早期香蕉枯萎病Foc4双探针核酸纸基检测传感器研制

为实现对早期香蕉枯萎病4号生理小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense 4, Foc4)的准确检测,该研究提出一种基于胶体金的双探针纸基传感器。该传感器将2种不同粒径的胶体金分别与检测探针和信号增强探针结合,利用DNA探针代替抗原和抗体,形成双探针体系,通过增加信号增强探针降低检测限。基于目标序列与双探针体系的碱基互补配对形成“金标探针-目标序列-T线探针”复合物并在传感器的测试区被捕获,10 min内形成肉眼可见的目标产物,通过分析测试条带得到光强度峰面积并代入标准曲线中,实现Foc4定量检测。试验结果表明,双探针纸基传感器的检测限达到0.001 nmol/L,是传统纸基传感器的100倍,提高了检测灵敏度;在0.001~1 000.000 nmol/L范围内,Foc4浓度与测试线光强度峰面积呈线性关系;使用高浓度非互补探针进行试验干扰,发现非互补序列对检测效果基本无影响,表明该传感器具有较好的特异性;香蕉叶片Foc4检测的平均回收率为77.6%~102.3%,相对标准偏差为7.4%~7.7%。与传统形态学观察等检测方法相比,该研究提出的双探针核酸纸基检测传感器可以及时、快速、准确地判断早期Foc4的存在,具有良好的推广性和实际应用价值。

多色比色法在生物传感平台的研究进展

比色法是生物传感中较为常用的一种检测手段,因其具有较高的灵敏度和特异性而受到广泛关注。其中,基于多色探针的多色比色法已成为近年来的研究热点,灵敏度较单色比色法显著提高、且具有更高的分辨率和肉眼辨识度,通过观察颜色变化可进行可视化半定量检测,又可通过计算颜色比率或基于智能手机图像处理软件进行快速定量检测。基于有机小分子荧光显色、纳米材料显色及酶促反应显色3种不同的显色机理,综述了多色荧光小分子探针、多色纳米材料比色探针及多色酶促反应比色探针的检测机理以及它们在实际样本检测中的应用,并进一步探讨了其面临的挑战及未来发展机遇。

酪蛋白-金银合金纳米簇的制备及其对金霉素的荧光检测

以酪蛋白为保护剂和还原剂,采用优化的一锅加热合成方法,成功制备一种新型金银合金纳米簇(Au-AgNCs@casein)。产物在325 nm最佳激发波长下有双荧光发射峰,通过红外光谱、透射电子显微镜等方法对其进行结构表征。在常见离子或氨基酸存在下,金霉素(CTC)可明显增强比率型探针Au-AgNCs@casein的荧光,其结构类似物却无明显影响。因此,本研究中制备的纳米簇可快速、灵敏、选择性检测CTC。

Probing of Ultrafast Plasmon Dynamics on Gold Bowtie Nanostructure Using Photoemission Electron Microscopy

We report the direct imaging of plasmon on the tips pulses and probing of ultrafast plasmon dynamics by of nano-prisms in a bowtie structure excited by 7 fs laser combining the pump-probe technology with three-photon photoemission electron microscopy. Different photoemission patterns induced by the plasmon effect are observed when the bowties are excited by s- and p-polarized femtosecond laser pulses. A series of images of the evolution of local surface plasmon modes on different tips of the bowtie are obtained by the time-resolved three-photon photoemission electron microscopy, and the result discloses that plasmon excitation is dominated by the interfer- ence of the pump and probe pulses within the first 13 fs of the delay time, and thereafter the individual plasmon starts to oscillate on its own characteristic resonant frequencies.

云南思茅盆地大平掌铜金多金属矿床金的赋存状态

大平掌矿床是西南三江地区重要的铜金多金属矿床,为系统地对比研究矿区16号勘探线新发现两类金矿体,即V1块状硫化物矿体中顺层产出的层状金矿体、穿层断裂带中的网脉状金矿体中金的赋存状态、载金矿物类型,探讨金的沉淀机制。文章基于详实的野外地质调查,运用光学显微镜、扫描电镜(SEM)观察,结合电子探针(EPMA)分析和激光剥蚀电感耦合等离子体质谱(LA-ICP-MS)原位微量元素分析。结果表明,两类金矿体矿石中可见金为金的独立矿物(银金矿、碲金矿、碲金银矿),以裂隙金形式赋存,层状金矿体矿石中还可见晶隙金;热液型黄铁矿是两类金矿体矿石的主要载金矿物,其中“不可见金”均以固溶体金(Au+)为主,存在极少数的纳米金(Au0)。两类金矿体金的成矿均受后期东西向断裂带影响,为后期具有较高碲逸度的成矿热液充填成矿提供有利空间,金的独立矿物颗粒细小且分布不均,是由流体的沸腾和混合作用以及不平衡、不稳定的流体体系造成;两类金矿体中固溶体金(Au+)均由Au+占据黄铁矿晶格空位或缺陷等畸变形成。

