Glioma-conditioned Medium Blocks Endothelial Cells' Apoptosis Induced by Hypoxia and Promotes Its Angiogenesis via Up-regulation of u-PA/u-PAR

Objective： To investigate the role of urokinase-type plasminogen activator/urokinase-type plasminogen receptor（u-PA/u-PAR） system in glioma angiogenesis under hypoxic conditions, we studied the effect of glioma-conditioned medium on the hypoxia induced changes in human endothelial-like ECV304 cells proliferation, apoptosis, cord formation in vitro and u-PA/u-PAR expression. Methods： MTT assay was used to examine the changes in cell proliferation. Cell apoptosis was analyzed by Hoechst 33258 staining. Matrigel cord-like formation assay was used to evaluate the angiogenesis ability of ECV304 cells in vitro. Expressions of u-PA/u-PAR mRNA were detected by quantitative real-time RT-PCR. Results： Hypoxia inhibited ECV304 cells proliferation and induced cell apoptosis. Hypoxic conditioned medium（H-CM） while not normoxic conditioned medium（N-CM） of U251 glioma ceils partially blocked the effect of hypoxia on ECV304 cells proliferation and apoptosis. H-CM of U251 glioma ceils also promoted the cord formation of ECV304 cells seeded on matrigel. When u-PA or u-PAR monoclonal antibodies were added into ECV304 cells culturing medium, cord formation ability was partially inhibited. H-CM of U251 glioma cells induced uPA and uPAR expression in ECV304 cells. Conclusion： These suggest that u-PA/u-PAR system is involved in glioma angiogenesis trigged by hypoxic microenviroment.

PAX8、ASAH1、Cullin7在脑胶质瘤患者癌组织与癌旁组织中的蛋白表达及与生存状况的相关性分析

【目的】探究配对盒基因8(PAX8)、酸性神经酰胺酶(ASAH1)、Cullin7在脑胶质瘤(GC)患者癌组织与癌旁组织中的蛋白表达情况及与生存状况的相关性。【方法】选取2014年1月至2017年7月本院收治的75例GC患者,均行手术切除,比较癌组织与癌旁组织中PAX8、ASAH1、Cullin7蛋白表达情况,分析三者表达之间相关性,并分析三者与临床病理特征的相关性。分析PAX8、ASAH1、Cullin7蛋白表达与患者3年生存率的相关性。【结果】癌组织中PAX8、ASAH1、Cullin7蛋白阳性表达率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);PAX8蛋白与ASAH1蛋白呈正相关,ASAH1蛋白与Cullin7蛋白呈正相关,Cullin7蛋白与PAX8蛋白呈正相关(P<0.05);PAX8、ASAH1、Cullin7蛋白与GC患者病理类型、病理分级、分化程度、浸润深度、瘤周水肿显著相关(P<0.05);PAX8、ASAH1、Cullin7蛋白阳性表达与3年生存率呈负相关(P<0.05)。【结论】GC患者癌组织PAX8蛋白、ASAH1蛋白、Cullin7蛋白均呈阳性表达,并与生存状况存在负相关性。

miR-200c靶向DNMT1基因对人胶质瘤细胞增殖的影响

【目的】探讨miR-200c靶向调控DNA甲基转移酶1（DNMT1）对人胶质瘤U251细胞增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（quantitative real—time PCR，qRT-PCR）检测24例胶质瘤组织和大脑正常组织中miR-200c与DNMT1的表达改变；将miR-200cmimics转染于胶质瘤U251细胞，以DNMT1 siRNA为阳性对照，采用qRT—PCR检测外源过表达miR-200c对DNMT1 mRNA表达水平的影响；采用MTT和法检测外源高表达miR-200c时胶质瘤U251细胞增殖能力的影响。【结果】qRT-PCR检测结果显示，miR-200c在24例胶质瘤组织中的表达水平较大脑正常组织明显下调，DNMT1在胶质瘤组织中的表达水平较大脑正常组织明显上调；外源过表达miR-200c下调胶质瘤U251细胞DNMT1mRNA的表达水平（P〈0．05），抑制胶质瘤U251细胞的生长（P〈0．05）。【结论】miR-200c通过靶向调控DNMT1抑制人胶质瘤细胞的增殖。

