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Expression analysis of ThGLP, a new germin-like protein gene, in Tamarix hispida 被引量:9
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作者 李慧玉 姜静 +1 位作者 王珊 刘菲菲 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第3期323-330,397,398,共10页
Germin and Germin-like protein (GLP) have various proposed roles in plant developmental stages and stress- related processes. A novel GLP cDNA clone was isolated from a cDNA library of Tamarix hispida. ThGLP, coded ... Germin and Germin-like protein (GLP) have various proposed roles in plant developmental stages and stress- related processes. A novel GLP cDNA clone was isolated from a cDNA library of Tamarix hispida. ThGLP, coded 225aa, possesses conserved motif of plant germin and Germin-like protein. ThGLP belongs to true germin subfamily through phylogenetic analyses. Gene expression profiles in roots and leaves were evaluated using real-time quantitative RT-PCR. The results show that the gene was highly induced by drought, salt, low temperature, CdCl2 and abscisic acid treatments. Our results demonstrate that the ThGLP gene is expressed in leaves and roots, is involved in different abiotic stress re-sponses and controlled by an ABA-dependent signaling pathway. 展开更多
关键词 germin-like protein (glp Tamarix hispida abiotic stress gene expression
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袖状胃切除术通过GLP-1激活cAMP/PKA通路拮抗血管外周脂肪组织炎症
2
作者 肖忠盛 张晓宁 +1 位作者 龙泓 肖友忠 《智慧健康》 2023年第22期31-34,共4页
目的基于GLP-1激活环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路探讨袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。方法选取SPF级六周龄雄性大鼠48只作为本次研究的对象,无差别分为空白组、袖状胃切除术组以及GLP-1受体激动剂组、GLP-1受体拮抗剂组E... 目的基于GLP-1激活环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)通路探讨袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。方法选取SPF级六周龄雄性大鼠48只作为本次研究的对象,无差别分为空白组、袖状胃切除术组以及GLP-1受体激动剂组、GLP-1受体拮抗剂组Exendin(9-39),对四组小鼠血管外周脂肪组织的cAMP/PKA水平以及炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平进行测定。结果(1)cAMP/PKA水平比较:GLP-1受体激动剂进一步升高袖状胃切除术小鼠血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,其拮抗剂显著降低血管外周脂肪组织cAMP/PKA水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α水平:GLP-1受体激动剂显著降低血管袖状胃切除术小鼠外周脂肪组织炎症,其拮抗剂显著提高血管外周脂肪组织炎症水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论GLP-1受体激动剂与拮抗剂对袖状胃切除术大鼠血管外周脂肪组织炎症以及cAMP/PKA水平均具有较强的相关性,表明GLP-1可能通过激活cAMP/PKA通路参与袖状胃切除术拮抗血管外周脂肪组织炎症。 展开更多
关键词 glp-1 环磷酸腺苷(cAMP) 蛋白激酶A(PKA) 袖状胃切除术 血管外周脂肪组织炎症