内蒙古北山老硐沟金矿石榴子石地球化学特征

老硐沟金矿是北山成矿带东段发现的中型金矿床,是多期次多阶段成矿作用叠加的产物,矿床成因类型复杂。矿床共分为5个矿段,其中Ⅲ矿段以矽卡岩矿体为主。矽卡岩矿物以石榴子石为主,可分为早、晚两期,早期石榴子石更具震荡环带。通过详细的镜下观察和电子探针对两期石榴子石进行了系统研究,早期石榴子石核部以钙铝榴石组分为主,向边部为钙铁-钙铝过渡组分;晚期石榴子石以钙铁榴石为主。石榴子石化学成分特征表明,早期矽卡岩化阶段,热液环境为中酸性、弱氧化—弱还原环境;后期铁质含量增多,氧逸度增加,热液环境碱性、氧化性增强。老硐沟金矿Ⅲ矿段石榴子石为钙铁-钙铝榴石系列,属热液交代成因,早期多形成钙铝-钙铁榴石,伴随铜矿化,晚期热液环境变化,钙铁榴石增多,黄铁矿化、毒砂矿化增多,造成金富集成矿。

氧氟沙星单克隆抗体的制备及生物条形码检测技术的研究

目的制备氧氟沙星单克隆抗体,采用生物条形码技术测定氧氟沙星残留量。方法采用碳二亚胺法合成氧氟沙星完全抗原后,用免疫原免疫小鼠,将特异性强的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。通过杂交瘤细胞的多次“筛选-亚克隆”过程,制备氧氟沙星单克隆抗体。其次,制备纳米金复合探针、磁性纳米探针,建立基于荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的生物条形码检测方法,在最优条件下采用荧光定量PCR生物条形码检测方法间接测定动物源性食品中氧氟沙星残留量。结果氧氟沙星线性回归方程为Y=14.4263logX+0.09184,r^(2)=0.96。在0.1~128.0 ng/mL范围内,检出限为1.14 ng/mL,添加回收实验结果显示,氧氟沙星平均回收率和相对标准偏差分别为85.8%~102.6%、1.8%~2.6%。结论基于荧光定量PCR生物条形码免疫分析方法检测氧氟沙星的结果可靠,能够应用于实际样品的检测,为氧氟沙星的检测技术提供新的方向。

环丙沙星生物条形码检测技术的研究

该文对快速检测食品中环丙沙星残留的生物条形码检测技术进行研究。首先将环丙沙星多克隆抗体与条形码DNA链共同修饰在纳米金颗粒上制备纳米金复合探针、环丙沙星单克隆抗体与磁性颗粒结合制备磁性探针,然后对其采用可见光光谱法、透射电镜法进行鉴定;其次将上述探针与环丙沙星标准品进行杂交反应,在磁场的作用下,去除未结合的纳米金复合探针,然后收集标记成功的纳米金复合探针释放出的DNA链,采用微孔板银染的生物条形码技术进行检测,得到环丙沙星残留量。检测环丙沙星的最低检出限为2.13 ng/mL。该方法与常规免疫检测方法相比灵敏度增强,具有实用性,为未来检测小分子物质残留量提供了新思路,也为制备环丙沙星生物条形码检测试剂盒奠定了基础。

大豆蛋白金纳米簇“关—开”型荧光探针检测炭疽杆菌生物标志物DPA

炭疽杆菌是高致病性病原微生物,引起的炭疽病在我国属于乙类传染病,因此建立操作简便、灵敏准确的炭疽杆菌检测方法对预防和控制炭疽传播,维护公共卫生安全至关重要。该研究创新性地提出以绿色材料大豆蛋白为保护剂和还原剂,采用微波加热法合成了一种具有强烈红色荧光发射的大豆蛋白金纳米簇(SPI-AuNCs)。采用TEM、 UV-Vis、 FL、 XPS、 FTIR等方法表征了SPI-AuNCs的成功合成和部分特殊性能。结果表明SPI-AuNCs呈球形,粒径大小在1.8~3.2 nm范围内,平均粒径为2.65 nm,在500~550 nm范围内未出现表面等离子体共振峰;SPI-AuNCs的最大激发波长为370 nm,最大发射波长为680 nm。SPI-AuNCs的表面官能团主要有—NH、—COOH、—OH、—SH等官能团,元素的组成主要包括C、 N、 O、 S、 Au元素。根据Cu^(2+)与SPI-AuNCs表面基团通过配位作用形成非荧光复合物,使荧光猝灭;而2,6-吡啶二羧酸(DPA)与Cu^(2+)具有更高的亲和力,可将Cu^(2+)从SPI-AuNCs表面竞争下来,使荧光恢复,据此建立了一种荧光“关-开”策略检测DPA的新方法。在最佳实验条件下,荧光恢复率(ΔF/F_(1))与DPA的浓度在1.15~70.0μmol·L^(-1)范围内呈良好的线性关系,线性方程为ΔF/F_(1)=0.011c+0.131,相关系数r=0.991,方法检出限为0.34μmol·L^(-1)。同时,通过加标回收实验研究了湖水和牛奶样品中DPA,得到加标回收率在97.3%~103.6%,表明了该方法在环境和食品样本DPA的检测中具有很大的应用潜力,可以为环境监测和食品安全提供方法学支持。