枸杞多糖对大鼠脑胶质瘤细胞株 C6增殖及凋亡的影响

【目的】探讨枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides,LBP）对大鼠脑胶质瘤细胞株 C6增殖及凋亡的影响。【方法】在倒置显微镜下观察脑胶质瘤细胞凋亡的形态学变化；MTT 法检测 LBP 对 C6细胞增殖抑制率的变化；用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；免疫细胞化学法测定 C6细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达变化。【结果】经 LBP 诱导后的 C6出现细胞形态不规则,变圆并脱落的现象；LBP 能抑制 C6细胞的增殖能力,且呈剂量依赖性；LBP 作用后 C6的细胞周期更多地被阻止于 G2/M 期；LBP 作用后的脑胶质瘤 C6细胞中 PCNA 表达水平下降。【结论】LBP 可抑制大鼠脑胶质瘤 C6细胞增殖并使其凋亡,其作用机制可能是 LBP 可下调大鼠脑胶质瘤 C6细胞 PCNA 的表达水平。

fibulin-5基因在人脑胶质瘤中的表达

【目的】初步探讨fibulin-5基因在胶质瘤中的表达情况及其与胶质瘤发生、发展的关系。【方法】检测fibulin-5 mRNA在正常脑组织（7例）和低分级胶质瘤组（22例）和高分级胶质瘤组（15例）脑组织中的表达情况。【结果】fibulin-5 mRNA在对照组正常脑组织中，所有7例标本均检测到表达；在低分级胶质瘤组中，22例标本有14例检测到表达；在高分级组中，15例标本有3例检测到表达。正常脑组织标本的fibulin-5 mRNA表达阳性率以及平均IOD值和低分级组相比无统计学差异（P〉0．05）；高分级胶质瘤组的fibulin-5 mRNA表达阳性率以及平均IOD值均低于正常脑组织和低分级胶质瘤组的表达（P〈0．05）。【结论】fibulin-5在正常脑组织中表达。其在胶质瘤组织中表达的变化可能与胶质瘤的进展和血管生成存在联系。

AKT2和Ezrin在胶质瘤中的表达及相关性分析

【目的】检测脑胶质瘤组织中AKT2和膜细胞骨架连接蛋白（Ezrin）表达并探讨其意义。【方法】采用免疫组织化学S-P法检测并比较50例脑胶质瘤、10例正常脑组织中AKT2和Ezrin的表达并分析其相关性。【结果】脑胶质瘤组织中AKT2和Ezrin表达定位于细胞浆，其阳性表达率分别为78．00％（39／50）和56．67％（34／60），显著高于正常脑组织10％、20％（P〈0．05）；两者的表达与胶质瘤患者的年龄、性别无明显相关性（P〉0．05），但高级别组与低级别组之间表达差异具有统计学意义（P〈0．05）；在脑胶质瘤组织中AKT2蛋白的阳性表达与Ezrin蛋白的阳性表达呈正相关（Pd0．05）。【结论】AKT2和Ezrin高表达可能与胶质瘤发生有关，且与胶质瘤的浸润、发展、转移有关。

不同恶性程度胶质瘤中血管生成拟态的鉴定及其临床意义

目的：明确不同恶性程度胶质瘤中是否存在血管生成拟态及其临床意义。方法：应用三维培养技术、HE染色、CD 34-PA S双重染色方法观察胶质瘤中拟态血管的存在情况。结果：U87细胞培养48h后可见细胞相互融合,连接成网络样结构。对照组中,SHG 44培养72h后生长紊乱,无明显规律,但是在缺氧组中,SHG 44互相连接,形成网络样结构。CD 34-PA S双重染色可见Ⅰ级胶质瘤中未发现血管生成拟态,Ⅱ-Ⅲ级胶质瘤中发现3例血管生成拟态阳性,阳性率为8.6%（3/35）,与Ⅰ级胶质瘤组相比,两者具有显著性差异（P〈0.05）,Ⅳ级胶质瘤中发现11例血管生成拟态阳性,阳性率为28.9%（11/38）,与Ⅱ-Ⅲ级胶质瘤组（P〈0.05）及Ⅰ级胶质瘤组相比,均有显著性差异（P〈0.001）。结论：胶质瘤中存在血管生成拟态现象,血管生成拟态与肿瘤的恶性程度呈正相关。

