甘草总黄酮对艰难梭菌的体内外抗菌作用研究

考察甘草总黄酮对艰难梭菌的抑菌活性及其抗菌机制,为艰难梭菌感染(CDI)的防治和甘草的高效利用提供依据。用微量肉汤稀释法、计数法测定了甘草总黄酮对艰难梭菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、生长曲线和杀菌曲线。通过扫描电镜观察、碘化丙啶(PI)摄取试验、胞外蛋白和ATP含量的测定,检测了甘草总黄酮对细菌细胞膜完整性的影响。建立了小鼠CDI模型,以体重变化和存活率为指标,评价了甘草总黄酮的体内抗菌活性。结果表明,甘草总黄酮对艰难梭菌的MIC和MBC分别为12.5μg/mL和25μg/mL,具有快速杀菌的特征。甘草总黄酮可显著破坏细菌细胞膜,导致ATP和蛋白等胞内物质的泄露,使细菌形态发生显著改变,进而导致菌体死亡。甘草总黄酮可显著缓解CDI小鼠的体重下降,7 d存活率为100%,疗效与万古霉素相当。甘草总黄酮具有显著的体内外抗艰难梭菌活性,破坏细菌细胞膜的完整性是其可能的抗菌机制。

甘草查尔酮A对小鼠真菌性角膜炎的抗炎作用

目的 探讨甘草查尔酮A(LA)在小鼠烟曲霉菌(AF)性角膜炎中的抗炎作用。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度的LA溶液(12、24、36、48、60μmol/L)对小鼠来源巨噬细胞(RAW264.7)增殖活力的影响;采用免疫荧光法检测AF感染后第3天小鼠角膜中性粒细胞的浸润程度;使用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验方法检测各组RAW264.7细胞中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血红素加氧酶(HO-1)的mRNA及蛋白表达水平。结果 60μmol/L的LA对RAW264.7细胞没有毒性(P>0.05),并显著降低感染后小鼠角膜的中性粒细胞浸润(t=5.94,P<0.01);60μmol/L的LA显著下调AF诱导的IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA和蛋白表达(F=15.35~507.53,P<0.001)并上调HO-1 mRNA表达(F=1 633.06,P<0.001)。结论 LA能够通过减少中性粒细胞浸润、下调炎症因子表达和增强HO-1表达,在AF性角膜炎中起到抗炎作用。

不同微生物菌肥对甘草光合生理、黄酮含量及土壤微生物的影响

以甘草(Glycyrrhiza uralensis)为试材,采用大棚划区试验,设置施用淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)菌肥(PL)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌肥(BS)、哈茨木霉真菌(Trichoderma harzianum)菌肥(TH)及其三者复合菌肥处理(MX),以不施用菌肥为对照(CK),探索了不同微生物菌肥对甘草光合色素、叶绿素荧光、PSⅡ光化学特征、黄酮组分及土壤微生物数量的影响,以期为微生物菌肥应用于甘草生产提供参考依据。结果表明:与CK相比,微生物菌肥处理(PL、BS、TH、MX)均在一定程度上提高了光合色素(叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素)含量、增强了叶绿素荧光(Fv/Fm、qP、Φ_(PSⅡ)),降低了PSⅡ光化学损耗特征(φDo、φPo、Ro、Ψo);同时提高了黄酮组分(甘草素、异黄酮、二氢黄酮、查尔酮)含量,各处理整体表现为CK<PL、TH<MX、BS。此外,微生物菌肥亦提高了土壤细菌、氨氧化细菌、放线菌及固氮菌数量,而对真菌无明显影响,以MX、BS处理较优。综上,施用微生物菌肥可提高光合作用效率和土壤微生物数量,同时提高黄酮类物质含量,以施用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌肥最佳。

UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS法分析光果甘草地上部分黄酮类成分

[目的]对光果甘草地上部分(茎、叶)的黄酮类化学成分进行分析,为进一步开发利用光果甘草地上部分及阐明其药效物质基础提供科学依据。[方法]将光果甘草地上部分醇提样品水沉,分为水溶性、脂溶性部位;采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)法检测样品,使用Xcalibur软件处理分析数据,将得到的成分分子质量、多级图谱碎片信息结合文献、数据库及标准品进行指认。[结果]从光果甘草地上部分共检测出100个黄酮类成分,有97种在光果甘草地上部分被首次发现;其中水溶性样品检测出61种,脂溶性样品检测出69种。[结论]通过UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS法,对光果甘草地上部分建立了快速、准确的定性方法,同时证实黄酮类成分含量丰富,为进一步开发利用提供依据。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术分析胀果甘草地上部分的黄酮类化合物

