Pharmacological Action and Molecular Mechanism of Glaucocalyxin B

Glaucocalyxin B(GLB)not only has many pharmacological actions such as anti-Parkinson's disease,preventing neuron injury,anti-neuritis and anti-rheumatoid arthritis,but also has good anti-tumor activity,especially with obvious therapeutic effect on cervical cancer,gastric cancer and breast cancer.In this paper,the pharmacological action and molecular mechanism of GLB are reviewed,in order to provide a theoretical basis for the development and clinical application of GLB.

蓝萼香茶菜乙素对Rb细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨蓝萼香茶菜乙素对体外培养的人视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞的增殖及细胞周期的影响。方法 MTT法测定不同浓度(2.5μmol.L-1、5.0μmol.L-1、10.0μmol.L-1、20.0μmol.L-1和40.0μmol.L-1)的蓝萼香茶菜乙素作用24h及48h后对人Rb细胞株的影响;碘化丙啶染色、流式细胞术观察蓝萼香茶菜乙素对Rb细胞周期及细胞凋亡的影响。结果蓝萼香茶菜乙素不同剂量组对Rb细胞均有显著细胞毒作用。蓝萼香茶菜乙素处理24h和48h后对Rb细胞株的IC50分别为79.15μmol.L-1和10.88μmol.L-1,剂量-效应关系较为明显;对照组和不同药物浓度组(2.5μmol.L-1组、5.0μmol.L-1组、10.0μmol.L-1组、20.0μmol.L-1组、40.0μmol.L-1组)作用Rb细胞24h后,细胞凋亡率分别为:(2.01±0.03)%、(6.21±0.91)%、(10.21±2.06)%、(16.83±2.61)%、(25.17±2.11)%和(35.29±1.04)%;作用48h后,对应细胞凋亡率分别为:(2.41±0.73)%、(7.94±3.01)%、(12.08±2.43)%、(20.11±2.37)%、(35.18±3.48)%和(51.20±2.93)%。这一结果也显示:随着药物浓度增加,Rb细胞凋亡率也随之升高。结论蓝萼香茶菜乙素通过诱导Rb细胞株凋亡发挥抑制人Rb增殖的作用。

蓝萼乙素通过NF-κB信号通路调控舌鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

目的:探讨蓝萼乙素调控舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:体外培养人TSCC细胞SCC15,使用不同浓度的(3,6,12μmol·L-1)蓝萼乙素处理24 h。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蓝萼乙素对核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白[磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)、磷酸化p65(p-p65)、p65、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)]表达的影响;NF-κB信号通路的激活剂脂多糖(LPS)预处理SCC15细胞后,MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖能力及细胞凋亡率;Western blot法检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3总蛋白(T-caspase-3)的蛋白水平。结果:与空白组相比,蓝萼乙素不同浓度组细胞增殖率显著降低,CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-IκBα、p-p65蛋白水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05);与蓝萼乙素高浓度+PBS组相比,蓝萼乙素高浓度+LPS组细胞增殖率显著升高,CyclinD1、PCNA、Bcl-2蛋白水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:蓝萼乙素能够抑制TSCC细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化而发挥作用。

蓝萼乙素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨蓝萼乙素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入不同浓度(0、2、4、8μmol/L)蓝萼乙素干预处理,采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验考察细胞迁移能力;Transwell小室法考察细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞内p38MAPK、p-p38MAPK、FOXO3a及上皮-间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Vimentin及N-cadherin)的表达水平。结果:蓝萼乙素浓度为2、4、8μmol/L时,细胞增殖率分别为(83.2±6.90)%、(70.72±6.53)%、(45.43±7.51)%,较空白对照组[(100.00±7.84)%]降低;细胞侵袭数量分别为(300.54±24.91)、(255.44±23.59)、(208.66±36.18),较空白对照组(368.44±28.32)降低;细胞迁移距离分别为(487.11±53.00)μm、(394.93±61.91)μm、(312.88±35.42)μm,较空白对照组[(559.37±75.77)μm]降低;p-p38MAPK表达量分别为(1.38±0.11)、(1.69±0.13)、(2.23±0.19),较空白对照组(1.00±0.09)增加;FOXO3α表达量分别为(1.40±0.16)、(1.97±0.31)、(2.44±0.26),较空白对照组(1.00±0.18)增加;E-cadherin表达量分别为(1.15±0.11)、(1.77±0.22)、(1.86±0.15),较空白对照组(1.00±0.11)增加;Vimentin表达量分别为(0.86±0.04)、(0.49±0.05)、(0.54±0.04),较空白对照组(1.00±0.04)减少;N-cadherin表达量分别为(0.66±0.07)、(0.58±0.08)、(0.42±0.04),较空白对照组(1.00±0.12)减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:蓝萼乙素可通过介导p38MAPK/FOXO3a信号传导有效干扰肿瘤细胞EMT进程,发挥其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。