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GLP-2对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控 被引量:10
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作者 陈振勇 冯贤松 +1 位作者 杨鹏 周有生 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 2008年第8期760-763,共4页
目的探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控。方法建立梗阻性黄疸大鼠模型,造模后10d随机分组,每组10只。黄疸组皮下注射0.01mmol/LPBS0.5mL,实验甲组腹腔注射250g/(kg.d),实验乙组腹腔注射125g/(kg... 目的探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控。方法建立梗阻性黄疸大鼠模型,造模后10d随机分组,每组10只。黄疸组皮下注射0.01mmol/LPBS0.5mL,实验甲组腹腔注射250g/(kg.d),实验乙组腹腔注射125g/(kg.d)的GLP-2溶液0.5mL,每天2次,连续7d后处死。另设正常对照组,用免疫组化及Westernblots检测末端回肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1,Occludin及Claudin-1,Claudin-4的分布和表达,并用图像分析系统对Westernblots图像进行定量分析。结果正常情况下ZO-1,Occludin和Claudin-1染色强阳性率分别为70.0%,80.0%和70.0%。梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均,染色变淡,线条模糊。补充外源性GLP-2后,实验甲组的ZO-1,Occludin和Claudin-1染色有所恢复,且强阳性表达率分别从黄疸组的20.0%,30.0%和20.0%升至实验甲组的80.0%,90.0%和80.0%(均P<0.05);Claudin-4表达和分布变化不明显。实验乙组对紧密连接蛋白无影响。Westernblots图像定量分析得到相同的结果。结论梗阻性黄疸时,补充GLP-2可影响小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达;提示GLP-2能恢复和维持小肠黏膜上皮屏障的完整性。 展开更多
关键词 黄疸 梗阻性 类高血糖素多肽-2 紧密连接蛋白 肠屏障功能
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GLP-1对NAFLD大鼠肝功能及TLR4/NF-κB信号通路的影响 被引量:4
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作者 陈益耀 陈轶 +1 位作者 何周桃 蔡曼妮 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第1期26-29,共4页
目的研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝功能及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法将45只大鼠随机分成两组,正常饲料喂养15只,高脂饮食喂养30只使其形成NAFLD模型。在第10周,把高脂饲料喂养的28只老鼠随机分... 目的研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝功能及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法将45只大鼠随机分成两组,正常饲料喂养15只,高脂饮食喂养30只使其形成NAFLD模型。在第10周,把高脂饲料喂养的28只老鼠随机分成两组,模型对照组(14只)和GLP-1干预组(14只);正常饲料喂养的15只为正常对照组。之后对模型对照组和正常对照组大鼠进行注射生理盐水处理,GLP-1干预组大鼠注射利拉鲁肽处理;期间查看大鼠的活动、体质量、食欲、大小便等情况的变化。结果与正常对照组相比,模型对照组的大鼠其肝指数、肝质量、ALT、AST、TG、TC均明显升高(P<0.05),与模型对照组对比,GLP-1干预组大鼠的肝指数、肝质量、ALT、AST、TG、TC均明显下降(P<0.05);与正常对照组比较,模型对照组的TLR4和NF-κB蛋白表达上升(P<0.05),GLP-1干预组和模型对照组比较,TLR4和NF-κB蛋白的表达降低(P<0.05)。结论 GLP-1可明显扭转NAFLD大鼠的糖脂代谢絮乱和肝功能受损的情况,GLP-1可明显降低大鼠肝组织中TLR4和NF-κB的蛋白表达。 展开更多
关键词 NAFLD TLR4蛋白表达 NF-ΚB蛋白表达 glp-1
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以GLP-1受体为靶点的药物筛选模型的建立及功能鉴定 被引量:5
5
作者 黎思彤 郑雪萍 +4 位作者 杨学敏 聂涛 陈健文 刘培庆 李民 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期285-289,共5页