目的鉴定胀果甘草地上部分的黄酮类化合物,为后续药效及质量评价与控制等的研究奠定基础。方法用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱(UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)联用技术,用Waters Acquity UPLC BEH-C 18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈(A)-5 mL·L^(-1)甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^(-1),在电喷雾正负离子模式下采集数据。依据高分辨质谱提供的准分子离子峰和碎片离子的精确分子质量信息及相关文献数据,确证黄酮类化合物及其特征碎片离子的分子组成。结果鉴定出胀果甘草地上部分的乙醇提取物共含有95个黄酮类化合物,其中水溶性部位有52个黄酮,主要以黄酮苷类为主;脂溶性部位有83个黄酮类化合物,主要为黄酮苷元类。水溶性和脂溶性部位含37个共有黄酮,主要为黄酮苷、二氢黄酮。结论胀果甘草地上部分含有多种黄酮类化合物,用UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术可以快速、准确、灵敏地鉴别胀果甘草地上部分的黄酮类化合物的结构。

基于UPLC-LTQ-Orbitrap MS探究生、炙甘草黄酮类成分及其抗氧化活性差异

目的:探究甘草蜜炙前后黄酮类成分变化与其抗氧化活性的关系。方法:提取蜜炙前后甘草总黄酮,采用紫外分光光度法、超高效液相色谱串联线性离子阱高分辨质谱法分别进行含量测定及成分分析,采用总抗氧化能力测定法、超氧阴离子自由基清除法、羟自由基清除法及1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法4种体外方法测定其抗氧化活性。结果:甘草蜜炙后总黄酮抗氧化活性明显提高,总黄酮含量较生品降低;质谱结果显示,生、炙甘草共有成分中甘草查耳酮A等10个黄酮类成分含量上升,反曲刺酮素B等5个成分含量下降,其中甘草查耳酮A含量提升最显著。结论:蜜炙甘草总黄酮抗氧化活性的提高可能主要在于生、炙甘草黄酮成分含量的差异,其中甘草查耳酮A含量的变化对总黄酮抗氧化活性的提升起重要作用,为甘草“生熟异用”研究提供了依据。

甘草总黄酮对油脂抗氧化作用研究

以过氧化值(POV)为指标,采用Schaal烘箱法研究了甘草总黄酮对油脂的抗氧化性能。结果表明:甘草总黄酮对四种食用油脂均有良好的抗氧化效果,且对猪油具有较强的抗氧化作用,其作用具有剂量效应关系;VC、柠檬酸、酒石酸对甘草总黄酮的抗氧化作用均有协同增效作用;甘草总黄酮与合成抗氧化剂混合使用时,其抗氧化能力均好于只添加单一抗氧化剂的效果。

HPLC法测定生甘草、炙甘草中6种成分

目的建立HPLC法测定生甘草、炙甘草中5个黄酮(甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素)和一个三萜类(甘草酸铵)成分的含有量。方法甘草甲醇提取液分析采用Hyperclone ODS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-0.2%甲酸为流动相,梯度洗脱;柱温25℃。结果与生甘草相比,炙甘草中甘草素葡萄糖芹糖苷、甘草苷、甘草酸铵、异甘草苷的含有量均有所下降,其中前3个成分降低程度较为明显。结论甘草蜜炙过程中苷类成分发生了水解,由于其极性较低,导致难以煎出,故甘草素、异甘草素的含有量未明显升高。

超声波提取甘草黄酮及其抑菌活性研究

目的研究甘草中的黄酮提取方法和抗菌活性。方法利用超声波技术通过正交试验提取甘草中的黄酮,杯碟法对其进行抗菌活性的研究。结果超声波最佳的提取条件为功率385W,80%乙醇,料液比为1∶15,提取时间为8 min,黄酮提取率为6.23%。该提取液对金色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌、黑曲霉、青霉都有明显的抑菌效果,最低抑菌浓度分别为:0.062 5,0.062 5,0.031 3,0.15,0.25 mg/ml;最小杀菌浓度为0.25,0.125,0.031 3,0.5,0.25 mg/ml。结论超声波技术是提取甘草黄酮的高效方法,甘草具有较强的抗菌活性。

