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Periodontitis and Inflammation: Plasma High Titer Naturally Occurring Anti-Glucan Antibodies Form Immune Complex with Streptococcus mutans Antigen
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作者 Genu George Molly Antony +1 位作者 Jaisy Mathai Padinjaradath S. Appukuttan 《Modern Research in Inflammation》 2016年第3期45-54,共10页
Atheromatous plaques usually contain antigens of the periodontitis-causing bacteria Streptococcus mutans though molecular mechanism of this incorporation remains unknown. Since vascular adhesion and inflammatory poten... Atheromatous plaques usually contain antigens of the periodontitis-causing bacteria Streptococcus mutans though molecular mechanism of this incorporation remains unknown. Since vascular adhesion and inflammatory potential of Immune Complexes (IC) are known we investigated the naturally occurring plasma antibodies that recognize major antigens from S. mutans. S. mutans-binding plasma proteins (SMBP) prepared by affinity chromatography on a column of heat-killed S. mutans could recognize α- and β-linked glucose in dextran and yeast respectively but not galactose in glycoproteins. SMBP contained only three proteins, each corresponding in electrophoretic mobility to standard plasma IgG, IgA or IgM. The major positively and negatively charged protein antigens (PSMAg and NSMAg) isolated from S. mutans by electrophoresis and ion exchange chromatography respectively were recognized sugar-reversibly by the anti-β-glucan antibody (ABG) and though less avidly, by the dextran-binding immunoglobulin (DIg) in normal plasma. NSMAg addition resulted in near doubling of IC-bound immunoglobulins in immunoglobulin-rich fraction of plasma. IC isolated from above fraction after NSMAg addition had substantially more IgA and IgM content than total plasma immunoglobulins. IC formation by NSMAg was significantly inhibited by ABG- and DIg-specific sugars or by selective withdrawal of ABG or DIg from plasma. ABG and DIg being relatively high titer plasma antibodies IC formation with them suggested a possible route for vascular adhesion and damage by S. mutans and its antigens. Further, high IgA content of these ICs indicated their susceptibility to tissue uptake through cell surface galectin-1 for which IgA is the lone immunoglobulin ligand. 展开更多
关键词 Streptococcus mutans Anti-β-glucan Antibody (ABG) Dextran binding Immunoglobulins (DIg) Immune Complexes
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分光光度法测定燕麦β-葡聚糖含量 被引量:12
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作者 张如 戴巧玲 +3 位作者 吴小燕 李琳琳 陈元胜 吴佳 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第6期140-145,共6页