猪乙型脑炎血清抗体DIGFA检测方法的建立与应用

本试验建立了一种以固相滤膜为载体,以红色胶体金颗粒标记的兔抗猪IgG作为探针,特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）。与血凝抑制试验（HI）对比检测了54份猪血清临床样本,两法的阳性符合率为71.4％、阴性符合率为65.5％、总符合率为81.4％。本法中抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应,数分钟内即可用肉眼观查结果,具有快速,操作简单,敏感性高,特异性强,重复性好,易于判读等优点,特别适合于猪流行性乙型脑炎快速诊断和大规模血清流行病学调查。

犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究

建立一种简便、快速、准确检测犬细小病毒(CPV)的胶体金免疫层析法(GICA)。采用柠檬酸三钠法制备胶体金颗粒,标记纯化的CPV单克隆抗体,在玻璃纤维素膜上喷加纯化的CPV多克隆抗体,制成诊断CPV抗原的快速诊断试纸条。用本试验研制的CPV试纸条检测收集到的120份犬粪便样品,其结果与HA结果相比对,HA效价在1∶40以上,试纸条均能检测到为阳性。CPV试纸条与犬瘟热病毒及犬传染性肝炎病毒无交叉反应。且试纸条保存6个月后,其检测结果重复性为100%。试验证明,本研究建立的GICA是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可在临床上广泛应用,也可用于CPV的流行病学调查。

HBsAg Mab胶体金探针制备与鉴定的实验研究

目的:研制合格的乙肝表面抗原单克隆抗体(HBsAg Mab)标记的胶体金探针。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备15nm的胶体金;所制备的胶体金通过透射电镜和紫外分光计度计鉴定其大小和均匀度。通过CVAI曲线,确定胶体金标记HBsAg Mab蛋白用量;采用斑点免疫吸附试验对探针进行鉴定。结果:制备的15nm胶体金颗粒均匀;紫外分光光度计400-700nm扫描结果最大吸收波长为518nm,峰宽较窄;纯化的HBsAg Mab浓度为65mg/mL;在PH为8．2时,每毫升胶体金的蛋白最适保护量为32．5μg;采用斑点免疫吸附试验鉴定探针质量合格,可保存3个月。结论:制备的HBsAg Mab胶体金探针质量合格,为进一步研究提供手段。

纳米金生物探针及其应用

纳米技术与生物技术的融合,使纳米生物技术获得了很多重要的进展。纳米金作为研究较早的一种纳米材料,其在纳米生物探针方面的应用是最近几年较为活跃的研究方向。本文评述了近年来纳米金探针在生物分析中的应用及进展,阐述了纳米金与生物大分子作用的机理,介绍了纳米金探针在核酸分析、免疫分析、单细胞分析和靶向药物载体4个方面应用的最新进展,并对其未来的发展方向进行了展望。

金纳米粒子探针的合成及应用

由于金纳米粒子(AuNPs)具有与大小、形状和聚集程度相关的物理和化学特性,被广泛应用于各种生物分析和生物医学检测技术中,并发展成具有高选择性、高灵敏度的生物分析检测手段。以AuNPs为探针的分析方法通常具有简单、快速、灵敏度高的优点,并能应用于实际样品检测。本文综述了目前生物分子修饰的AuNPs探针的合成及其在检测金属离子、小分子、DNA、蛋白质和细胞内分析等方面的应用。

斑点免疫金渗滤法检测边虫病的研究

应用自行制备的直径２５ｎｍ～３０ｎｍ的胶体金标记ＳＰＡ，建立了检测抗边虫抗体的斑点免疫金渗滤试验（ＤＩＧＦＡ），同时作与补体结合试验（ＣＦＴ）、团集凝集试验（ＣＡＴ）比较试验，结果表明ＤＩＧＦＡ是一种检测边虫病抗体的敏感性高、特异性强、重复性好的快速、简便易行方法。