甘草黄酮对荷瘤(S180)小鼠免疫细胞数量的影响

目的:研究甘草黄酮对荷瘤(S180)小鼠免疫细胞数量的影响,探讨甘草黄酮抗肿瘤作用的免疫学机制。方法:取荷瘤(S180)小鼠,随机分4组:生理盐水对照组、甘草黄酮高、中、低剂量组,每组10只,灌胃给药9天后,采用血细胞分析仪计数血液中白细胞、淋巴细胞的数量;流式细胞仪检测T细胞亚群百分率。结果:甘草黄酮最佳抑瘤率为52.3%(高剂量组);甘草黄酮组血液中白细胞总数、淋巴细胞总数均高于生理盐水对照组,高剂量组增加最多,P<0.01;甘草黄酮给药组CD4+/CD8+T细胞比值明显高于生理盐水对照组,以高剂量组为最高,P<0.01。结论:甘草黄酮增加荷瘤(S180)小鼠效应免疫细胞的数量,从而达到抗肿瘤作用。

甘草中黄酮的超声提取及含量测定

目的 :提取甘草中的黄酮 ,并测定其含量。方法 :运用超声技术提取甘草黄酮 ,用比色法测定黄酮含量。结果 :室温下超声提取 80 min较为合适。此时黄酮的含量为 1.311% ,平均回收率为 99.10 % ,RSD=0 .90 % (n=6 )。结论 :运用超声技术提取甘草黄酮速度较快 。

甘草总黄酮的提取技术及其抑菌活性研究

目的:研究甘草总黄酮的提取技术,并探讨其抑菌活性。方法:对比研究了甘草总黄酮超声提取、酶解提取间的差异、传统搅拌提取及反复冻溶提取,并优化超声提取工艺条件。同时,采用二倍稀释法研究了甘草总黄酮的抑菌效果。结果:超声提取的效果最好,其最优条件为用20倍量30%乙醇提取2次,每次20 m in。此外,甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌,大肠埃希氏杆菌,绿脓杆菌和枯草杆菌的最小抑菌浓度(M IC)分别为:0.03125,0.03125,0.125,0.03125 mg/m l。结论:超声提取是适于从甘草中快速高效提取总黄酮的新方法。甘草总黄酮对上述四种致病菌均有明显的抑制作用。

超声——微波协同萃取法提取甘草黄酮的研究

采用超声-微波协同萃取法,从甘草中提取黄酮,用分光光度法测定黄酮含量。结果:用超声-微波协同萃取法提取,测得甘草中黄酮的含量为2.04%,平均回收率为97.64%(n=6)。结论:甘草黄酮的提取可优选超声-微波协同萃取法。

甘草总黄酮含量测定方法研究

目的选择适宜的对照品,建立能够准确测定甘草中总黄酮含量的方法。方法针对甘草苷、柚皮苷、芦丁3种对照品分别使用紫外分光光度法,通过全波长扫描,比较不同对照品和样品与显色前后的最大吸收波长,从而确定适合的对照品。结果甘草苷对照品和样品液经过碱处理后最大吸收波长分别为334,334.5nm且全波长扫描后得到峰形基本一致,而柚皮苷对照品经过相同处理后最大吸收波长在419.5nm,芦丁对照品和样品分别经过Al2(NO3)3-NaOH-NaNO2显色后最大吸收波长在510nm和363nm。通过对3种方法的测定结果进行统计学分析,以甘草苷为对照品的测定结果分别与另外两种方法差异显著。结论选用甘草苷为对照品应用于紫外分光光度法测定甘草总黄酮成分准确度较高,是切实可行的含量测定方法。

紫外分光光度法测定甘草黄酮含量

采用分光光度法,测定了甘草中总黄酮的含量,检测波长为500nm,标准曲线相关系数R^2为0.9994,相对标准偏差为0.20%,平均加样回收率为100.20%。结果表明,此法准确度较高。