CXCR4在复发性胶质瘤中的表达及意义

[目的]探讨CXCR4作为脑胶质瘤恶性程度分级指标及治疗靶标的意义.[方法]采用免疫组化S-P法,检测复发前后人脑胶质瘤组织中CXCR4的表达.[结果]CXCR4在10例正常脑组织中未见表达.在31例原发性和复发性胶质瘤组织中,CXCR4阳性率分别为61.2%（19/31）和87.1%（27/31）,两者比较其差异有统计学意义（P〈0.05）.CXCR4阳性表达与人脑胶质瘤的肿块大小、vimentin表达不相关,而与肿瘤的病理分级、Ki-67表达正相关（P〈0.01,P〈0.05）.[结论]CXCR4与胶质瘤的恶性程度相关,可能作为胶质瘤恶性程度的分级指标;CXCR4在人脑胶质瘤组织中高表达,尤其在复发后阳性表达率显著增高,针对CXCR4为治疗靶点的脑胶质瘤分子靶向治疗可能是潜在的有力的治疗手段.

Cofilin-1基因在人胶质瘤细胞侵袭、迁移、粘附中的分子机制

【目的】探讨Cofilin-1基因在人胶质瘤细胞侵袭、迁移及细胞粘附中的分子机制。【方法】采用RNAi技术干扰人胶质瘤细胞系SHG-44细胞中Cofilin-1基因的表达。Real-time PCR及Western blot检测验证Cofilin-1干扰效果;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;粘附作用实验检测细胞粘附能力;Western blot检测细胞中ICAM-1及胞质和胞核中NF-κB p65蛋白水平的表达。【结果】RNAi干扰可降低SHG-44细胞中Cofilin-1的表达水平;Cofilin-1表达干扰抑制SHG-44细胞迁移、侵袭及粘附能力,降低细胞中ICAM-1的表达,下调胞核中NF-κB p65的表达水平。【结论】干扰Cofilin-1表达能够抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭及粘附,可能通过调节NF-κB通路活化发挥作用,Cofilin-1可能成为胶质瘤的潜在治疗靶点。

铜绿假单胞菌制剂对大鼠C6胶质瘤细胞作用的实验研究

目的研究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞的增殖抑制机制.方法体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,测定细胞活力、细胞贴壁率,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间.倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化,MTT比色法测定不同时间、不同浓度PA-MSHA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制率,计算细胞存活率及半数抑制浓度(IC50).结果 C6细胞在常规培养条件下呈贴壁生长,生长状态良好,每次传代前活力测定,存活率均>95%.于2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h测定贴壁率分别为20%、68%、82%、85%、92%、98%,符合本实验要求.细胞生长曲线提示5×103/孔的浓度为96孔板内最佳接种浓度.细胞接种后24～72 h为细胞倍增时间.倒置显微镜下观察药物作用后细胞形态学变化明显.MTT比色法结果提示,细胞生长抑制率与药物作用时间和剂量正相关.计算24 h和48 h IC50值分别为(5.80±1.79)×108 cfu/mL和(3.90±2.14)×108 cfu/mL.结论铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂对体外培养的C6胶质瘤细胞具有增殖抑制作用,且呈时间剂量依赖性.

