(150mm×4.6mm,5μm)分析柱.流动相以乙腈-水梯度洗脱;检测波长为203nm;柱温30℃;流速1.0ml·min^(-1)。结果:人参皂苷Rg_1,Re,Rb_1和三七皂苷R_1之间有较好的分离度,4种成分在线性范围內与峰面积之间线性关系良好,人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1和三七皂苷R_1加样回收率分别为99.83%,97.84%,98.43%,97.34%,RSD分别为2.08%,1.66%,1.73%和1.42%(n:5)。结论:本方法可同时测定人参三七颗粒中的人参皂苷Rg_1,Re,Rb_1和三七皂苷R_1含量。

人参皂苷Rb_1对化疗致卵巢早衰大鼠性激素影响

目的探讨人参皂苷皂苷Rb_1对环磷酰胺所致卵巢早衰大鼠性激素的影响。方法选用60只2～3月龄具有正常动情周期雌性Wistar大鼠随机分对照组、给药组和模型组。采用放射免疫法检测卵巢早衰大鼠卵巢促卵泡成熟素(FSH)和雌二醇(E2)水平,同时对比观察人参皂苷皂苷Rb_1治疗后对其性激素水平的影响。结果给药组与模型组的E2浓度差异有统计学意义(P>0.05);给药组的FSH浓度低于模型组(P<0.05)。结论 Rb_1可能是通过上调E2水平、下调FSH水平减少卵巢颗粒细胞的凋亡,进而对化疗所致卵巢早衰起到一定的治疗作用,延缓其衰老。

UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、拟人参皂苷F_(11)、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F1的含量测定方法。方法:使用Waters ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为40℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果:6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r>0.998),平均加样回收率(RSD)分别为96.9%(2.2%)、100.1%(1.5%)、97.2%(1.8%)、98.5%(2.3%)、96.6%(2.8%)、100.2%(3.5%)。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。

三七皂甙Rg_1、Rb_1对脂多糖引起的大鼠肝细胞凋亡及相关基因表达的保护作用

目的:探讨三七皂甙对急性肝损害肝细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法:采用脂多糖(LPS)造成大鼠急性肝损伤模型,用 TUNEL 染色法检测肝细胞凋亡,用免疫组化法测定 bcl-2、bax、Fas、FasL 凋亡相关基因在肝内的表达,观察三七皂甙 Rg_1和 Rb_1对上述指标的作用。结果:TUNEL 法检测出细胞凋亡高峰时间在 LPS 处理后12～15 h。免疫组化法检测出 bcl-2、bax、Fas、FasL 凋亡相关基因在肝内表达的时相性变化。Rg_1、Rb_1对 bcl-2没有明显影响,而显著抑制促凋亡基因 bax、Fas、FasL 的表达。结论:LPS处理启动和促进了肝细胞凋亡的相关基因的表达,而 Rg_1、Rb_1通过抑制促凋亡基因表达而减少肝细胞凋亡。

高效液相色谱法测定西洋参冲剂中人参皂甙Rb_1的含量

采用固相萃取净化技术及高效液相色谱法，测定了西洋参冲剂中人参皂甙Rb1的含量，结果在12.5～200μg／ml范围内，Rb1的含量与峰面积呈良好线性，平均回收率及RSD分别为：101．3±3．2％（0．4mg，n＝5）；101．2±2．6％（0．2mg，n＝5）；99．0±4．4％（0．1mg，n＝5）。最小检出量为0．3μg，本法简便、快速、准确。

HPLC法测定跌打片中人参皂苷Rg_1和人参皂苷Rb_1的含量

目的:建立高效液相色谱法测定跌打片中人参皂苷Rg★和人参皂苷Rb★的含量测定方法。方法:采用Luna C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);柱温:35℃;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速1.0 ml·min^(-1);检测波长203 nm。结果:人参皂苷Rg★线性范围为0.340～5.094μg(r=1.000 0),人参皂苷Rb★线性范围为0.303～0.454μg(r=1.000 0);平均加样回收率:人参皂苷Rg_1★为97.17%,RSD=1.09%(n=6),人参皂苷Rb★为102.63%,RSD=1.18%(n=6)。结论:该方法简便可靠,可用于跌打片的质量控制。