目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,... 目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,经G418压力筛选后获得稳定表达GLP-1R-GFP的293A细胞株,然后通过GFP荧光信号和Western blot检测GLP-1R-GFP融合蛋白在该细胞中的表达与分布;最后利用GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞,均相时间分辨荧光法检测细胞内cAMP含量变化。结果成功构建了GLP-1R-GFP-293A稳转细胞株,GLP-1RGFP蛋白主要分布在细胞膜表面,该细胞对GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生cAMP的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型,可对小分子和GLP-1类似物进行体外活性分析,为筛选GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。 展开更多
关键词 CAMP glp-1受体 细胞模型 融合蛋白 均相时间分辨荧光法 糖尿病
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检测HSA-GLP-1融合蛋白双抗体夹心ELISA方法的建立 被引量:2
6
作者 王秋实 刘运龙 +3 位作者 张玉民 陈知航 钱爱东 程远国 《生物技术通讯》 CAS 2013年第5期685-690,共6页
目的:为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度,建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法:采用双抗体夹心ELISA方法,以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹... 目的:为检测血清中HSA-GLP-1融合蛋白整体分子的浓度,建立一种特异、灵敏的定量检测食蟹猴体内HSA-GLP-1融合蛋白浓度的双抗体夹心ELISA的方法。方法:采用双抗体夹心ELISA方法,以GLP-1单克隆抗体为包被抗体、HSA-GLP-1融合蛋白为夹心抗原、anti-HSA-Biotin为检测抗体,用Streptavidin-HRP进行免疫放大,TMB显色。结果:建立了检测HSA-GLP-1融合蛋白的ELISA方法,其线性范围为15.6~1000 ng/mL,最低检测限为15.6 ng/mL,与GLP-1、HSA、IL2-HSA均无交叉反应,板内和板间精密度均小于15%,准确度为±15%,冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论:建立的HSA-GLP-1蛋白检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求,可用于HSA-GLP-1融合蛋白在临床前药代动力学试验的定量检测。 展开更多
关键词 双抗体夹心ELISA HSA—glp-1融合蛋白 药代动力学检测
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无糖基化修饰GLP-1-Fc(N126A)在酵母中的表达、纯化 被引量:1
7
作者 乔晓芳 王春艳 +1 位作者 顾宝华 田庆南 《郑州大学学报(理学版)》 CAS 北大核心 2016年第4期86-89,共4页
胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠促胰岛素激素,具有很好的综合降糖效果,但其在血浆中的半衰期只有短暂几分钟,限制了GLP-1在临床方面的应用.为延长GLP-1的半衰期,合成了GLP-1-Fc融合基因,将N-糖基化作用的受... 胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠促胰岛素激素,具有很好的综合降糖效果,但其在血浆中的半衰期只有短暂几分钟,限制了GLP-1在临床方面的应用.为延长GLP-1的半衰期,合成了GLP-1-Fc融合基因,将N-糖基化作用的受体天冬酰胺突变为丙氨酸,构建了无糖基化修饰的GLP-1-Fc(N126A)融合表达载体,利用酵母表达系统成功表达了GLP-1-Fc(N126A)融合蛋白,并利用r Protein A获得了高纯度融合蛋白. 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽-1 FC融合蛋白 酵母表达
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野生种花生GLP家族基因的鉴定与特征分析
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作者 刘汝莹 王冕 +6 位作者 韩守萍 陈娜 潘丽娟 陈明娜 许静 迟晓元 王通 《花生学报》 北大核心 2020年第2期28-35,共8页
GLP是一类普遍存在于植物界的cupin超家族基因,在调控植物生长发育和抗逆反应中起到多种重要作用。本研究从全基因组水平研究野生种花生GLP基因家族,共鉴定出38个GLP基因。结构域分析显示,绝大多数花生GLP都含有保守的cupin保守结构;基... GLP是一类普遍存在于植物界的cupin超家族基因,在调控植物生长发育和抗逆反应中起到多种重要作用。本研究从全基因组水平研究野生种花生GLP基因家族,共鉴定出38个GLP基因。结构域分析显示,绝大多数花生GLP都含有保守的cupin保守结构;基因结构和系统发育分析表明38个花生GLP家族基因分成Subfamily Ⅰ、Subfamily II和Gymosperm subfamily 3个亚家族,分别有20个、10个和8个成员,其中Subfamily I内含子/外显子结构较一致,无显著差异;Gymosperm subfamily中GLP基因内含子长度差异最大,最长达6.3 kb;Subfamily II中的基因内含子数量差异最显著,最多达5个。说明基因结构与系统进化有一定的关系。染色体定位分析显示,花生GLP基因在花生17条染色体中的分布呈不均匀性,存在5个基因簇,其中染色体A06上分布最多,为9个;其次是B06,分布6个。基因表达分析显示,在22个不同的组织中,仅有8个野生种花生GLP家族基因呈现出差异表达,其中6个属于Subfamily Ⅱ,且表达总量显著高于其他基因,而Subfamily I成员均未检测到表达。该结果将为今后花生GLP家族基因的功能研究与利用提供参考。 展开更多
