鲤鱼生长激素和对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28的融合表达及功能研究

鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33。重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带。用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效。