采用紫外可见分光光度法研究了刚果红浓度、β-葡聚糖浓度、反应温度、pH值、反应时间、离子浓度、光照、体系中可能共存的淀粉和蛋白等因素对测定燕麦β-葡聚糖含量的影响。同时,在紫外吸收光谱分析的基础上运用化学计量学方法计算刚... 采用紫外可见分光光度法研究了刚果红浓度、β-葡聚糖浓度、反应温度、pH值、反应时间、离子浓度、光照、体系中可能共存的淀粉和蛋白等因素对测定燕麦β-葡聚糖含量的影响。同时,在紫外吸收光谱分析的基础上运用化学计量学方法计算刚果红与燕麦β-葡聚糖的结合常数K与结合位点数,N及平均结合数n。结果表明:室温条件下,刚果红质量浓度50μg/mL,pH7.5,反应时间30min,离子浓度0.1mol/L时,吸光度与β-葡聚糖浓度在0~10μg/mL范围内具有较好的线性关系。光照对测定无影响,共存的淀粉和蛋白质对测定影响较小。在试验条件下,刚果红与燕麦β-葡聚糖的结合常数K为4.08×10^6、结合位点数N为336、平均结合数n为297。 展开更多
关键词 燕麦 Β-葡聚糖 刚果红分光光度法 结合模型
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变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段的纯化及葡聚糖结合功能实验 被引量:7
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作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 卫克文 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第7期358-360,共3页
目的 :纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。 方法 :蛋白质技术 :金属螯合亲和层析 ,葡聚糖结合实验。结果 :通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析 ,纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α - 1,6键葡聚糖结合。结论 :通过基因重组... 目的 :纯化变形链球菌gbpA的葡聚糖结合区GBD肽段。 方法 :蛋白质技术 :金属螯合亲和层析 ,葡聚糖结合实验。结果 :通过蛋白质技术及金属螯合亲和层析 ,纯化出可融性融合蛋白GBD。此蛋白可与α - 1,6键葡聚糖结合。结论 :通过基因重组技术成功纯化出变形链球菌 展开更多
关键词 变形链球菌 gbpA 蛋白质纯化 葡聚糖结合 龋齿 疾病预防
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变形链球菌GbpA的GBD免疫防龋实验研究 被引量:4
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作者 苏凌云 吴补领 +2 位作者 于立君 范继红 卫克文 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2005年第3期298-300,共3页
目的:观察变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白免疫SD大鼠的防龋效果。方法:用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠,喂Keyes改良的高糖Diet2000,第1次免疫20d时,连续3d大鼠口腔中接种S.mutansIngbritt,在接种S.mutans后第77天处... 目的:观察变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白免疫SD大鼠的防龋效果。方法:用纯化的变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白皮下免疫SD大鼠,喂Keyes改良的高糖Diet2000,第1次免疫20d时,连续3d大鼠口腔中接种S.mutansIngbritt,在接种S.mutans后第77天处死大鼠,收集大鼠颌骨标本,用于龋齿记分分析,用t检验进行统计学分析。结果:GBD融合蛋白免疫大鼠,实验组龋损范围及龋坏程度均显著低于对照组,P<0.01。结论:变形链球菌GbpA的GBD融合蛋白疫苗可有效降低龋齿的发生。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 免疫 龋齿
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白研究进展 被引量:5
5
作者 徐帅妹 魏信汉 崔力 《口腔医学》 CAS 2016年第7期662-665,共4页
葡聚糖结合蛋白是变形链球菌致龋的重要毒力因子。与变形链球菌的粘附、聚集、细胞壁生理功能、酶活性和形成生物膜并维持其结构稳定起重要作用。该文就变形链球菌4种葡聚糖结合蛋白研究现状,葡聚糖结合蛋白与生物膜、防龋疫苗的关系及... 葡聚糖结合蛋白是变形链球菌致龋的重要毒力因子。与变形链球菌的粘附、聚集、细胞壁生理功能、酶活性和形成生物膜并维持其结构稳定起重要作用。该文就变形链球菌4种葡聚糖结合蛋白研究现状,葡聚糖结合蛋白与生物膜、防龋疫苗的关系及当前存在的问题作一综述。 展开更多
关键词 葡聚糖结合蛋白 葡聚糖 生物膜 防龋疫苗
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变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区真核表达质粒的构建及其在哺乳动物细胞中的表达 被引量:3
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作者 韩琪 刘建国 +4 位作者 柴巧学 曲云鹏 管晓燕 白国辉 杨德琴 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第6期310-313,340,共5页
目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染... 目的:构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区的真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,并观察其在哺乳动物细胞COS-7中的表达。方法:利用基因重组技术构建真核表达质粒pVAX1-Gb-pA/GBD,经酶切分析和测序分析鉴定后,通过脂质体转染法,将其转染至COS-7细胞中,免疫组化SABC法检测其在细胞中的表达。结果:重组质粒pVAX1-GbpA/GBD经EcoR I和BamH I酶切证实携带1.2kb目的基因片段,经测序分析,目的基因正确插入到预先设计的载体位点处。pVAX1-gbpA/GBD转染的细胞胞质呈褐色染色,pVAX1空载体质粒转染的细胞胞质中无着色。结论:成功构建防龋基因疫苗真核表达质粒pVAX1-GbpA/GBD,所携带的基因序列正确,能够在真核细胞COS-7中正确表达目的蛋白。 展开更多
