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Expression of germ cell nuclear factor in mouse germ cells and sperm during postnatal period 被引量:11
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作者 ChenXu Zong-YaoZhou +1 位作者 Qiang-SuGuo Yi-FeiWang 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2004年第3期217-222,共6页
Aim: To assess the spatial and temporal expression of germ cell nuclear factor (GCNF) in male mouse germ cells during postnatal development and in sperm before and after capacitation. Methods: The indirect immun-ofluo... Aim: To assess the spatial and temporal expression of germ cell nuclear factor (GCNF) in male mouse germ cells during postnatal development and in sperm before and after capacitation. Methods: The indirect immun-ofluorescence method with anti-GCNF antiserum was used to investigate the GCNF expression in mice at day 8, 10, 14, 17, 20, 28, 35, 70, and 420 after birth and in sperm before and after capacitation. Results: With the proceeding of spermatogenesis, GCNF was first detected in the nuclei of spermatogonia and a few early stage primary sperma-tocytes at day 8, which was increased gradually at day 10 to 14 inclusive. From day 17 to day 20, the GCNF was concentrated in round spermatids, while both spermatogonia and early stage primary spermatocytes became GCNF negative. From day 28 until day 420, strong GCNF expression was shown in round spermatids and pachytene spermatocytes, while spermatogonia, early primary spermatocytes and elongating spermatids were all GCNF negative. In addition, it was also found that GCNF was localized on the acrosomal cap region of spermatozoa and there was a big change in GCNF expression during capacitation, from 98 % GCNF positive before capacitation to about 20 % positive following capacitation. The localization of GCNF in caput and cauda spermatozoa was similar. Conclusion: GCNF may play important roles in spermatogenesis, capacitation and fertilization. 展开更多
关键词 germ cell nuclear factor SPERM spatial expression temporal expression MOUSE
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Spatial and temporal expression of germ cell nuclear factorin murine epididymis 被引量:7
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作者 Zong-YaoZhou ChenXu +3 位作者 Qiang-SuGuo Yuan-XinHu Yong-LianZhang Yi-FeiWang 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2004年第1期23-28,共6页
Aim: To investigate the spatial and temporal expression of germ cell nuclear factor (GCNF) in mouse and rat epididymis during postnatal period. Methods: The epididymal sections from different postnatal days were stain... Aim: To investigate the spatial and temporal expression of germ cell nuclear factor (GCNF) in mouse and rat epididymis during postnatal period. Methods: The epididymal sections from different postnatal days were stained for GCNF by the indirect immunofluorescence technique and digital photographs were taken by a Carl Zeiss confocal microscope. Results: GCNF was first detected on day 12 in mouse epididymis and day 14 in rat epididymis. The highest expression of GCNF was observed on day 35 in both mouse and rat epididymis. In adults, GCNF exhibited a region-specific expression pattern, i.e., it was expressed predominantly in the initial segment, caput and proximal corpus of rat epididymis and was abundant in the proximal corpus of mouse epididymis. GCNF could be found in the nuclei of the principal, apical, narrow, clear and halo cells. Conclusion: GCNF may play an important role in epididymal differentiation and development and in sperm maturation. 展开更多
