羊初乳免疫球蛋白IgG稳定性的研究

研究了酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶对羊初乳中免疫球蛋白IgG稳定性的影响。结果表明,IgG在pH 值为5．0～10．0时十分稳定,在pH值低于5．0的条件下,随pH值降低,变性率急剧上升;正交试验结果表明,胃蛋白酶对IgG的影响因素为pH值>作用时间>酶液浓度;最佳条件为pH 4．0,作用时间1 h,胃蛋白酶的质量浓度为0．5 mg／mL;胰蛋白酶对IgG活性的影响相对较小。

表面增强拉曼光谱对免疫球蛋白IgG分子与银基底作用的研究

采用高灵敏度的表面增强拉曼光谱(SERS)技术,以具有强SERS信号的金纳米粒子标记抗体,以此SERS标记免疫金溶胶为探针,结合扫描电镜技术,研究免疫球蛋白羊抗小鼠IgG分子与银基底的相互作用。我们发现,羊抗小鼠IgG分子可直接与银基底通过疏水作用或形成Ag-S键而牢固结合。为消除这种非特性吸附,本文以小牛血清白蛋白(BSA)封闭银基底,取得了较好的效果。

羊初乳免疫球蛋白(IgG)稳定性的研究

研究了酸、碱、糖、加热对羊初乳中免疫球蛋白(IgG)稳定性的影响。结果表明,IgG在pH值为5.0￣10.0范围内比较稳定,在pH值为低于5.0条件下,随pH值降低,变性率剧烈上升;在加热或pH2.0的环境下,糖醇化合物对IgG具有保护作用,随着糖类浓度的升高IgG的变性率降低,其中蔗糖、果糖、麦芽糖的效果较好,葡萄糖、乳糖的效果较差;羊初乳中IgG对加热比较敏感,随着加热温度的上升,其变性率增大。于55℃加热30min,变性率为25.5%;于65℃加热30min,变性率为38.1%;于75℃加热7min时,变性率已达100%;于85℃加热2.0min时变性率也已达100%。

SECM的产生收集模式检测小鼠免疫球蛋白IgG

基于扫描电化学显微镜(SECM)产生收集模式,开展小鼠免疫球蛋白IgG(作为抗原)检测研究.利用分子自组装的方式,以硫辛酸为媒介,利用金与硫的键合作用以及羧基与氨基的化学反应将羊抗鼠抗体修饰在金电极上,辣根过氧化氢酶(HRP)标记的小鼠抗原与未标记的小鼠抗原再通过竞争与有限的抗体位点结合,完成小鼠抗原检测平台的搭建.HRP与过氧化氢(H2O2)的催化反应使得对苯二酚(H2Q)被氧化为对苯醌(BQ),BQ在探针上被还原.利用逼近曲线,通过记录加入不同浓度比的小鼠抗原混合液时探针上还原电流的变化来进行待测物(小鼠抗原)的检测,结果表明,小鼠免疫球蛋白IgG在1~1000pg·mL^-1浓度范围内,探针电流与浓度的变化呈线性关系,检测限为0.1pg·mL^-1.

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原（ＥＳＡg）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工感染肝 吸虫的山羊血清中特异性ＩgＧ抗体动态变化。ＥＳＡg用量为１３．８ug/孔，抗体稀释１ ０００倍，二抗１：２０００稀释（３．５ug/孔），ＨＲＰ标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ＊）工作浓度为１：４０。检测结果表明，２组实验山羊（第１组每只羊口服２００ 个 囊蚴。

Fe_3O_4/P(AA-MMA-GMA)磁性复合微球的制备及其偶联抗体的性能

采用新型的无皂乳液聚合法制备磁性复合微球,即以丙烯酸(AA)、甲基丙烯酸甲酯(MMA)和甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)为单体,1,1-二苯基乙烯为自由基控制剂,无皂乳液聚合制备了一种磁性复合微球Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)。以所制备的Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球为载体,通过共价偶联山羊抗兔IgG抗体,得到了一种免疫磁性复合微球。研究表明,Fe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球表面带有环氧基,粒径为626nm,具有超顺磁性。0.5mgFe3O4/P(AA-MMA-GMA)微球与200μg山羊抗兔IgG抗体在pH=7.4的磷酸盐缓冲液中于25℃反应16h,可得到一种免疫磁性复合微球,其山羊抗兔IgG的偶联量为124μg,且该免疫磁性复合微球可特异性结合兔抗肌动蛋白α。

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。

羊乳中牛乳成分快速检测方法的建立

[目的]建立一种快速简便检测羊原乳中牛原乳成分的方法。[方法]以牛IgG为检测对象,建立了检测羊乳中牛乳成分的竞争免疫层析法。[结果]试验建立的方法可以检测出含有2%牛原乳的羊原乳,受基质干扰较小。[结论]该方法具有简便快捷等特点,可以用于羊原乳中牛原乳成分的快速检测。