人参皂苷Rb_(1)治疗非酒精性脂肪性肝病药理作用的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成为全球最常见的慢性肝病,主要表现为肝脏中脂肪过度沉积,并可进一步导致肝纤维化,以及肝硬化和肝细胞癌等终末期肝病。NAFLD发生和发展的分子机制尚不完全清楚,目前还没有批准的药物用于治疗NAFLD。人参皂苷Rb_(1)是人参中最丰富和最具生物活性的分子,具有调节糖脂代谢、抗炎、抗氧化和神经保护等多种药理活性。就NAFLD发病机制及人参皂苷Rb_(1)治疗NAFLD药理作用进行简要综述,为今后人参皂苷Rb_(1)的研究和临床治疗提供参考。

地黄除痹乳膏的质量标准研究

目的建立地黄除痹乳膏的质量标准。方法用薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)鉴别地黄除痹乳膏中地黄、当归、三七;用双波长高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定梓醇、地黄苷D、阿魏酸、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)的含量。结果TLC特征斑点清晰,且阴性样品无干扰。梓醇、地黄苷D、阿魏酸、三七皂苷R_(1)、人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Rb_(1)质量浓度分别在9.82~157.12、11.88~190.08、2.68~42.88、10.64~170.24、24.24~387.84、20.88~334.08μg·mL-1范围内与其峰面积线性关系良好(r≥0.9993);平均回收率分别为96.89%、100.60%、104.32%、98.62%、101.76%、95.87%,RSD均小于1.5%。结论建立的鉴别及含量测定方法准确、可靠,可用于地黄除痹乳膏的质量评价。

HPLC-ELSD法同时测定复方丹参片中4种皂苷的含量

目的:建立复方丹参片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd的含量测定方法。方法:采用HPLC-ELSD法,使用C_18色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL·min^-1,柱温25℃,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,载气流速1.5L·min^-1。结果:目标峰分离良好,三七皂苷R1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb_1、人参皂苷Rd的线性范围分别为5.14～102.80μg·mL^-1、20.16～322.56μg·mL^-1、40.24～402.40μg·mL^-1、10.06～100.60μg·~mL-1,平均回收率分别为98.1%、96.7%、101.5%和98.1%。结论:该方法简便、准确、耐用性好,可用于复方丹参片中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd含量的测定。

朝鲜红参中人参皂苷类成分含量测定及指纹图谱研究

目的：建立可同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg15种成分含量和指纹图谱的HPLC方法。方法：采用DiscoveryC18（4.6×250mm,5μm）柱,流动相为水（A）-乙腈（B）梯度洗脱;流速1.0ml min-1,柱温为25℃,检测波长为203nm,并用计算机辅助相似性评价系统对指纹图谱进行了相似度分析。结果：朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1的线性范围分别为1.077~5.385μg,1.046~5.230μg,0.0953~0.4765μg,1.018~5.090μg,0.973~4.865μg,相关系数分别为0.9999,0.9999,0.9995,0.9995,0.9996。人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1平均回收率分别为96.55%、101.4%、99.08%、99.92%、96.00%;RSD分别为1.6%、1.2%、1.5%、1.2%、1.3%。不同规格的朝鲜红参之间及朝鲜红参与国产红参都具有较好的相关性。结论：该方法重复性好,可以用来同时测定朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1五种成分的含量,14批不同规格的朝鲜红参中人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re和Rg15种成分含量存在差异,但总体而言,朝鲜红参与国产红参在人参皂苷含量和指纹图谱上无明显差异。