关键词 germ cell nuclear factor EPIDIDYMIS spatial and temporal expression
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过表达GCNF诱导骨髓间充质干细胞凋亡的相关研究
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作者 刘又斌 张鹏 刘宗军 《河南医学研究》 CAS 2017年第20期3649-3652,共4页
目的研究过表达生殖细胞核因子(GCNF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的可能机制。方法通过过表达GCNF腺病毒上调BMSCs中GCNF表达水平,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,MTT检测细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡,Caspase3... 目的研究过表达生殖细胞核因子(GCNF)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的可能机制。方法通过过表达GCNF腺病毒上调BMSCs中GCNF表达水平,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,MTT检测细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡,Caspase3/8/9检测细胞凋亡蛋白活性。结果 BMSCs细胞中GCNF过表达后,GCNF蛋白亚细胞定位于细胞核,细胞活力降低,凋亡通路被激活。结论腺病毒GCNF过表达能降低大鼠BMSCs细胞活力,增加其凋亡水平。 展开更多
关键词 生殖细胞核因子 骨髓间充质干细胞 凋亡 半胱氨酸蛋白酶
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生殖细胞核因子及其相关因子在恶性生殖细胞肿瘤中的表达 被引量:8
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作者 高启云 王菊 +1 位作者 尹亚西 周宗瑶 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第5期616-621,共6页
为研究生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达,揭示GCNF及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中关系。运用免疫组化SP法分别检测41例男女生殖系统恶性肿瘤及8例无瘤变卵巢组织及10例无瘤变睾丸组织中GCNF及Oct-4的表达。结果显示... 为研究生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达,揭示GCNF及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中关系。运用免疫组化SP法分别检测41例男女生殖系统恶性肿瘤及8例无瘤变卵巢组织及10例无瘤变睾丸组织中GCNF及Oct-4的表达。结果显示GCNF在所有的恶性生殖细胞肿瘤及无瘤变的睾丸组织均呈阳性表达,定位于肿瘤细胞的细胞核,Oct-4在未成熟畸胎瘤,无性细胞瘤及精原细胞瘤呈阳性表达,定位于肿瘤细胞的细胞核,在其他类别的恶性生殖细胞肿瘤及无瘤变卵巢组织及睾丸组织中不表达。由此可知,GCNF和Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达呈负相关,二者的表达强度可能与肿瘤细胞的分化状态有关。 展开更多
关键词 生殖细胞肿瘤 生殖细胞核因子 OCT-4 免疫组织化学
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生殖细胞核因子在精原干细胞体外培养分化中的表达 被引量:2
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作者 王菊 陈芳 +1 位作者 宋勇 周宗瑶 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期640-643,共4页
目的将分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)体外培养并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。方法用干细胞因子(SCF)诱导小鼠SSCs向精母细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后... 目的将分离纯化的小鼠精原干细胞(SSCs)体外培养并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。方法用干细胞因子(SCF)诱导小鼠SSCs向精母细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。结果小鼠SSCs向精母细胞诱导分化前后,在倒置相差显微镜下进行形态学观察,细胞形态未发生明显变化,仍然呈圆形或椭圆形,核较大;间接免疫荧光及RT-PCR结果均显示,原代培养的小鼠SSCs呈现GCNF阴性,但是向精母细胞诱导分化2d后,GCNF开始表达。结论 GCNF在体外培养小鼠SSCs向精母细胞分化的早期有表达,提示GCNF可能参与了SSCs的早期分化。 展开更多
关键词 精原干细胞 生殖细胞核因子 间接免疫荧光 反转录-聚合链反应 小鼠
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Oct-4及生殖细胞核因子在精原干细胞体外分化前后的表达 被引量:1
6
作者 王菊 宋勇 +1 位作者 王苗 周宗瑶 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期575-577,共3页