关键词 变异链球菌 葡聚糖结合蛋白A 哺乳动物细胞 真核表达 pVAXl
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鸟苷酸结合蛋白2调控β-葡聚糖诱导的小鼠树突状细胞成熟 被引量:3
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作者 张淑雯 冯同保 +2 位作者 宁永玲 张晓航 戚春建 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1153-1159,共7页
目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体... 目的研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)对树突状细胞(DC)成熟和功能的影响。方法通过基因芯片和实时定量PCR研究β-葡聚糖诱导的DC基因的变化情况,转染GBP2小干扰RNA(si RNA),敲低GBP2的表达,流式细胞术检测DC表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平,ELISA检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、IL-12p70、TNF-α和IL-10水平。T细胞增殖实验检测全葡聚糖颗粒(WGP)刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对卵清蛋白(OVA)特异性CD4+T细胞的促增殖效应。结果β-葡聚糖诱导后,DC的GBP2 m RNA水平显著降低;敲低DC的GBP2水平后,其表面CD11c、主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)、CD80水平降低,同时,IL-6、IL-12、TNF-α分泌下降;经WGP刺激的成熟DC在转染GBP2-si RNA后,对OVA特异性CD4+T细胞的促增殖效应降低。结论 GBP2能调控β-葡聚糖诱导的DC成熟,进一步抑制T细胞的增殖。 展开更多
关键词 Β-葡聚糖 树突状细胞 鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)
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GbpB-壳聚糖纳米颗粒系统的构建及其经鼻免疫大鼠的实验研究 被引量:3
8
作者 卫克文 樊明文 吴补领 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第5期488-491,共4页
目的:构建葡聚糖结合蛋白B(glucan b ind ing prote in B,GbpB)-壳聚糖纳米颗粒系统,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备GbpB-壳聚糖纳米颗粒系统,经鼻黏膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对GbpB的特异IgG抗体滴度及唾液中针对Gbp... 目的:构建葡聚糖结合蛋白B(glucan b ind ing prote in B,GbpB)-壳聚糖纳米颗粒系统,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备GbpB-壳聚糖纳米颗粒系统,经鼻黏膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对GbpB的特异IgG抗体滴度及唾液中针对GbpB的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照GbpB蛋白组及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白载体组,而与阳性对照组抗体滴度相当。但维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:壳聚糖纳米颗粒系统可作为经鼻运输多肽防龋疫苗的载体系统。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白B 纳米壳聚糖颗粒 疫苗
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脓毒症早期预警生物标志物的研究进展 被引量:46
9
作者 许程 徐元宏 《检验医学》 CAS 2015年第5期533-536,共4页
脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS),临床上证实有细菌存在或有高度可疑感染灶。近期关于脓毒症早期诊断的研究备受关注。文章结合脓毒症的发病机制阐述细胞因子、降钙素原(PCT)、内毒素、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清淀... 脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS),临床上证实有细菌存在或有高度可疑感染灶。近期关于脓毒症早期诊断的研究备受关注。文章结合脓毒症的发病机制阐述细胞因子、降钙素原(PCT)、内毒素、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、肝素结合蛋白(HBP)、(1,3)β-D葡聚糖(BG)及半乳甘露聚糖(GM)等标志物诊断早期脓毒症、评估疾病严重程度及判断预后的研究进展,为脓毒症早期诊断和治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 脓毒症 细胞因子 降钙素原 内毒素 高敏C反应蛋白 血清淀粉样蛋白A 肝素结合蛋白 (1 3)β-D葡聚糖 半乳甘露聚糖
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小菜蛾幼虫血淋巴中β-1,3-葡聚糖结合蛋白的分离及其对根虫瘟霉侵染的免疫活性 被引量:2
10
作者 刘青娥 徐均焕 冯明光 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期459-463,共5页