基于纳米金探针和蛋白芯片高灵敏检测肺癌CEA和CYFRA21-1标志物

目的构建基于纳米金探针和蛋白芯片的快速、多肿瘤标志物高灵敏检测体系。方法将待检测的肿瘤标志物捕获抗体(捕获待测抗原)结合在醛基化修饰的玻片上;用检测抗体制备纳米金探针;经过免疫反应形成三明治夹心结构(蛋白芯片-目标蛋白-纳米金探针)。利用纳米金沉积的方法进行染色,通过肉眼或显微镜观察显色结果。结果该蛋白检测体系在1 h内可检测两种肿瘤标志物,其中CEA可检测到最低浓度为45 pg/mL,CYFRA21-1可检测到90 pg/mL,与传统的酶联免疫吸附法(ELISA)相比,检测灵敏度大大提高。并利用此体系,检测肺癌患者及正常人血清,结果与临床所用电化学分析方法一致。结论该检测体系操作简单、方便、快速,同时具有高灵敏度、多指标联合检测等优点,在临床蛋白检测中具有重要的价值和应用前景。

新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的实验研究

目的构建一种新型纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,探讨纳米金界面上进行寡核苷酸探针固定的最佳条件。方法构建纳米金颗粒修饰的石英晶振生物反应界面,进行巯基修饰的寡核苷酸探针的固定,对纳米金自组装pH值条件、探针固定浓度等影响因素进行实验研究;将构建的传感器和未经纳米金颗粒修饰的传感器用于铜绿假单胞菌检测,比较两种传感器的响应性能,并进一步对该纳米金界面压电石英晶体DNA传感器的再生进行研究。结果纳米金自组装的最佳pH值为6.0,探针最佳固定浓度为3.0μmol/L。纳米金颗粒修饰的石英晶振的响应性能大于未经修饰的石英晶振,可以重复使用5次。结论纳米金界面压电石英晶体DNA传感器,具有不需标记、操作简单、能实时在线检测、频率响应性能高、无污染和能重复使用等优点,在临床实验诊断方面应用前景广阔。

纳米探针芯片技术用于微量乙肝病毒DNA的检测

利用两组探针修饰的微粒:(1)表面标记有可与待测乙肝病毒(HBV)DNA另一端结合的纳米金探针1(信号探针)以及可与信号探针部分结合的纳米金探针2(检测探针);(2)表面标记有可与待测HBVDNA一端结合的磁珠探针(捕捉探针1)。检测靶HBV DNA时,磁珠探针与信号探针在液相中可分别与HBV DNA靶序列一端结合最终形成三明治样结构。再以磁场将三明治样复合物从反应液中分离,以DTT溶液将信号探针从纳米金颗粒上洗脱。洗脱后的信号探针数量反映靶基因的多寡,信号探针一段与预先点样的基因芯片上的捕捉探针2结合,检测探针与信号探针另一段相结合,最后用银染液将检测探针显色从而得到靶目标DNA相对定量信息。结果表明,本检测方法的检测灵敏度达到10-15mol/L水平。检测时间少于1.5h,检测结果与HBV DNA水平呈现较好的线性关系且无假阳性结果;本方法有望用于乙肝病人血清中HBV DNA的快速筛测及其它微生物基因的检测。

用于扫描探针显微镜研究的原子级平整金基底的制备

报导了一种用于扫描深外显微镜（SPM）研究的原子级平整全基底的制备方法．采用这种方法，得到了25um2范围内，膜的平均粗糙度小平0.4nm的原子级平整基底，并且得到金以（111）面取向在云母表面沉积的实验证据，同时使用电化学循环伏安法和X光电子能谱对这种膜的自组装性能进行了考察．

基于金纳米簇的荧光猝灭分析法测定食品样品中的亚硝酸盐

亚硝酸盐广泛存在于饮用水、食品、环境和农产品中,是一种严重危害人体健康的物质。在酸性条件下,以蛋白质保护的金纳米簇AuNCs@BSA为荧光探针,建立了一种高灵敏检测亚硝酸钠含量的方法。结果表明,亚硝酸钠可以引起金纳米簇的荧光猝灭,在0.3~60μmol/L的浓度范围内具有良好的线性响应关系,最低检测限为32 nmol/L。利用建立的方法对香肠中的亚硝酸钠进行了定量测定,并与UV-Vis检测结果进行对比,结果证明该方法在实际样品检测中具有巨大的应用潜力。同时基于AuNCs@BSA在酸性条件下可以有效地与亚硝酸盐发生荧光猝灭作用,通过圆二色谱,证明在酸性条件下配体BSA的蛋白二级结构的变化,从而详细研究了AuNCs@BSA的荧光猝灭机理。机理研究为无机小分子与蛋白质保护的金纳米簇之间的相互作用提供了参考。