蓝萼乙素通过Akt/BAD通路对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探究蓝萼乙素通过蛋白激酶B(Akt)/B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关死亡启动因子(BAD)通路对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响和机制。方法 将48只SPF级雌性Balb/c-nu裸鼠随机分为模型、蓝萼乙素(56、112 mg/kg)和蓝萼乙素+SC79(112 mg/kg+10 mg/kg)组,每组12只。将HeLa细胞种植在裸鼠右大腿根部背侧皮下,建立皮下移植瘤模型,观察肿瘤体积、质量和一般情况的变化。苏木精–伊红(HE)染色观察肿瘤组织的组织学变化。TUNEL实验检测肿瘤组织细胞凋亡情况。Western blotting法检测移植瘤组织中p-Akt、Akt、p-BAD、BAD、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)蛋白表达水平。结果 与模型组相比,蓝萼乙素组第22、25、28天裸鼠肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤组织Akt、BAD磷酸化水平显著降低(P<0.05),肿瘤细胞凋亡率、肿瘤组织PTEN蛋白水平显著升高(P<0.05);SC79可减弱蓝萼乙素对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。结论 蓝萼乙素对宫颈癌裸鼠移植瘤生长起到抑制作用,其作用机制与抑制Akt/BAD信号通路有关。

蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及凋亡的影响

目的:研究蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。方法:MTT法测定蓝萼香茶菜乙素对AGZY的细胞毒作用;PI染色、流式细胞术观察蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:蓝萼香茶菜乙素对AGZY细胞的IC50为0.11mmol/L,且随着蓝萼香茶菜乙素剂量增加对AGZY细胞抑制作用增强;蓝萼香茶菜乙素可以降低AGZY细胞G2/M期细胞数量,阻止细胞分裂。结论:蓝萼香茶菜乙素可阻滞AGZY细胞的生长,阻滞细胞进入G2/M期,并诱导AGZY细胞凋亡。

HPLC法同时测定胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素

目的建立HPLC法同时测定胃复春片(红参、香茶菜、枳壳)中蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素成分定量方法。方法胃复春片甲醇提取物采用kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-甲醇(B)-水(C),梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长232 nm。结果蓝萼甲素、蓝萼乙素及蓝萼丁素分别在48.68～2 434 ng,32.96～1 648 ng,30.56～1 528 ng,范围呈现良好的线性关系,r均为1.000 0;平均加样回收率在98.3%～100.7%之间;蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素的重复性试验RSD均小于2%。结论本方法可靠稳定,可以很好地用于胃复春片中蓝萼甲素、蓝萼乙素以及蓝萼丁素的定量测定。

蓝萼乙素对两种宫颈癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的探讨蓝萼乙素(GLB)对两种宫颈癌细胞株HeLa、SiHa裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法将HeLa、SiHa细胞分别种植至BALB/C nu裸小鼠右大腿根部背侧皮下,建立裸小鼠移植瘤模型;待移植瘤体积约为0.1 cm^3时,于第10天将HeLa组随机分为4组,第14天将SiHa组随机分为4组,分别为生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组,每组5只;经腹腔注射给药,HeLa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.15μmol/g 0.4 mL/只和0.20μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d;SiHa组给予生理盐水0.4 mL/只、10%乙醇0.4 mL/只、GLB 0.18μmol/g 0.4 mL/只和0.24μmol/g 0.4 mL/只,隔日1次,共20 d。腹腔注射给药的同时,隔天用标准体重秤称量体质量并做好记录,每隔2 d专人用游标卡尺精确测量移植瘤的最大长径和短径,至少测量两次取平均值。给药结束后处死裸鼠前,眼球取血,测生化指标和肿瘤标志物,观察各组荷瘤鼠生化指标和肿瘤标志物的变化;通过移植瘤生长抑制试验,组织HE染色,观察各组移植瘤的大体形态、组织形态学的变化;免疫组化法检测移植瘤组织中自噬相关蛋白PTEN、Beclin 1、LC3的表达变化,Western blot法进一步检验相关蛋白变化。结果裸鼠处死后,HeLa、SiHa组中生理盐水组、10%乙醇组、GLB低剂量组和高剂量组生化指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤标志物较生理盐水组、10%乙醇组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);GLB低剂量组和高剂量组的移植瘤体积均明显小于生理盐水组和10%乙醇组,差异均有统计学意义(P<0.05);HE染色显示:GLB低剂量组和高剂量组移植瘤组织出现凋亡、坏死改变;HeLa和SiHa组心肝脾肺肾均未发现转移瘤细胞;免疫组化法、Western-blot法结果示:GLB低剂量组和高剂量组的肿瘤组织PTEN、Beclin 1及LC3蛋白表达水平较生理盐水组和10%乙醇组明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 GLB对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调PTEN、Beclin 1、LC3的表达,诱导细胞自噬凋亡有关。