金标记免疫共振散射光谱法测定牛初乳中免疫球蛋白G

采用柠檬酸三钠还原法制备了粒径为9 nm的金纳米微粒。结果表明:在pH 7.0的Tris-HCl缓冲溶液中,金标记羊抗牛免疫球蛋白G(IgG)与牛IgG产生特异性结合,羊抗牛IgG包裹的金纳米微粒释放出来,在聚乙二醇-20000的作用下发生聚集,导致体系在580 nm处的共振散射峰增强。当牛IgG浓度在0.013 3～1.33μg/mL范围内,随着牛IgG浓度的增加,共振散射强度线性增强,方法的检出限为0.007 95μg/mL,用于定量分析牛初乳中的IgG,结果令人满意。

胶体表面等离子体共振放大效应用于抗体的检测

在透明介质的表面,利用胶体金单层和蛋白质修饰胶体金的表面等离子体共振放大效应,发展了一种检测生物大分子的新方法,并利用该方法检测了不同浓度的羊抗人 IgG。实验结果表明,该方法不受探针和目标分子体积的影响,不需要昂贵的实验仪器,操作简单,通用性好,并有望制成点阵芯片,实现高通量检测。

高灵敏度AlGaN/GaN HEMT生物传感器设计及制作

目前AlGaN/GaN高电子迁移率晶体管(HEMT)生物传感器表面修饰及分子识别元件固定需在金属或氧化物门电极上进行,针对金属或氧化物门电极的存在增加了器件的制作难度,提高了制作成本,同时还影响了传感器灵敏度的提高等问题,提出了进行"生物分子膜"门电极的研究。传感器的表面采用3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)进行修饰作为分子识别元件固定的基底,该方法在降低传感器的制作成本的同时,提高了传感器的灵敏度,传感区域为长度L=5μm、宽度W=160μm的传感器测量质量浓度为0.1ng/mL的山羊免疫球蛋白(IgG)时,传感器源漏间电流呈现约30μA的电流降。该传感器反应速度快,适用于实时监测,在环境监控、医疗等领域有着良好的应用前景。

间接荧光抗体试验诊断阿米巴病的意义与影响因素

本文应用间接荧光抗体试验方法检测3例阿米巴肝脓肿,结果均阳性,28例肠阿米巴病阳性15例(53.4%)。其中检出大滋养体者100%阳性,而检出小滋养体和包囊携带者均阴性.

日本血吸虫31/32kDa循环免疫复合物的检测及其在疾病诊断中的作用

检测血吸虫循环免疫复合物（CIC）有助于提高疾病的检出率。利用抗血吸虫单克隆抗体H226和碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG（Fc）作捕捉ELISA，检测日本血吸虫病患者血清中CIC，其阳性检出率为92．2％，其中，EPG＜100的病人阳性检出率为90．0％，EPG＞100的病人阳性检出率为95．5％，两者无显著性差异。由于羊抗人IgGFc段能与CIC中人IgG的Fc段特异性结合，因此不仅省去了常规分离CIC的步骤，而且有助于提高试验的敏感性和特异性。

游离甲状腺素化学发光免疫分析方法的建立

目的采用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,使用鲁米诺-双氧水-辣根过氧化物酶化学发光体系作为检测体系,建立测定血清中游离甲状腺素的化学发光免疫分析方法。方法利用竞争法建立游离甲状腺素的检测体系,分别对该体系进行分析性能评估、2016年度内分泌室间质评,并与进口全自动发光试剂盒检测结果进行一致性检验。结果在4~64pmol/L的校准曲线范围内相关系数0.9995,最低检出限为0.54pmol/L,批内和批间精密度均小于7.0%,稳定性结果良好,不影响检测结果。2016年全国室间质评测定结果均在允许范围内,与进口西门子发光试剂盒有很好的临床符合性,两种试剂盒的样本测值差异不具有统计学意义。结论本方法利用二抗-甲状腺素抗体固相两步包被法,在节约包被原料的同时改善了精密度且提高了灵敏度,最后通过临床血样的一致性评价,与参比试剂盒具有同等的临床使用价值。

羊抗人IgG在金纳米通道中的迁移

以聚碳酸酯超滤膜为基板,用化学镀的方法在超滤膜上沉积金,制得直径在45nm左右的金纳米通道阵列,利用制得的金纳米通道阵列搭建离子电流测量平台,可实现对羊抗人IgG分子的浓度检测.当羊抗人IgG分子通过直径45nm的金纳米通道时,由于物理占位及表面电荷的影响,会引起离子电流发生变化;在KCl浓度为0.15mol/L(pH7.48)溶液中,IgG分子的物理占位对离子电流有阻塞作用,会导致电流减小,IgG浓度在1.8～18ng/mL范围内,减小量与浓度成线性关系;实现了对IgG的定量检测.KCl浓度降低到0.025mol/L时,由于IgG分子扩散层内反离子对通道内离子浓度的贡献占主导地位,从而造成离子电流随着IgG浓度增大而增大.