人参皂苷Rg3对低氧条件诱导的Hep-2细胞作用机制的初步研究

目的:研究人参皂苷Rg3对低氧条件下人喉鳞癌细胞Hep-2中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:通过体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组和阳性对照组(顺铂)。人参皂苷Rg3作用24 h后,应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α和VEGF mRNA表达的变化。结果:在低氧条件下,Rg3组和顺铂对照组的Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白表达低于阴性对照组(P<0.05);Rg3组的HIF-1α和VEGF mRNA水平明显低于阴性对照组(P<0.05),顺铂组的HIF-1α和VEGF mRNA水平无明显变化。结论:低氧条件下,人参皂苷Rg3抑制Hep-2细胞中的HIF-1α和VEGF蛋白和mRNA的表达,这可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一。

HPLC法同时测定复方丹参滴丸中7个活性成分的含量

目的:建立同时分析测定复方丹参滴丸中7种活性成分(丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_1)的方法。方法:色谱柱为安捷伦Poroshell 120 SB-C_(18)(100mm×3.0 mm,2.7μm),以乙腈为流动相A,0.05%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流速:1.0 ml·min^(-1);检测波长分别为280,210 nm。结果:丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸B、三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_1的线性范围分别为0.020～0.408μg(r=0.999 9),0.020～0.401μg(r=0.999 8),0.021～0.415μg(r=0.999 9),0.004～0.080μg(r=0.999 9),0.004～0.080μg(r=0.999 9),0.004～0.080μg(r=0.999 9),0.004～0.080μg(r=0.999 8);平均加样回收率97.1%～102.4%,RSD<1.7%(n=9)。结论:该方法操作简单,重复性好,为评价和监控复方丹参滴丸的质量提供可靠的方法。

一测多评法同时测定三七伤药片中6种活性成分

目的:建立一测多评法(QAMS)测定三七伤药片中6种活性成分含量。方法:采用HPLC法,以Waters Sunfire ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为可变波长(0 min,230 nm;10 min,283 nm;25 min,203 nm),柱温:30℃,进样量:10μl。以柚皮苷为参照物,应用QAMS测定芍药苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和人参皂苷Re的相对较正因子并计算其含量,同时用外标法测定以上6种有效成分的含量,并将两种结果进行分析比校。结果:一测多评法测得的芍药苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1和人参皂苷Re 5种成分计算值与外标法测定值差异无统计学意义(P>0.05)。结论:QAMS法可用于三七伤药片6种指标性成分的含量测定,且方法简单、有效、结果准确。

银杏绞股蓝胶囊的质量控制

目的:制定银杏绞股蓝胶囊的质量控制方法。方法:采用HPLC法测定银杏绞股蓝胶囊中含有的银杏总黄酮醇苷和人参皂苷Rb_1的含量;通过急性毒性实验验证银杏绞股蓝胶囊的安全用量。结果:HPLC法测得总黄酮醇苷中槲皮素、山柰素、异鼠李素进样量分别在0.06～0.75μg(r=0.9999)、0.06～0.75μg(r=0.9998)、0.04～0.50μg(r=0.9998)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.12%,98.96%,98.66%;HPLC梯度洗脱法测定绞股蓝总苷中人参皂苷Rb_1的含量,Rb1在进样量0.4～8.0μg(r=0.9996)范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为96.98%;银杏绞股蓝胶囊口服途径的小鼠LD_(50)大于3 200mg·kg^(-1),表明在临床常用剂量下是安全的。结论:建立的HPLC方法简便可行,准确可靠,可用于该胶囊的质量控制。