目的:检测Oct-4和生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠精原干细胞(SSCs)诱导分化前后的表达。方法:体外分离培养小鼠SSCs,用干细胞因子(SCF)诱导其向精母细胞方向分化,通过间接免疫荧光显色和RT-PCR,检测Oct-4和GCNF在小鼠SSCs诱导... 目的:检测Oct-4和生殖细胞核因子(GCNF)在小鼠精原干细胞(SSCs)诱导分化前后的表达。方法:体外分离培养小鼠SSCs,用干细胞因子(SCF)诱导其向精母细胞方向分化,通过间接免疫荧光显色和RT-PCR,检测Oct-4和GCNF在小鼠SSCs诱导分化前后的表达。结果:Oct-4在小鼠SaCs诱导前有表达,诱导2d后表达下降;而GCNF在小鼠SaCs诱导前呈阴性表达,向精母细胞诱导2d后呈阳性表达。结论:GCNF可能通过抑制Oct-4的表达促使SSCs分化。 展开更多
关键词 OCT-4 生殖细胞核因子 精原干细胞 分化 间接免疫荧光
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生殖细胞核因子及Oct-4在P19细胞系诱导分化中的表达
7
作者 王菊 熊承良 +4 位作者 高启云 李红钢 王苗 赵凯 周宗瑶 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期349-352,共4页
目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化... 目的体外培养未成熟畸胎瘤细胞(P 19细胞)并诱导分化,检测生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。方法用全反式维甲酸(ATRA)诱导P 19细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR方法检测GCNF及Oct-4在P 19细胞诱导分化前后的表达。结果 Oct-4在P 19细胞诱导前呈强阳性表达,诱导2 d后表达下降;而GCNF在P 19细胞诱导前呈阴性表达,诱导2 d后呈阳性表达。结论 GCNF参与了恶性生殖细胞肿瘤的体外分化。GCNF可能是通过下调Oct-4基因的表达参与了恶性生殖细胞肿瘤的分化。 展开更多
关键词 OCT4 生殖细胞核因子 P 19细胞 分化 间接免疫荧光 反转录-聚合酶链反应
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NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究
8
作者 魏强 魏霞飞 +3 位作者 甘春杨 张文露 黄爱龙 胡接力 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期289-295,共7页
目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海... 目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1.000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。 展开更多
关键词 乙肝病毒 核受体 生殖细胞核因子(NR6A1) 启动子 增强子
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牛磺酸缓解镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1途径 被引量:3
9
作者 柳梦琪 张广路 +2 位作者 郭长权 杨婷宇 米玉玲 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期619-628,共10页
为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP ... 为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)、蛋白质印迹法、荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和免疫荧光染色等方法,从细胞增殖、内质网应激、线粒体凋亡、核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor-erythroid 2 related factor-2/hemeoxygenase-1, Nrf2/HO-1)信号通路等方面研究其作用机制。结果显示,镉导致鸡胚精原细胞发生了氧化损伤。与对照组相比,镉处理组精原细胞出现了细胞核固缩、空泡化和染色质周缘化等变化,且镉处理后的细胞活性和精原细胞数目显著降低,过氧化氢、丙二醛和活性氧水平显著升高,超氧化物歧化酶活性显著降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞显著增多,内质网应激相关基因(GRP78和XBP-1)和凋亡相关基因(Cyt C、p53和caspase 9)mRNA表达水平显著上升,Nrf2、p-Nrf2蛋白的表达和HO-1mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。然而,牛磺酸与镉联合处理后,镉引起的氧化损伤得到明显缓解,鸡胚精原细胞数目和睾丸细胞活性回升,抗氧化水平和内质网应激得到改善,凋亡细胞显著减少,Nrf2蛋白表达和细胞增殖能力趋于正常。以上结果说明,牛磺酸一方面通过恢复氧化系统与抗氧化系统平衡,另一方面通过抑制睾丸细胞凋亡和恢复睾丸细胞增殖,缓解镉引起的生殖毒性。 展开更多
关键词 牛磺酸 氧化损伤 核转录因子E2相关因子2 血红素加氧酶-1 生殖细胞
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宫颈癌HeLa细胞株GCNF和Oct-4诱导分化表达 被引量:1
10
作者 王菊 熊承良 +3 位作者 李红刚 王苗 赵凯 周宗瑶 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2014年第15期1153-1157,1163,共6页
目的:检测生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)及Oct-4在宫颈癌HeLa细胞诱导分化前后的表达。方法:用全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)诱导HeLa细胞分化,HE染色观察诱导前后细胞的形态变化;通过免疫组化和半定量的... 目的:检测生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,GCNF)及Oct-4在宫颈癌HeLa细胞诱导分化前后的表达。方法:用全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,ATRA)诱导HeLa细胞分化,HE染色观察诱导前后细胞的形态变化;通过免疫组化和半定量的RT-PCR方法,检测GCNF及Oct-4在HeLa细胞诱导分化前后的表达。应用SPSS 13.0软件进行统计学处理。结果:随着诱导时间的延长HeLa细胞体积变小,圆形细胞逐渐增多,细胞核开始固缩;GCNF在诱导前后的HeLa细胞中均有表达,随着诱导时间延长其表达逐渐增强但3d后表达强度开始下降,F=14.67,P<0.001。3d组和1d组、2d组和5d组比较差异无统计学意义;但与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.05;Oct-4在诱导前后的细胞中均不表达。结论:GCNF参与了肿瘤细胞的体外分化;在体外培养的宫颈癌细胞株中,GCNF基因可能关闭了Oct-4的激素反应元件。 展开更多