关键词 花生 类萌发素 基因组 表达
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硫氧还蛋白相互作用蛋白降低GLP-1促小鼠胰岛β细胞的增殖效应 被引量:1
9
作者 张文婷 王瑾 +3 位作者 岳继萍 靳文文 张志楠 焦向英 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第8期1076-1082,共7页
目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)促小鼠胰岛β细胞的增殖效应中的作用。方法小鼠分为db/m组和db/db组,每组10只;慢病毒构建TXNIP过表达(Ad-TXNIP-GFP)稳转小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,分为对照组、Ad-GF... 目的观察硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)在胰高血糖素样肽-1(GLP-1)促小鼠胰岛β细胞的增殖效应中的作用。方法小鼠分为db/m组和db/db组,每组10只;慢病毒构建TXNIP过表达(Ad-TXNIP-GFP)稳转小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞,分为对照组、Ad-GFP组和Ad-TXNIP-GFP组。Western blot检测TXNIP、增殖细胞核抗原(PCNA)和GLP-1受体(GLP-1R)的表达,HE和免疫荧光观察胰岛形态和β细胞数量,GLP-1R、Ki67,ELISA检测小鼠血清中GLP-1的表达,免疫组化检测GLP-1R水平。结果db/db鼠胰岛形态破坏且β细胞数量减少;胰腺组织PCNA表达降低(P<0.05);血清GLP-1水平降低(P<0.05);胰腺组织和胰岛GLP-1R水平降低(P<0.05);胰腺组织TXNIP表达升高(P<0.05);TXNIP过表达细胞模型构建成功(P<0.05);TXNIP过表达时GLP-1R水平降低(P<0.05);TXNIP过表达使GLP-1对胰岛β细胞的增殖效应降低(P<0.05)。结论TXNIP作用于GLP-1R从而降低GLP-1对小鼠胰岛β细胞的增殖效应。 展开更多
关键词 硫氧还蛋白相互作用蛋白 glp-1 glp-1受体 细胞增殖
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GLP—1受体基因表达cAMP-PKA途径调控的研究 被引量:1
10
作者 姜吉文 秦臻 +2 位作者 吕学诜 HCFchmann B.goke 《佳木斯医学院学报》 1996年第3期1-4,共4页
本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因... 本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因表达的负调控,但forskoln可以使GLP—1受体的mRNA的稳定性增加结果表明,GLP—1受体的转录是通过cAMP—蛋白激酶A途径进行调控的,因此,影响此途径的物质对类胰高血糖素肽—1的生理功能以及在临床应用方面起着重要作用。 展开更多
关键词 glp-1 基因表达 FORSKOLIN 蛋白激酶A
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高糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞GLP-1受体表达影响及机制研究
11
作者 陈妍妍 潘谢添 +2 位作者 宋锐 高好考 王琼 《心脏杂志》 CAS 2020年第5期457-460,共4页
目的探索高糖对缺氧/复氧(H/R)乳鼠心肌细胞胰高血糖样肽-1受体(GLP-1R)表达的影响及其分子机制。方法培养乳鼠心肌细胞建立高糖H/R损伤模型,随机将心肌细胞分为对照(正常血糖)组、正常血糖+H/R组、正常血糖+GLP-1激动剂(Exentin-4)处... 目的探索高糖对缺氧/复氧(H/R)乳鼠心肌细胞胰高血糖样肽-1受体(GLP-1R)表达的影响及其分子机制。方法培养乳鼠心肌细胞建立高糖H/R损伤模型,随机将心肌细胞分为对照(正常血糖)组、正常血糖+H/R组、正常血糖+GLP-1激动剂(Exentin-4)处理组、高糖组、高糖+H/R组、高糖+H/R+Exentin-4处理组。Western blot观察高糖H/R后GLP-1R表达变化情况。RT-PCR和Western blot观察各组细胞H/R损伤的氧化应激标志物NOX4、p22phox表达变化;Western blot检测高糖条件下蛋白激酶C(PKC)表达,并观察PKC激动剂PMA和或PKC抑制剂Go 6983处理后GLP-1R表达及NOX4、p22phox表达变化。结果正常血糖条件下,H/R后心肌细胞氧化应激加重(P<0.05),Exendin-4降低氧化应激损伤(P<0.05);与正常血糖H/R组相比,高糖H/R组氧化应激损伤加重(P<0.05),而Exendin-4对高糖条件下抗氧化应激作用无明显改善。与正常血糖组相比,高糖组PKC表达升高(P<0.05),参与心肌细胞GLP-1R表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用(P<0.05)。结论高糖条件下GLP-1R表达下降,PKC参与其表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用。 展开更多