3种皂苷单体对三七种子萌发及幼苗生长的影响

为探讨三七皂苷单体的化感自毒作用,将3种不同的皂苷单体(人参皂苷Rg_1、Rb_1、三七皂苷R_1)分别添加到灭菌和未灭菌的土壤中,研究其在不同土壤介质中对三七种子萌发及幼苗生长的影响及差异。结果表明:(1)灭菌后的土壤更有利于三七生长,发芽率、发芽势、茎粗、最长根长等指标均有显著提高。(2)人参皂苷Rg_1和Rb_1对三七的种子萌发和幼苗生长均有不同程度的抑制作用;三七皂苷R_1对三七种子萌发具有一定的抑制作用,但对三七幼苗生长表现为促进作用。3种皂苷单体的综合化感效应由强别弱依次为:人参皂苷Rb_1(-0.274)>人参皂苷Rg_1(-0.112)>三七皂苷R_1(0.004),人参皂苷Rb_1的化感抑制效应最强。(3)土壤灭菌状况和皂苷单体种类互作对三七幼苗茎粗、苗高、叶片数3个指标有显著影响。土壤微生物与皂苷协同互作,进而加剧了三七的自毒作用,是导致三七连作障碍的重要原因之一。

人参皂苷Rb_(1)治疗性给药的抗癫痫作用及机制研究

目的探讨人参皂苷Rb_(1)治疗性给药的抗癫痫作用及其作用机制。方法采用戊四唑(PTZ)点燃的方法建立小鼠癫痫模型。将造模成功的小鼠随机分为PTZ组、丙戊酸钠(VPA)组和人参皂苷Rb_(1)低(10 mg·kg^(-1))、中(20 mg·kg^(-1))、高(40 mg·kg^(-1))剂量组。各给药组分别腹腔注射相应药物30 d,每日1次。通过观察给药后不同时间点癫痫发作级别和发作潜伏期,评估小鼠癫痫发作的严重程度和治疗性给药的恢复情况。采用生化法检测各组小鼠大脑皮层和海马中谷氨酸(Glu)含量和谷氨酰胺合成酶(GS)活性;Fluoro-Jade B(FJB)染色观察海马CA1区的神经细胞损伤情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠大脑皮层和海马中谷氨酸转运体1(GLT-1)和GS mRNA表达;Western Blot法检测小鼠大脑皮层和海马GLT-1和GS蛋白表达。结果治疗性给药30 d后,与PTZ组相比,人参皂苷Rb_(1)低、中、高剂量组和VPA组小鼠癫痫发作级别降低,发作潜伏期延长,大脑皮层和海马中Glu含量降低,GS活性升高,GLT-1、GS mRNA表达和蛋白表达增加,海马CA1区FJB阳性细胞数量减少(P<0.05,P<0.01)。结论人参皂苷Rb_(1)治疗性给药能有效缓解癫痫小鼠的发作严重程度,改善神经细胞损伤,发挥抗癫痫作用,其机制可能与上调谷氨酸-谷氨酰胺(Glu-Gln)循环上的关键环节GLT-1和GS的表达,调节Glu代谢有关。

人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常的作用研究

探讨人参皂苷Rb_(1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetmhydropyridine,MPTP)诱导的小鼠多巴胺能神经元损伤及小鼠行为学异常的作用及可能的机制。体外分离培养小鼠多巴胺能神经元,给予MPTP(10μmol/L)损伤和不同剂量的Rb_(1)(10、20、40μmol/L)药物治疗处理,观察神经元形态。对C57B/L6小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg)构建帕金森模型,灌胃给予不同剂量Rb_(1)(10、20、40 mg/kg)药物治疗,采用旷场实验及爬杆实验对小鼠进行行为学检测;采用蛋白免疫印迹反应(Western blot)检测纹状体TH、CaMKII、FP1和Bcl-2的表达。结果显示,与对照组相比,不同剂量人参皂苷Rb_(1)可以明显改善MPTP诱导的神经元损伤;人参皂苷Rb_(1)处理能显著改善MPTP诱导的PD模型小鼠行为学异常;人参皂苷Rb_(1)可以显著上调MPTP所造成的TH、Bcl-2的减少,对CaMKII及FP1表达的减少没有显著作用。人参皂苷Rb_(1)对MPTP诱导的神经元损伤和小鼠行为学异常具有明显的改善作用,其机制可能与逆转TH和Bcl-2的表达有关。