高效液相色谱法同时测定蓝萼香茶菜中蓝萼甲素和蓝萼乙素的含量

提出了高效液相色谱法测定蓝萼香茶菜中蓝萼甲素和蓝萼乙素的含量。样品采用甲醇超声提取后,经0.45μm滤膜过滤,滤液供高效液相色谱仪测定。采用Hypersil ODS C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm)分离,用甲醇-水(55+45)溶液为流动相洗脱,用二极管阵列检测器在波长231nm处测定。蓝萼甲素和蓝萼乙素的质量浓度分别在0.018～0.575g.L-1和0.009～0.298g.L-1范围内与峰面积呈线性关系。方法用于蓝萼香茶菜样品的分析,蓝萼甲素和蓝萼乙素的回收率分别为102%和103%,测定值的相对标准偏差(n=6)分别为0.084%和0.071%。

蓝萼乙素对宫颈癌细胞迁移与侵袭影响作用机制

目的蓝萼乙素具有良好的抗肿瘤活性,可抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡,但对细胞迁移和侵袭影响机制尚不清楚。本研究分析蓝萼乙素对宫颈癌HeLa和SiHa细胞迁移、侵袭影响及其相关作用机制。方法用不同浓度蓝萼乙素处理宫颈癌HeLa和SiHa细胞后,分别采用细胞划痕和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化,蛋白质印迹法和荧光定量PCR法检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白和mRNA表达水平变化。结果细胞划痕实验结果表明,蓝萼乙素可抑制HeLa和SiHa细胞迁移。0、4和8μmol/L蓝萼乙素处理HeLa细胞不同时间后,部分差异有统计学意义,F处理=26.512,P<0.001,F时间=47.161,P<0.001,F处理×时间=1.108,P=0.362。0、4和8μmol/L蓝萼乙素处理SiHa细胞不同时间后,差异均具有统计学意义,F处理=111.939,P<0.001,F时间=435.783,P<0.001,F处理×时间=3.246,P=0.036。Transwell实验结果表明,2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理HeLa细胞24h后,迁移细胞数目分别为496.00±48.06、212.80±21.14和119.80±22.08,与对照组(645.00±60.65)相比,差异有统计学意义,F=172.197,P<0.001;2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理SiHa细胞24h后,迁移细胞数目分别为315.60±29.48、153.40±18.37和98.60±19.55,与对照组(509.80±42.94)相比,差异有统计学意义,F=199.179,P<0.001;2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理HeLa细胞48h后,侵袭细胞数目分别为306.60±50.77、175.60±32.38和73.80±14.39,与对照组(490.20±38.85)相比,差异有统计学意义,F=120.988,P<0.001;2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理SiHa细胞48h后,侵袭细胞数目分别为208.00±22.25、105.00±13.44和39.40±10.92,与对照组(410.40±16.86)相比,差异有统计学意义,F=486.847,P<0.001。蛋白质印迹实验结果表明,2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理细胞24h后,与对照组相比,HeLa和SiHa细胞MMP-9(F=55.808,P<0.001;F=23.854,P<0.001)与VEGF表达水平(F=17.219,P=0.001;F=53.370,P<0.001)均降低。荧光定量PCR实验结果表明,2、4和8μmol/L蓝萼乙素处理细胞24h后,HeLa和SiHa细胞MMP-9(F=132.603,P<0.001;F=28.061,P<0.001)与VEGF表达水平(F=58.354,P<0.001;F=89.800,P<0.001)也降低。结论蓝萼乙素以剂量依赖的方式抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞迁移和侵袭,其机制可能与下调MMP-9和VEGF表达有关。