关键词 子宫肿瘤 OCT-4 生殖细胞核因子 HELA细胞 分化
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生殖细胞核因子GCNF在宫颈癌中的表达 被引量:1
11
作者 王苗 王菊 周宗瑶 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2013年第9期1504-1507,共4页
目的:探讨生殖细胞核因子(GCNF)在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展的作用。方法:运用免疫组织化学Envision法和RT-PCR技术检测GCNF蛋白和mRNA在正常宫颈组织、上皮内瘤变组织及宫颈鳞癌组织中的表达。结果:GCNF蛋白在正常宫颈组织... 目的:探讨生殖细胞核因子(GCNF)在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展的作用。方法:运用免疫组织化学Envision法和RT-PCR技术检测GCNF蛋白和mRNA在正常宫颈组织、上皮内瘤变组织及宫颈鳞癌组织中的表达。结果:GCNF蛋白在正常宫颈组织、上皮内瘤变组织(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ)和宫颈鳞癌组织中的表达率分别为90.0%(18/20)、78.3%(18/23)、45.0%(9/20)、33.3%(9/27)和3.4%(4/29),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR结果显示GC-NF mRNA的表达与GCNF蛋白相一致,即宫颈鳞癌组织与正常宫颈组织相比GCNF mRNA的表达显著降低(P<0.05)。结论:初步认为GCNF蛋白和mRNA表达的下调或缺失可能是宫颈癌发生的一个早期信号,以期为宫颈癌的靶向治疗提供研究方向。 展开更多
关键词 宫颈癌 生殖细胞核因子 宫颈上皮内瘤变
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GCNF在牦牛睾丸不同发育阶段中的表达与定位 被引量:2
12
作者 闫翠霞 王强龙 +5 位作者 张同享 何翃闳 潘阳阳 余四九 徐庚全 秦玉洁 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期388-394,共7页
生殖细胞核因子(GCNF)是核受体超家族的一员。相关研究发现,GCNF在睾丸和卵巢中高表达,可能在配子减数分裂中发挥作用。为探究GCNF在牦牛睾丸中的表达与定位,采集牦牛不同发育阶段(幼年、成年、老年)的睾丸组织,采用实时荧光定量PCR(qRT... 生殖细胞核因子(GCNF)是核受体超家族的一员。相关研究发现,GCNF在睾丸和卵巢中高表达,可能在配子减数分裂中发挥作用。为探究GCNF在牦牛睾丸中的表达与定位,采集牦牛不同发育阶段(幼年、成年、老年)的睾丸组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测GCNF基因在组织中的相对表达量;采用Western-blot(WB)检测GCNF蛋白在不同年龄阶段睾丸中的表达水平;免疫组织化学方法分析GCNF在牦牛睾丸分布特征。qRT-PCR和WB检测结果显示,GCNF在牦牛睾丸不同年龄阶段均有表达,且表达存在差异性。幼年期GCNF在基因水平和蛋白水平表达量最高且显著高于成年期和老年期;老年期显著高于成年期,成年期表达量最低。免疫组织化学结果显示:在睾丸不同发育阶段GCNF的表达定位无明显差异,主要在生精细胞和圆形精子细胞中表达,间质细胞和支持细胞中也有少量表达。上述研究结果表明,GCNF可能参与精子的发生及分化变形,这为牦牛生殖生育研究提供了理论基础和新的依据。 展开更多
关键词 生殖细胞核因子 睾丸 生殖 牦牛:圆形精子 表达 定位
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生殖细胞核因子在不同成长期大鼠附睾中的表达 被引量:4
13
作者 张秋养 邱曙东 +1 位作者 杨洁 王志勇 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第13期1126-1129,共4页
目的 探讨生殖细胞核因子 (GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布。方法 应用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术 ,检测GCNF蛋白在出生后 7、14、2 8、4 5、6 0、90天龄和 18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化 ,并通过凝胶成像及图像分... 目的 探讨生殖细胞核因子 (GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布。方法 应用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术 ,检测GCNF蛋白在出生后 7、14、2 8、4 5、6 0、90天龄和 18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化 ,并通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行统计学分析。结果 GCNF表达于出生后 14天龄至 18月龄大鼠附睾上皮的细胞核内 ,其表达呈明为的年龄相关性和附睾区段以及细胞特异性。 14天龄附睾上皮内出现散在阳性细胞核 ,2 8天龄时阳性细胞数和阳性强度明显增强 ,4 5天龄时达到高峰。成年后阳性细胞数维持不变而阳性染色强度开始逐渐减弱 ,18月龄时减弱非常明显。附睾管上皮内的各种细胞如主细胞、基细胞、顶细胞、狭窄细胞和亮细胞等均呈GCNF阳性染色 ,从附睾起始段到尾段到尾段均有阳性染色 ,其中以近端头部最强 ;远端尾部主细胞核阳性减弱非常明显甚至呈阴性 ,而亮细胞核则阳性较强。 14d后各年龄组附睾抽提物中均可见 5 50 0 0处有GCNF特异性条带 ,其年龄变化与免疫组化结果一致。结论 GCNF在大鼠附睾上皮内的表达与附睾上皮分化和发育过程明显相关 ,且其分布表现出明显的附睾区段和细胞特异性。 展开更多
关键词 生殖细胞核因子 大鼠 成长期 附睾 基因表达 gcnf 免疫组织化学 蛋白质免疫印迹
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