用亲和沉淀法从小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫血淋巴中分离获得 2种β 1,3 葡聚糖结合蛋白 ,分子质量分别为 75 9ku和 83 2ku ,主要存在于幼虫血浆中 ,但血细胞中未检出 .研究表明 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白能特异性地识别β 1,3 葡聚... 用亲和沉淀法从小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫血淋巴中分离获得 2种β 1,3 葡聚糖结合蛋白 ,分子质量分别为 75 9ku和 83 2ku ,主要存在于幼虫血浆中 ,但血细胞中未检出 .研究表明 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白能特异性地识别β 1,3 葡聚糖 ,并显著激活幼虫血淋巴中的酚氧化酶原 (ProPO) ,与昆布多糖共存时所激活的酚氧化酶 (PO)活性显著高于两者单独存在时的PO活性 .与 4株根虫瘟霉 (Zoophthoraradicans)菌丝裂解液共存时 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白能激活幼虫血淋巴中的ProPO ,使PO活力显著高于该菌原生质体裂解液所激活的PO活性 .显然 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白只有特异性地识别根虫瘟霉细胞壁中的β 1,3 葡聚糖后才能激活幼虫血淋巴中的ProPO ,表明虫霉原生质体可逃避寄主免疫反应 .此外 ,β 1,3 葡聚糖结合蛋白对不同菌株所激活的PO活性存在差异 ,各菌株所激活的PO活性由高到低依次为 :ARSEF1342 >ARSEF2 6 99>F9910 1>ARSEF110 0 ,这与各菌株对小菜蛾的毒力强弱相一致 。 展开更多
关键词 小菜蛾 β-1 3-葡聚糖结合蛋白 根虫瘟霉 菌丝 原生质体 昆虫免疫 虫霉
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段的分子克隆 被引量:1
11
作者 孙汉堂 吴补领 +1 位作者 杨聚才 孙叶芳 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2000年第3期120-122,共3页
目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因 (gbpC)编码序列的特异片段。方法 :根据文献报道的gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物 ,PCR扩增位于gbpC编码序列 110 5~ 15 5 4bp间的一段特异片段 ,扩增产物经回收、酶切后 ,定向插入克隆... 目的 :克隆变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因 (gbpC)编码序列的特异片段。方法 :根据文献报道的gbpC序列设计并合成一对寡核苷酸引物 ,PCR扩增位于gbpC编码序列 110 5~ 15 5 4bp间的一段特异片段 ,扩增产物经回收、酶切后 ,定向插入克隆载体puc18中 ,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α ,挑选阳性克隆 ,鉴定后进行序列测定。结果 :测序结果与Sato等报道的序列一致。结论 :成功克隆了gbpC基因片段 ,为进一步的研究 (探针标记、杂交及表达等 ) 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 PCR 分子克隆 防龋
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嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究 被引量:1
12
作者 王怡丹 孙天瞳 +6 位作者 刘建国 柴巧学 曲云鹏 于晓光 白国辉 田源 韩琪 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2015年第11期645-650,共6页
目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-S... 目的:构建含变异链球菌表面蛋白Spa P的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白Gbp A的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法:通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中;然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白Spa P/P-GBD在真核细胞中的表达。结果:重组真核表达质粒p VAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%;免疫组化染色结果显示,经p VAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色;Western-blot检测结果显示,分子量为72 k Da的嵌合蛋白Spa P/P-GBD能够被正确表达。结论:构建成功的嵌合体真核表达质粒p VAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。 展开更多
关键词 变异链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 哺乳动物细胞 真核表达
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纳米基因防龋疫苗的构建及其免疫大鼠的实验研究 被引量:1
13
作者 卫克文 樊明文 吴补领 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2005年第3期351-354,共4页