VEGF在脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

【目的】研究血管内皮生长因子（VEGF）在脑胶质瘤中的表达及与肿瘤恶性程度及预后的关系。【方法】应用免疫组化方法检测120例脑胶质瘤标本中VEGF表达，并结合临床资料进行统计学分析。【结果】VEGF的表达在低级别组（Ⅰ～Ⅱ级）与高级别组（Ⅲ-Ⅳ级）之间存在显著差异（P〈0．05）；单因素预后分析显示VEGF的表达与患者的术后总生存期（OS）及无进展生存期（PFS）相关（P〈0．05），VEGF的高表达预示较短的OS和PFS；多因素C0x比例风险回归模型分析显示VEGF是独立的不良预后的危险因素。【结论】VEGF在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的病理分级有关，而且是脑胶质瘤预后的不利因素。

Annexin A2、HMGB1蛋白表达与胶质瘤病理学分级及癫痫发作的关系

【目的】探讨膜联蛋白A2(Annexin A2)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达与脑胶质瘤病理学分级、癫痫发作的关系.【方法】选取本院病理中心收集的80例脑胶质瘤组织标本(观察组)、40例脑外伤患者手术组织(对照组).采用免疫组化染色技术检测两组标本中Annexin A2、HMGB1蛋白表达情况,分析不同组织学分级、癫痫发作频率、癫痫发作时间的患者Annexin A2、HMGB1蛋白表达的差异.【结果】观察组Annexin A2蛋白、HMGB1蛋白阳性表达率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(χ^2=22.097,P<0.05;χ^2=26.167,P<0.05).观察组患者不同病理分级Annexin A2蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);不同癫痫发作频率及癫痫持续时间的患者Annexin A2蛋白阳性表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05).观察组不同病理分级、不同癫痫发作频率及癫痫持续时间的患者HMGB1蛋白阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05).【结论】在脑胶质瘤患者病灶组织中Annexin A2、HMGB1蛋白的阳性表达率明显上升;Annexin A2蛋白、H M GB1蛋白的过表达与脑胶质瘤的恶性程度增加及癫痫发作情况有关.

人脑胶质瘤中EGFR和CTGF的表达及意义

【目的】研究表皮生长因子受体（EGFR）和结缔组织生长因子（CTGF）在人脑胶质瘤内的表达，探讨它们与胶质瘤病理分级的关系及其在胶质瘤发生过程中的作用。【方法】采用免疫组织化学SP法，检测64例脑胶质瘤、5例正常脑组织中EGFR和CTGF的表达。用统计学方法分析其表达及与胶质瘤病理分级的关系。【结果】64例胶质瘤患者中EGFR及CTGF阳性表达数分别为41例和43例。正常脑组织均不表达EG—FR和CTGF。EGFR在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的阳性率分别为12．5％、41．7％、73．9％、85．7％；CTGF在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的阳性率分别为12．5％、50．0％、78．3％、90．5％。EGFR、CTGF在不同级别胶质瘤间的表达有显著性差异（P〈0．05），两者随着胶质瘤病理分级增高而表达增强（r＝0．327，P〈0．01）。【结论】EGFR和CTGF在胶质瘤内均有表达，且随着病理级别的增高而增加，提示EGFR和CTGF在胶质瘤的发生过程中可能起重要的作用，其水平高低与胶质瘤的恶性程度有关。

Girdin和BCL-2蛋白在脑胶质瘤组织中表达及其意义

【目的】探讨肌动蛋白丝束小梁(Girdin)和B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)蛋白在脑股质瘤组织中表达及其意义。【方法】选取2010年3月至2013年1月在本院诊治并经病理学确诊的脑胶质瘤患者53例,采用免疫组织化学染色法检测53例患者脑肢质瘤组织及瘤旁正常组织中Girdin和BCL-2蛋白的表达水平,分析其表达水平与患者各临床病理特征、术后总生存期的关系。【结果】脑胶质瘤中G ird in蛋白、BCL-2蛋白阳性表达率为60.38%(32/53)、41.51%(22/53),均显著高于正常组织的5.66%(3/53)、1.89%(1/53),其差异均具有统计学意义(P<0.05)。脑胶质瘤组织中Girdm蛋白表达水平与患者病理学分级、瘤周水肿及肿瘤肉眼直径有关(P<0.05);脑胶质瘤组织中BCL-2蛋白表达水平与患者性别有关(P<0.05)。Girdin蛋白高表达患者生存率明显低于低表达患者,其差异具有统计学意义(P<0.05);BCL-2蛋白高表达和低表达的患者生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Girdin和BCL-2蛋白在脑胶质瘤组织中呈高表达;Girdin蛋白参与脑股质瘤的发展,并对其预后有负面影响。