关键词 缺氧复氧损伤 胰高血糖样肽-1 蛋白激酶C
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白粉菌诱导的小麦类萌发素蛋白的克隆、定位及表达分析 被引量:4
12
作者 王俊美 孙燕飞 +2 位作者 刘红彦 康振生 徐红明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期3104-3111,共8页
【目的】克隆受白粉菌诱导的小麦类萌发素蛋白基因,分析其在感、抗病单株中的表达模式,探讨其在小麦抗白粉病过程中的作用机制。【方法】根据基因芯片结果,结合电子克隆与RT-PCR方法,克隆到一个受白粉菌诱导的小麦类萌发素蛋白基因。通... 【目的】克隆受白粉菌诱导的小麦类萌发素蛋白基因,分析其在感、抗病单株中的表达模式,探讨其在小麦抗白粉病过程中的作用机制。【方法】根据基因芯片结果,结合电子克隆与RT-PCR方法,克隆到一个受白粉菌诱导的小麦类萌发素蛋白基因。通过中国春缺体-四体系对获得的基因片段进行定位。运用荧光定量PCR方法分析了该基因片段在抗病植株、感病植株白粉菌诱导的时空表达模式。【结果】获得了一个具有完整开放阅读框的小麦类萌发素蛋白基因片段,命名为TaGLP5(GenBank登录号为FJ594470)。系统进化分析表明该基因片段与已知的来自禾本科的萌发素蛋白分属不同的进化分支,很可能是新的小麦萌发素蛋白成员。通过中国春缺体-四体系将该基因片段定位在小麦的5A染色体上。定量PCR分析结果表明,该基因的表达受白粉菌诱导,且在接菌后的24h以前抗病中的表达量高于同期感病株。【结论】本实验获得的类萌发素蛋白是一个新的成员。该类萌发素蛋白在感、抗植物受白粉菌诱导上调表达,但是表达量、表达时间上存在差异。推测该基因参与了小麦对白粉菌的防御反应。 展开更多
关键词 白粉菌 类萌发素蛋白 克隆 表达模式 染色体定位
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Exendin-4改善Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞Per2节律基因/蛋白异常表达 被引量:3
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作者 王晓晖 李亚蒙 +3 位作者 王丽 赵学玲 原媛 徐云云 《航天医学与医学工程》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期12-17,共6页
目的探讨Exendin-4对β淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白表达的影响及机制。方法 HT22细胞分为Aβ31-35处理组(0,2.5,5.0,10.0μmol/L),Exendin-4单独处理组,Exendin-4预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)预处理组... 目的探讨Exendin-4对β淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白表达的影响及机制。方法 HT22细胞分为Aβ31-35处理组(0,2.5,5.0,10.0μmol/L),Exendin-4单独处理组,Exendin-4预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)处理组,Exendin(9-39)单独处理组,以完全培养基培养的细胞为对照组。光镜下观察HT22细胞形态,MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Per2基因的表达,免疫荧光染色观察GLP-1R及PER2蛋白表达。结果 5,10μmol/L Aβ31-35处理后,细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05)。Exendin-4预处理后,5μmol/L Aβ31-35引起的细胞形态结构的改变明显改善,细胞存活率显著提高(P<0.05)。Exendin-4预处理后,Per2基因/蛋白表达在CT(circadian time)16时较Aβ31-35处理显著提高(P<0.05);Exendin-4+Exendin(9-39)处理后,GLP-1R表达在CT16时较Exendin-4处理显著降低(P<0.05)。Exendin-4+Exendin(9-39)预处理后,CT16时PER2蛋白荧光强度较Exendin-4预处理显著降低(P<0.05)。结论Exendin-4可能通过上调GLP-1R,改善Aβ31-35所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白异常表达。 展开更多
关键词 EXENDIN-4 Aβ31-35 HT22神经细胞 Per2节律基因/蛋白 glp-1R