目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚... 目的:制备pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米基因防龋疫苗,并检测其经鼻免疫大鼠的效果。方法:制备两种pcDNA3.1(+)gbpB壳聚糖纳米颗粒载体系统,经鼻粘膜免疫SD大鼠,用ELISA法检测血清中针对葡聚糖结合蛋白B的特异IgG抗体滴度及唾液中针对葡聚糖结合蛋白B的特异SIgA抗体滴度。与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB及未免疫组、空白壳聚糖纳米颗粒组作比较。结果:该载体系统经鼻免疫SD大鼠所产生的血清及唾液中针对GbpB的IgG和SIgA抗体滴度远大于未免疫组和空白壳聚糖纳米颗粒组,而与阳性对照组霍乱毒素pcDNA3.1(+)gbpB组抗体滴度相当。且维持的抗体滴度更稳定和持久。结论:成功构建了以葡聚糖结合蛋白B基因为免疫原的纳米基因防龋疫苗,并获得较好的免疫效果。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 基因疫苗 纳米壳聚糖颗粒
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:1
14
作者 卫克文 樊明文 吴补领 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第4期340-342,共3页
目的 :在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因 (glucanbindingproteinB ,gbpB) ,并对重组蛋白进行初步纯化 ,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础。方法 :将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体 pPROEXTMHTb ,构... 目的 :在大肠杆菌中表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因 (glucanbindingproteinB ,gbpB) ,并对重组蛋白进行初步纯化 ,为下一步制备多抗和进行相关的研究奠定基础。方法 :将克隆到的gbpB全长编码区基因克隆到表达载体 pPROEXTMHTb ,构建表达质粒 pPROEXTMHTb - gbpB ,以大肠杆菌E .coliBL2 1(DE3)为宿主菌进行诱导表达 ,表达产物经镍 -次氮基三乙酸 (Ni-NTA)柱进行亲和层析纯化。结果 :工程菌经IPTG诱导 3h后 ,在SDS -PAGE上出现一条新的蛋白条带 ,相对分子量 (Mr)为 4 .5~ 5 .0× 10 3 ,以可溶形式存在 ,经Ni-NTA柱纯化后获得纯度较高的重组葡聚糖结合蛋白B。结论 :获得Mr为 4 .5~ 5 .0× 10 3 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白B 基因表达 蛋白纯化
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因防龋疫苗的构建及其在哺乳动物细胞中的表达
15
作者 卫克文 吴补领 +1 位作者 肖明振 苏凌云 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2004年第7期378-381,共4页
目的 :观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白 B( gbp B)真核表达质粒 pc DNA3 .1 ( +) -gbp B在哺乳动物细胞 COS-7的表达情况。方法 :通过基因重组技术构建真核表达质粒 pc DNA3 .1 ( +) -gbp B,通过脂质体转染法将其转染至 COS-7细胞 ,通过... 目的 :观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白 B( gbp B)真核表达质粒 pc DNA3 .1 ( +) -gbp B在哺乳动物细胞 COS-7的表达情况。方法 :通过基因重组技术构建真核表达质粒 pc DNA3 .1 ( +) -gbp B,通过脂质体转染法将其转染至 COS-7细胞 ,通过免疫组化 SABC法检测其在 COS-7细胞的表达。结果 :pc DNA3 .1( +) -gbp B质粒转染的细胞胞浆中呈棕黄色染色 ,胞核中无着色 ,pc DAN3 .1 ( +)空载体转染的细胞胞浆及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论 :质粒 pc DNA3 .1 ( +) -gbp B转染 COS-7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于胞浆中 ,可与抗 Gbp B抗体特异性结合 ,具有抗原性 ,可作为基因疫苗。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白B 哺乳动物细胞 表达
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因特异片段在大肠杆菌中的表达
16
作者 孙汉堂 吴补领 +2 位作者 郭希民 孙叶芳 蒲勤 《口腔医学》 CAS 2006年第4期247-249,共3页
目的原核表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因(glucan-bindingproteinCgene,gbpC)特异片段。方法将克隆获得的约0.45kb的gbpC基因特异片段经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1/gbpCE原核融合表达载体,转化感受态... 目的原核表达变形链球菌葡聚糖结合蛋白C基因(glucan-bindingproteinCgene,gbpC)特异片段。方法将克隆获得的约0.45kb的gbpC基因特异片段经EcoRⅠ/SalⅠ双酶切后,定向插入pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1/gbpCE原核融合表达载体,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,酶切及PCR鉴定后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropy1-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达融合蛋白GST-GbpCE,SDS-PAGE检测表达产物。结果在SDS-PAGE凝胶上出现一条新生蛋白质条带,其相对分子质量约为43000,与预计大小相符合。结论成功表达gbpC特异片段,获得了融合蛋白GST-GbpCE,可用于制备GbpC抗体。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白 原核表达