微生物发酵提高甘草渣中黄酮类物质提取率的研究

针对甘草经加工后所产生的大量残渣,选用白腐菌(黄孢原毛平革菌)与一株纤维素分解青霉菌,研究单菌种发酵与混合菌发酵处理对甘草渣中黄酮类化合物提取的影响。结果表明:与乙醇直接提取法相比,经微生物发酵处理均能有效提高甘草黄酮的得率。其中经白腐菌、纤维素分解菌发酵后黄酮得率分别为0.89%、0.87%,比乙醇直接提取法的黄酮得率(0.66%)提高了34.85%、31.82%;白腐菌与纤维素分解菌混合发酵处理,黄酮得率达到1.32%,与乙醇直接提取法相比,提高了100%,比白腐菌、纤维素分解菌单菌发酵分别高出48.31%、51.72%。

甘草黄酮提取方法及抗氧化活性研究

目的比较不同提取方法对甘草黄酮含量和抗氧化活性的影响。方法采用常规法、超声波、微波、超声-微波协同萃取4种不同提取方法提取甘草黄酮,用分光光度法测定其含量;用活性氧法测定黄酮粗品的抗氧化活性。结果4种方法提取的甘草黄酮含量分别为1.78%,1.85%,1.92%,2.04%。抗氧化活性为常规水浴提取法>微波提取法>超声波提取法>超声-微波协同萃取法。结论超声-微波协同萃取法提取甘草黄酮效果好。4种提取方法所得的甘草黄酮粗品均具有较强的抗氧化作用。

甘草黄酮对S_(180)和H_(22)荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA和RNA的影响

目的观察甘草黄酮对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤细胞DNA及RNA的影响。方法S180和H22荷瘤小鼠随机分为甘草黄酮高、中、低剂量(25、11.25、5.58 m g/kg)组,阳性对照(环磷酰胺25 m g/kg)组和阴性对照(生理盐水)组,各组均sc给药。运用激光扫描共聚焦显微镜技术与吖啶橙(AO)荧光探针技术结合检测单一肿瘤细胞DNA和RNA的变化情况。结果不同剂量甘草黄酮组和环磷酰胺组的DNA及RNA荧光强度较生理盐水组有不同程度的减弱;甘草黄酮高、低剂量组RNA/DAN值与生理盐水组比较差异无显著性;甘草黄酮中剂量组、环磷酰胺组RNA/DNA值较生理盐水组有非常显著提高(P<0.01)。结论甘草黄酮与肿瘤细胞DNA和RNA结合后抑制其进一步复制与合成,可能是其抗肿瘤作用的途径之一。

甘草查尔酮抗脂质过氧化及自由基的实验研究

应用比色法测定脂质过氧化物研究甘草查尔酮（Ｌｉｃｏｃｈａｌｃｏｎｅ，ＬＣ）的抗脂质过氧化作用。并用电子自旋捕集技术检测其对超氧阴离子自由基及羟自由基（ＯＨ－）的清除作用。实验表明，ＬＣ５０～２００ｍｇ／Ｌ时，可明显抑制家兔脑组织在温育下引起的丙二醛升高（Ｐ＜０．０１），ＬＣ２００ｍｇ／Ｌ对Ｆｅｎ－ｔｏｎ反应生成的ＯＨ－清除率达６８．３％，而对黄嘌呤／黄嘌呤氧化酶系统生成的清除率仅为１１．４％。结果表明，ＬＣ具有明显的抗脂质过氧化作用，其作用机制可能是对ＯＨ－的直接清除作用所致。

茉莉酸甲酯与二氢茉莉酮酸甲酯对悬浮培养的甘草细胞生长和黄酮积累的影响

建立了稳定的甘草细胞悬浮培养体系,在一个培养周期内,细胞的生长曲线呈"S"型,培养21d的干重、鲜重和黄酮产量都达到最高值。甘草细胞悬浮培养体系中分别添加100μmol·L-1二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯时,虽然对细胞生长有一定程度的抑制,但细胞中甘草黄酮产量仍有提高。添加二氢茉莉酮酸甲酯和茉莉酸甲酯的最适时间分别为细胞培养后的第5天和第10天。