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人肠生长激素工程菌高效表达培养工艺的研究 被引量:2
14
作者 李泰明 胡卓逸 +3 位作者 刘景晶 王旻 张彦凯 吴洁 《药物生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期368-372,共5页
为了优化含有人肠生长激素 (rh[Gly2 ]GLP 2 )基因的融合表达工程菌 pED h[Gly2 ]GLP 2高效表达的最适培养工艺条件 ,文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始 pH值、接种量、诱导剂 ,诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素... 为了优化含有人肠生长激素 (rh[Gly2 ]GLP 2 )基因的融合表达工程菌 pED h[Gly2 ]GLP 2高效表达的最适培养工艺条件 ,文章通过摇瓶培养研究了包括培养基组成、初始 pH值、接种量、诱导剂 ,诱导剂浓度、诱导时机及诱导后培养时间等因素对蛋白表达量的影响 ,确定了该工程菌表达目的蛋白的最佳条件 ,目的蛋白表达量可达 4 0 %以上 。 展开更多
关键词 工程菌pED-h[Gly^2]glp-2 重组融合蛋白类 表达条件
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胰高血糖素样肽-1受体激动剂减轻小鼠体质量的作用机制研究 被引量:2
15
作者 于倩 李春君 +2 位作者 丁敏 邢云芝 于德民 《天津医药》 CAS 2015年第11期1226-1230,I0004,共6页
目的探讨胰高血糖素样多肽-1受体激动剂(GLP-1Ra)减轻小鼠体质量的作用机制。方法正常对照(N)组8只小鼠以普通饲料喂养,高脂饮食(HF)组32只以高脂饲料喂养,造模成功后的小鼠分为单纯HF组(HF)组、处死前寒冷刺激(CS)组和200、400μg/kg G... 目的探讨胰高血糖素样多肽-1受体激动剂(GLP-1Ra)减轻小鼠体质量的作用机制。方法正常对照(N)组8只小鼠以普通饲料喂养,高脂饮食(HF)组32只以高脂饲料喂养,造模成功后的小鼠分为单纯HF组(HF)组、处死前寒冷刺激(CS)组和200、400μg/kg GLP-1 Ra干预[Lira(200)、Lira(400)]组,喂养8周。观察各组小鼠的体质量、血糖及三酰苷油(TG)的水平变化。HE染色观察小鼠不同部位白色脂肪(WAT)形态学改变;免疫组织荧光染色、Real-time PCR方法观察利拉鲁肽对棕色脂肪(BAT)特异因子UCP-1表达的影响;Western blot方法观察UCP-1表达的调节因子PPAR-γ共激活因子1α(PGC-1α)表达的影响。结果 Lira(200)组和Lira(400)组平均体质量低于HF组(P<0.05)。HF组较N组血糖和TG水平均升高,Lira(200)组和Lira(400)组血糖和TG水平较HF组降低(P<0.05)。Lira(200)组及Lira(400)组肾周与腹股沟皮下脂肪组织部分转变为含有微小脂滴的棕色样脂肪细胞,UCP-1蛋白和基因、PGC-1α蛋白表达水平较HF组均有不同程度的增加,Lira(400)组均强于Lira(200)组(P<0.05)。结论 GLP-1Ra能明显减轻小鼠体质量,其机制可能与增加UCP-1表达,促进白色脂肪发生棕色样变有关。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 超重 疾病模型 动物 胰高血糖素样多肽-1受体激动剂 胰高血糖素样肽-1 解偶联蛋白-1 棕色脂肪样变 利拉鲁肽
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新型双功能融合蛋白GAD的PEG-马来酰亚胺修饰及其性质研究 被引量:1
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作者 陈琛 李闻 +1 位作者 童玥 姚文兵 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期355-360,共6页
为了解决新型双功能融合蛋白GAD复性困难、具有免疫原性等问题,采用PEG-马来酰亚胺修饰变性后的GAD包涵体。通过圆二色谱、色氨酸荧光分析等方法对比修饰前后GAD构象变化,并采用OGTT、脂清除实验验证其生物学活性。研究结果表明,PEG-马... 为了解决新型双功能融合蛋白GAD复性困难、具有免疫原性等问题,采用PEG-马来酰亚胺修饰变性后的GAD包涵体。通过圆二色谱、色氨酸荧光分析等方法对比修饰前后GAD构象变化,并采用OGTT、脂清除实验验证其生物学活性。研究结果表明,PEG-马来酰亚胺能够完成变性条件下GAD的定点修饰,提高其复性效率,且修饰产物二、三级结构与修饰前一致;PEG-GAD的免疫原性降低(P<0.01),具有显著的降糖降脂作用(P<0.001),且体内药效时间延长。此方法可为强疏水性多肽类药物的开发提供有效策略。 展开更多
关键词 双功能融合蛋白GAD PEG-马来酰亚胺 PEG修饰 动脉粥样硬化 glp-1 球状脂联素
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乳清蛋白对2型糖尿病患者胰岛功能的影响 被引量:8
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作者 王旸 黄艳红 沈旸 《中国食物与营养》 2017年第7期84-86,共3页