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携带变形链球菌表面蛋白、葡聚糖结合蛋白及信号肽基因的真核表达质粒的构建
17
作者 柴巧学 刘建国 杨德琴 《广东牙病防治》 2011年第4期181-185,共5页
目的通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区(glucan bind-ing domain,GBD)及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础。方法通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的... 目的通过构建带有变形链球菌表面蛋白SpaP的P区、葡聚糖结合蛋白A葡聚糖结合区(glucan bind-ing domain,GBD)及一段信号肽基因的嵌和体真核表达质粒pSSG,为基因疫苗的制备提供实验基础。方法通过PCR扩增,获得分别编码SpaP的P区和GBD的两个基因片段sp和gg,以及人白介素2信号肽基因(signal)。将它们分别定向插入pMD20-T克隆载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,初步鉴定后测序。将获得的3个基因片段分别双酶切,胶回收纯化后将同样进行双酶切的pVAX1质粒在T4 DNA连接酶作用下进行连接反应,获得真核表达质粒pSSG,并转化DH5α,提取纯化pSSG,进行质粒RCR,酶切电泳鉴定并测序。结果真核表达质粒pSSG构建正确,目的基因sp、gg和signal定向插入至真核表达载体。结论真核表达质粒pSSG包含了SpaP的P区和GBD以及人白介素2信号肽的编码基因,为基因疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 变形链球菌 表面蛋白抗原 葡聚糖结合蛋白 真核表达质粒 基因疫苗
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基于特异性蛋白Gαa的比浊法检测β-葡聚糖 被引量:1
18
作者 田振华 张昊 于源华 《应用化学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期727-732,共6页
通过基因重组技术,克隆表达了β-葡聚糖特异性结合美洲鲎G因子α亚基片段a(Gαa)蛋白,并建立了β-葡聚糖比浊检测方法。克隆的Gαa基因相对分子质量为40000(1251 bp),浓度为2 g/L,纯度达到98%以上。该蛋白能与βG特异性结合,紫外分... 通过基因重组技术,克隆表达了β-葡聚糖特异性结合美洲鲎G因子α亚基片段a(Gαa)蛋白,并建立了β-葡聚糖比浊检测方法。克隆的Gαa基因相对分子质量为40000(1251 bp),浓度为2 g/L,纯度达到98%以上。该蛋白能与βG特异性结合,紫外分光光度计在340 nm下检测的吸光度与βG含量呈正线性相关,线性范围3.125~200 mg/L,R2=0.997,检测限3.125 mg/L。结合力实验表明,该蛋白与βG具有良好的亲和性及特异性。该方法具有成本低、快速、专一性强等特点。 展开更多
关键词 美洲鲎G因子α亚基片段a特异性蛋白 Β-葡聚糖 比浊法
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变异链球菌葡聚糖结合蛋白B的生物学特性研究进展 被引量:1
19
作者 陈晓英 赵玮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第2期168-170,共3页
变异链球菌是人类龋病的主要致病菌,葡聚糖结合蛋白是其重要的毒力因子之一。葡聚糖结合蛋白B在变异链球菌的致龋、维持细菌形态、发挥细胞壁生理功能等方面有重要作用,同时其N端具有免疫原性,可应用于免疫防龋。下面就葡聚糖结合蛋白B... 变异链球菌是人类龋病的主要致病菌,葡聚糖结合蛋白是其重要的毒力因子之一。葡聚糖结合蛋白B在变异链球菌的致龋、维持细菌形态、发挥细胞壁生理功能等方面有重要作用,同时其N端具有免疫原性,可应用于免疫防龋。下面就葡聚糖结合蛋白B的生物学特性研究进展作一综述。 展开更多
关键词 变异链球菌 葡聚糖结合蛋白B 龋病
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达 被引量:1
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作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 陆群 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-12,共3页
目的 观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法 通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化... 目的 观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法 通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化SABC法检测其在COS_7细胞的表达。结果 pcDAN3 1 GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色 ,胞核无着色 ,pcDAN3 1空载体转染的细胞质及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论 质粒pcDAN3 1 GBD转染COS_7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于细胞质中 ,可与抗GbpA抗体特异性结合 ,具有抗原性 。 展开更多
关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白A GbpA 真核表达 质粒 哺乳动物 基因表达
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