用荧光分光光度法测量冠心病患者血浆谷胱甘肽

利用荧光分光光度计对还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)标准品进行全波长扫描,确定激发(λex)波长为334·4nm,发射(λem)波长为424nm以及5nm的谱带宽度,以pH8·3的磷酸盐缓冲液(PBS)作为缓冲液,用100μL10mmol·L-1邻苯二甲醛(OPA)甲醇溶液对GSH进行衍生化30min后测量荧光值(FU)。以标准品浓度为自变量,FU为应变量,求直线方程,YGSH=6·9+8·6X(r2=0·994),YGSSG=6·2+17·2X(r2=0·999),并制作标准曲线。据此测定三组研究对象血浆GSH及GSSG,并计算GSH/GSSG的氧化还原电位。研究发现,从正常对照组到冠心病前期组,再到冠心病组,GSSG逐渐升高,GSH和GSH/GSSG逐渐减少,氧化还原电位逐渐升高,向氧化方向偏移(P均<0·05)。该方法操作简单,精密度好,准确度高。

HPLC法同时检测血浆中半胱氨酸/胱氨酸和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽的氧化还原电势

目的本研究拟探讨一种比较敏感、能同时检测血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)/胱氨酸(cystine,CySS)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)/氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量及相应的氧化还原电势(Eh)的方法。方法取大鼠全血,去除红细胞及蛋白后用碘乙酸封闭自由的巯基,通过丹磺酰氯衍生化后,利用高效液相色谱(highperformance liquid chromatography,HPLC)进行分离,根据能斯特方程计算相应的氧化还原电势。结果本方法可同时测定体内GSH/GSSG和Cys/CySS的含量及相应的氧化还原电势,灵敏度高、准确性强。结论本研究提供了一种简便有效地检测血浆中氧化还原状态的方法,可能为诊断与氧化应激相关疾病提供新的依据。

以谷胱甘肽为电子供体的细胞膜氧化还原系统

内载谷胱甘肽(GSH)的大豆(Glycine max L.)下胚轴正向型质膜囊泡具有以GSH为电子供体的跨膜电子传递活性,能还原膜外电子受体FeCN和细胞色素(Cyt)C,其还原速率分别为(21.6±0.6)nmolFeCN·min^(-1)·mg^(-1)蛋白和(6.6±1.0)nmol Cyt C·min^(-1)·mg^(-1)蛋白。这种跨膜电子传递能引起膜上Cyt P-450吸收光谱标志带(Soret带)的变化,表明Cyt P-450参与了这一氧化还原过程。在跨质膜电子传递的同时伴随着H^+运输和膜电位的改变。

4种检测柠条种子活力技术的比较分析

种子保存是当前植物种质资源保存的最有效、最安全的方式之一,快速、微量、准确检测种子库中种子活力的变化是当前植物种质设施保存技术研究的热点与重点。本文利用谷胱甘肽氧化还原电位(EGSSG/2GSH)、差示扫描量热分析(DSC)、电子自旋共振(EPR)和非损伤微检测(NMT)4种目前较为先进的方法,研究柠条种子在人工老化下的活力变化规律。结果表明,柠条种子在50℃、相对湿度(RH)为50%的老化条件下,其活力指数的下降速率要快于发芽率的下降速率;通过建立回归模型发现,在检测发芽率变化方面,4种检测方法的优越性依次为EPR>NMT>DSC>EGSSG/2GSH;在检测活力指数变化方面,4种检测方法的优越性依次为NMT>EGSSG/2GSH=EPR>DSC。综合对检测柠条种子发芽率和活力指数拟合度情况,以及对种子非损伤的性质,认为NMT最适合用来跟踪监测贮藏种子的活力。

毕赤酵母合成S-腺苷甲硫氨酸过程谷胱甘肽流量分析与控制

S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)是一种具有广阔应用前景的活性氨基酸,利用毕赤酵母催化合成是SAM主要生产方法,但SAM可被细胞转化为还原型谷胱甘肽(glutathione reduced,GSH),后者可进一步转化为氧化型谷胱甘肽(glutathione oxidized,GSSG)。该研究分析了SAM合成过程中谷胱甘肽总量的动态变化,并基于GSSG/GSH偏移,揭示了胞内氧化还原势与GSH流量变化的相关性。最后添加抗氧化剂维生素C,通过降低胞内SAM→GSH流量及改善细胞活性,进一步提高SAM产率。

植物黄酮对白血病细胞HL-60氧化-还原电位影响

目的观察植物黄酮3′,4′,5′,7′-四羟黄酮(luteolin)和3′-甲氧基,3,7,4′-三羟黄酮(geraldol)对白血病细胞HL-60氧化-还原电位的影响。方法四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力变化;邻苯二醛(POT)比色法测定胞内还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平,计算GSH/GSSG及氧化-还原电位。结果10μmol/L的luteolin或Geraldol作用0h时细胞氧化-还原电位为-(295.5±31.2)mV,随后逐渐升高,分别作用4和2h后达到-(278.6±28.7)和-(279.6±26.3)mV,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);10μmol/LNAC干预能够降低luteolin和geraldol对HL-60细胞的增殖抑制效应,干预后其24h增殖抑制率分别由(25.4±1.8)%,(21.8±1.5)%降低至(16.8±1.1)%,(12.1±1.0)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论luteolin和ger-aldol能够明显升高HL-60细胞的氧化-还原电位,降低其GSH水平,可能在其抗肿瘤机制中发挥作用。