中华白玉蜗牛来源糖胺聚糖的提取、分离及其抗氧化活性分析

糖胺聚糖是一种重要的药用活性寡糖,由于蜗牛糖胺聚糖的提取工艺尚不发达,使得蜗牛糖胺聚糖提取物中具有药理活性的有效结构仍不清楚,本文通过优化糖胺聚糖提取工艺,利用化学酶法联合丙酮循环脱脂工艺,经乙醇沉淀从蜗牛不同组织中提取糖胺聚糖,通过咔唑反应对蜗牛肌肉、内脏及黏液中的糖胺聚糖进行定量分析,结果显示,蜗牛肌肉、内脏及黏液中的糖胺聚糖提取率分别为0􀆰776%,1.961%和0.573%,二糖组分分析显示,蜗牛二糖组成以ΔUA2S-GlcNAc为主(98%),并有少量ΔUA2S-GlcNS存在。生物活性分析表明,从蜗牛肌肉、内脏和黏液中提取的糖胺聚糖均具有较高的抗氧化活性。其中,10 mg·mL^(-1)蜗牛黏液糖胺聚糖的总抗氧化能力(T-AOC)最高,为0.6064μmol·mL^(-1),其DPPH·自由基清除率也最高,为64.15%。本研究为蜗牛来源药用糖胺聚糖活性寡糖的制备分析提供研究基础。

牛肾上腺皮质细胞合成蛋白多糖的研究

我们利用基础培养下的牛肾上腺皮质束、网状带细胞,通过代谢性标记、特异性酶或化学降解、离子交换色谱、凝胶滤过、免疫沉淀分析等方法,研究了该细胞合成蛋白多糖的性质和分子大小。结果表明该细胞在基础培养条件下合成的^(35)S-标记分子是硫酸乙酰肝素蛋白多糖。这种蛋白多糖表现出明显的不均一性。因为三种分子硫酸乙酰肝素蛋白多糖的分子量分别是230、8.3和330kDa。用链霉蛋白酶水解去角蛋白后,它们各自释放的相应的氨基葡聚糖链为30,2.2,150kDa。

转化生长因子β_1ACTH对蛋白多糖合成的调节作用

利用离子交换色谱,凝胶过滤,可把基础培养下的牛肾上腺皮质束状带,网状带细胞合成的硫酸乙酰肝素蛋白多糖分成230,8.3,330kDa3种分子.ACTH,TGF_(B1)对这种蛋白多糖的合成均有强大兴奋作用,但TGF_(B1)选择性增加大分子蛋白多糖的合成.ACTH则重在刺激小分子株的合成。

新疆地区人类免疫缺陷病毒-1感染者CRF07-BC流行毒株gag基因遗传特性

目的分析新疆地区HIV-1感染者中流行的单-亚型CRF07-BC毒株的gag基因遗传特性。方法对35例CRF07-BC亚型的HIV-1感染者分别于2011年9月（T1时间点）、2012年5月（T2时间点）、2013年2月（T3时间点）和2013年10月（T4时间点）4个时间点采集全血标本。为排除不同程度免疫功能对HIV-1基因变异的影响，使用流式细胞仪进行CD4＋T淋巴细胞计数，并按照CD4’T淋巴细胞〈200／pL（重度免疫抑制）、200～500／pL（中度免疫抑制）和〉500／pL（无免疫抑制）分为不同免疫功能的3组。抽提标本RNA，套式PCR扩增gag基因片段，最终将3组研究对象得到的4次序列进行基因离散率和进化树分析，并使用BEAST软件估算该地区CRF07-BC流行毒株的最近共同祖先株形成时间和平均进化速率。为排除HARRT对HIV-1基因变异影响，对HARRT组和非HARRT组进行基因离散率分析。结果3组不同免疫功能的研究对象均呈现出在T1、T2、T3、T4时间点的组内和组间基因离散率依次升高的趋势。HARRT组和非HARRT组也均呈现出在T1、T2、T3、T4时间点的组内和组间基因离散率依次升高的趋势。进化树分析显示，同一样本的几次序列在进化树上聚集成一簇，大部分毒株均在T4时间点上独立分出一支；其最近共同祖先株形成时间为10．9年E95％最高后验密度（HPD）：2．O～22．2年]，平均进化速率为1．34×10。替换·位点-1·年-1（95％HPD：5．16×10-4-2．23×10。替换·位点-1·年-1）。结论新疆地区HIV-1感染者CRF07-BC亚型毒株会随着在一个地区流行时间的延长，加大该地区同一亚型内的基因离散率；CRF07-BC单-亚型内病毒株的gag基因进化速率相对文献报道的略慢。

新疆地区HIV-1感染者CRF07_BC流行毒株gag基因变异特性

目的分析新疆地区人类免疫缺陷病毒1型（human immunodeficiency virus type 1,HIV-1）感染者中流行的CRF07_BC亚型毒株gag基因的遗传变异特性。方法对75例HIV-1感染者分别于间隔6个月的两个时间点采集标本。抽提标本RNA反转录后用巢式聚合酶链反应扩增gag基因片段,将得到的2次序列进行亚型、同源性、基因离散率和选择压力分析。结果进化树上同一样本的2次序列聚集成一个小分枝,有15大簇分枝的共同特征是每枝上的几个毒株来源的新疆下属地区相同且同源相似性在94.2%-99.4%之间,具有这种特征的标本超过全部标本量的半数;与首次采样的序列相比,6个月后的样本序列组内基因离散率、与标准株间的组间基因离散率均呈现出增加的趋势;基因选择压力分析表明新疆地区的HIV-1毒株正受到正向选择压力。结论进化树上每簇分枝上的几个样本来源的地区相同和序列高度同源提示每簇上的几例标本很有可能是由同一株亲本毒株进化而来的;基因离散率随流行时间的增长而增加和基因选择压力分析结果均表明HIV-1毒株发生着连续的定向突变。

HIV-1型中国株E、B亚型gag基因的克隆与表达

目的 克隆和表达人免疫缺陷病毒 (HIV)Ⅰ型中国株E、B亚型代表株的结构基因gag。方法 在分子流行病学调查的基础上 ,选择 1份经部分 gp12 0基因测序判定为E亚型和 1份经部分gp12 0基因测序判定为B亚型的代表性样品 ,利用套式聚合酶链反应 (PCR) ,扩增外周血中的前病毒 ,获得了结构基因 gag全长片断 ,并先后克隆到plin8Pr5 5和 pFastBacl载体中 ,我们首次克隆到全长的中国株E亚型 gag基因。采用双脱氧链末端终止法测定全部DNA序列。采用昆虫细胞 杆状病毒表达系统 ,构建了中国HIV 1gag基因的杆状病毒表达质粒 ,得到了表达HIV 1E和B亚型 gag的重组杆状病毒。结果 克隆到的E、B亚型 gag基因具有完整的阅读框架 ,无大的缺失和插入 ,gag重组杆状病毒感染昆虫细胞表达了由gag形成的病毒样颗粒 ,并分泌到上清中 ,Westernblot显示感染的昆虫细胞表达相应的 gag基因。超薄电镜显示用 gag基因的重组昆虫杆状病毒感染昆虫细胞可形成病毒样颗粒 ,这些颗粒为空心的大约 10 0nm颗粒样物定位在胞内 ,明显不同于昆虫杆状病毒本身形成的颗粒。结论 克隆到的E、B亚型代表株的 gag基因具有完整的结构和功能 ,我们得到了针对我国HIV 1流行株的病毒样颗粒候选疫苗抗原。