目的:通过给予2型糖尿病患者乳清蛋白预进餐,探讨其对血糖及胰岛功能的影响。方法:2型糖尿病患者102例,随机分为对照组和观察组,所有对象给予饮食控制指导,其中观察组52例给予乳清蛋白预进餐,对照组50例给予安慰剂预进餐,于观察1w早餐... 目的:通过给予2型糖尿病患者乳清蛋白预进餐,探讨其对血糖及胰岛功能的影响。方法:2型糖尿病患者102例,随机分为对照组和观察组,所有对象给予饮食控制指导,其中观察组52例给予乳清蛋白预进餐,对照组50例给予安慰剂预进餐,于观察1w早餐后测定0、30、60、120min抑胃多肽(GIP)和胰高血糖素样肽1(GLP-1)水平;4w后观察并比较两组患者体质指数、血糖和胰岛素抵抗指数变化情况。结果:饮食干预4w后,2组患者体质指数(BMI)、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(PBG)和胰岛素抵抗指数(Homa-IR)均有下降,且观察组下降程度大于对照组(P<0.05);在饮食控制后1周监测的2组患者不同时相GIP、GLP-1均有不同程度升高,且2组指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乳清蛋白预进餐可促进GIP、GLP-1分泌,增加胰岛素敏感性,有利于控制血糖。 展开更多
关键词 乳清蛋白 2型糖尿病 肠抑胃肽 胰高血糖素肽1 胰岛素抵抗指数
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长期高蛋白饮食对OVX小鼠肝脂肪变性和脂肪堆积的影响 被引量:1
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作者 卜浩林 李丽红 +1 位作者 李欣 郭建红 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期69-75,共7页
目的探讨长期高蛋白饮食对卵巢切除(ovariectomy, OVX)小鼠肝、脂肪组织的影响及胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)的作用。方法 32只8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为对照(Control)组、模型(OVX)组、高蛋白(OVX+HP)组、... 目的探讨长期高蛋白饮食对卵巢切除(ovariectomy, OVX)小鼠肝、脂肪组织的影响及胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1, GLP-1)的作用。方法 32只8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为对照(Control)组、模型(OVX)组、高蛋白(OVX+HP)组、低蛋白(OVX+LP)组,每组8只,模型组、高蛋白组、低蛋白组小鼠行卵巢切除后分别给予标准饮食、高蛋白饮食、低蛋白饮食;对照组进行相同手术保留卵巢,给以标准饮食。每周称量小鼠体重,于24周末处死后,取肝、结肠、腹膜后脂肪组织,并称重脂肪组织;HE染色观察肝、腹膜后脂肪的病理改变;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中GLP-1的含量;实时定量PCR检测肝固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element binding protein-1c, SREBP-1c)以及结肠组织中GLP-1 mRNA的表达,免疫组织化学染色法检测肝SREBP-1c蛋白的表达。结果 24周末,与对照组相比,模型组体重增加(P<0.05)、腹膜后脂肪组织增多(P<0.05);HE染色模型组肝细胞内可见大量脂滴、腹膜后脂肪组织细胞体积增大;结肠组织中GLP-1 mRNA表达降低(P<0.05),血浆中GLP-1含量减少(P<0.05),肝组织中SREBP-1c的mRNA表达升高(P<0.05),SREBP-1c蛋白表达增多;高蛋白组与模型组相比,体重降低(P<0.01),腹膜后脂肪显著减少(P<0.001),病理切片肝细胞内可见少量脂滴、腹膜后脂肪细胞体积缩小;结肠组织GLP-1 mRNA表达升高(P<0.01),血浆中GLP-1含量增多(P<0.001),肝SREBP-1c的mRNA表达降低(P<0.001),SREBP-1c蛋白表达减少;低蛋白组与模型组在体重、腹膜后脂肪以及GLP-1、SREBP-1c的mRNA表达方面差异无统计学意义。结论长期高蛋白饮食可以改善OVX小鼠体重增加和肝脂肪变性,这可能与高蛋白饮食促进肠道分泌GLP-1、下调肝SREBP-1c的mRNA及蛋白表达,发挥类似雌激素的作用有关。 展开更多
关键词 卵巢切除 高蛋白饮食 肝脂肪变性 glp-1 SREBP-1C 小鼠
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黄连素促进2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽分泌的分子机制 被引量:15
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作者 夏敬胜 王倩 +2 位作者 邹吉利 蔡瑜 李颖 《医药导报》 CAS 北大核心 2021年第4期442-449,共8页
