大豆gma-miR1514b生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建

MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与光、逆境和植物激素应答相关的顺式作用元件。PMRD软件预测获得5个gma-miR1514b靶基因,分别与拟南芥CA2、NTL9和ANAC014基因同源。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiR1514b前体的植物表达载体amiR1514b-p CAMBIA3301。

枯草芽孢杆菌B1514可湿性粉剂对小麦纹枯病的防效及对土壤微生物区系和小麦产量的影响

为明确枯草芽孢杆菌B1514可湿性粉剂(WP)在小麦纹枯病防治中的应用前景,于2014–2015年在中国河北省文安县、献县、枣强县及辛集市4个实验站进行了田间试验,研究了B1514 WP对小麦纹枯病的防效,采用失重法测定了其对玉米秸秆腐解效果的影响,利用稀释平板法研究了其对土壤微生物区系的影响,并测定了该菌剂对小麦生长及产量的影响。结果表明:越冬期至拔节期,B1514 WP对小麦纹枯病的防效均显著高于B1514片剂,但明显低于戊唑醇湿拌种剂(WS);成熟期,辛集、献县和枣强试验点B1514 WP处理组平均防效为64.0%,与戊唑醇WS处理差异不显著,比B1514片剂处理组高7.2%,差异达显著水平,而文安试验点B1514 WP处理组防效为65.2%,与B1514片剂差异不显著,但显著低于戊唑醇WS处理组。在成熟期,B1514 WP对玉米秸秆的累积腐解率为64.2%,较空白对照提高38.6%,但与B1514片剂和秸秆腐解剂处理差异不显著。此外,B1514 WP处理显著提高了土壤中可培养细菌数量(92.8%),降低了真菌数量(48.4%),但对放线菌数量无显著影响。采用B1514 WP拌种后,小麦株高和分蘖数分别比空白对照提高8%和12%;4个试验点小麦平均产量为7 545 kg/hm2,分别比B1514片剂、戊唑醇WS、秸秆腐解剂处理和空白对照提高6.8%、5.5%、9.3%和10.9%。研究表明,B1514 WP对小麦纹枯病具有很好的防效,并能加速秸秆腐解,增加土壤中细菌数量、降低真菌数量,促进小麦生长并增产。

人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达

目的 克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达。方法 采用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析 ,差异显示的片段经过Northern杂交验证后 ,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选。将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX 5X 1中 ,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL 2 1,以IPTG诱导表达融合蛋白。结果 以在活化B细胞高表达的EST32为探针 ,经 3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为 15 14bp的cDNA克隆 (命名为BC 15 14)。重组的BC 15 14蛋白可在E .coli中以融合蛋白的形式有效表达 ,其表达量约占细菌总蛋白量的 14.3%左右。BC 15 14cDNA的GenBank的登录号为AF30 44 42。结论 获得了 1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E .coliBL 2 1中得到了有效表达。

大豆gma-miR4359b生物信息学分析及植物表达载体构建

MicroRNAs(miRNAs)在植物生长发育与逆境胁迫应答过程中具有重要作用,通过对大豆gma-mi-%R4359b的分析为其功能研究奠定基础。通过生物信息学对大豆gma-miR4359b的前体序列、启动子的顺式作用元件及靶基因进行分析,并构建了gma-mi R4359b植物表达载体。分析结果表明:大豆gma-miR4359b的前体序列长度为67 bp,成熟序列长度为24 bp。通过Plant-CARE网站分析gma-miR4359b启动子序列发现,在该区域除了存在基本启动子元件CAAT-box、TATA-box和TATA之外,还包括激素调控应答反应作用元件、非生物胁迫应答反应元件、参与光应答元件和伤害反应元件等。通过psRNATarget在线预测了gma-miR4359b的靶基因,推断gma-miR4359b可能参与其靶基因对细胞信号转导、细胞调控、翻译过程和非生物胁迫的调控。构建了包含gma-mi R4359b前体序列的gma-miR4359b-pCAMBIA3301植物表达载体。大豆gma-mi R4359b可能参与非生物胁迫响应,在植物生长发育过程中与逆境胁迫应答过程中起到重要作用。

gma-miR4359b抑制载体的构建及表达模式分析

MicroRNA在植物生长发育、逆境响应等多个方面具有重要的调控作用。相比保守的miRNA,存在于特定物种中的非保守性miRNA研究较少。研究发现非保守miRNA在调控作物经济性状和应对非生物胁迫等方面发挥重要作用。为了研究大豆非保守miRNA gma-miR4359b的生物学意义,本试验通过重叠PCR方法替换拟南芥内源性IPS1基因构建了抑制大豆非保守miRNA gma-miR4359b表达的mimicry4359b载体,采用RT-qPCR方法检测gma-miR4359b在大豆不同组织的相对表达量,结果表明gma-miR4359b在根中表达量最高。本研究结果为进一步研究gma-miR4359b的生物学功能与作用机制提供参考。