目的探究黄连素对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽-1(GLP-1)分泌的影响,为进一步明确黄连素抗糖尿病分子机制提供理论基础。方法通过高脂高糖饮食及注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型对照组、利拉鲁肽... 目的探究黄连素对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽-1(GLP-1)分泌的影响,为进一步明确黄连素抗糖尿病分子机制提供理论基础。方法通过高脂高糖饮食及注射链脲佐菌素的方法构建2型糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型对照组、利拉鲁肽组、小剂量及大剂量黄连素组。血糖仪检测不同时段血糖值。用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测GLP-1及糖化血红蛋白含量。定量多聚酶链反应(Q-PCR)法检测目标菌的含量。苏木精-伊红(HE)染色法观察胰腺组织形态。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠组织胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)、短链脂肪酸受体43(GPR43)、G蛋白偶联胆汁酸受体1(TGR5)、胰高血糖素原(GCG)、激素原转化酶1/3(PC1/3)mRNA表达。免疫组化法检测胰腺组织胰岛素及核因子κB(NF-κB)蛋白表达。Western blotting检测GLP-1蛋白表达。结果与模型对照组比较,黄连素显著增加梭杆菌属、乳酸杆菌属含量,改善口服葡萄糖耐受能力,减少糖化血红蛋白含量,上调结肠TGR5、GPR43、GCG、PC1/3基因表达,抑制NF-κB蛋白表达,促进GLP-1及胰岛素分泌。结论黄连素可能是通过增加GPR43及TGR5活性,上调GCG及PC1/3 mRNA表达,促进GLP-1以及胰岛素分泌,降低血糖。 展开更多
关键词 黄连素 糖尿病 2型 肠道菌群 胰高血糖素样肽-1 短链脂肪酸受体43 G蛋白偶联胆汁酸受体1
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左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死大鼠SCFAs/GPR43/GLP-1/GLP-1R信号通路的影响 被引量:2
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作者 刘迅 刘华 +2 位作者 彭岚玉 罗政 邓奕辉 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第21期86-93,共8页
目的:基于短链脂肪酸(SCFAs)/G蛋白偶联受体43(GPR43)/胰高糖素样肽-1(GLP-1)/胰高糖素样肽-1受体(GLP-1R)信号通路探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死(DM-CI)大鼠的潜在作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、左归... 目的:基于短链脂肪酸(SCFAs)/G蛋白偶联受体43(GPR43)/胰高糖素样肽-1(GLP-1)/胰高糖素样肽-1受体(GLP-1R)信号通路探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死(DM-CI)大鼠的潜在作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、左归降糖通脉方低、高剂量组(12、24 g·kg^(-1))和西药组(吡格列酮二甲双胍片140 mg·kg^(-1)+阿司匹林肠溶片27 mg·kg^(-1)),除假手术组外,其余各组以高糖高脂饮食喂养4周后联合35 mg·kg^(-1)1%链脲佐菌素腹腔注射合并大脑中动脉闭塞建立DM-CI大鼠模型。分别用蒸馏水、左归降糖通脉方低、高剂量、吡格列酮二甲双胍片和阿司匹林肠溶片进行相应干预,术后进行神经功能缺损(NIHSS)评分,TTC染色测量大鼠脑梗死体积,测量各组大鼠随机血糖浓度,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学变化,气相色谱法检测盲肠内容物SCFAs含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清GLP-1含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠回肠组织中GPR43和缺血侧脑组织中GLP-1R的蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠NIHSS评分、随机血糖、脑梗死体积显著升高(P<0.01),SCFAs、GLP-1含量和GPR43、GLP-1R蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,左归降糖通脉方高剂量组和西药组大鼠NIHSS评分、随机血糖、脑梗死体积明显降低(P<0.05,P<0.01),SCFAs、GLP-1含量和GPR43、GLP-1R蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:左归降糖通脉方可改善DM-CI大鼠糖代谢紊乱、减轻神经功能损伤,其机制可能与左归降糖通脉方增加SCFAs含量,上调GPR43/GLP-1/GLP-1R信号通路的表达有关。 展开更多
关键词 左归降糖通脉方 糖尿病合并脑梗死 短链脂肪酸 短链脂肪酸(SCFAs)/G蛋白偶联受体43(GPR43)/胰高糖素样肽-1(glp-1)/胰高糖素样肽-1受体(glp-1R)通路
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