山羊外源基因转移技术

对24头供体山羊进行超数排卵处理,16头超排有效。在第1次配种后48h左右取卵,共收集到卵155个。回收率79.08％(155/16)。平均每头供体排卵12.25个(196/16)。在Normarski干涉相差显微镜下观察65个单细胞受精卵及29个2～4细胞期胚胎的原核及细胞核,并分别注射人生长激素基因(p^(SMGHI)/BamHI),其中91枚移植到经同期发情处理的14头受体中。结果7头妊娠,共产活羔11头,死胎1头。经用Digoxigcnin标记核酸探针对转移基因羊检测,4头整合了外源基因。整合频率为33.33％(4/12)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对仍存活的2头未整合、2头整合羊检测是否表达外源基因,全为阴性。

逆转录病毒介导的人促红细胞生成素基因在淋巴细胞中的表达

本实验设计和构建了人促红细胞生成素（Epo）重组逆转录病毒载体（LXSN-Epo）,载体中小鼠白血病病毒长末端调控序列翻译调控人Epo基因的表达。通过重组逆转录病毒,将Epo基因转导到大鼠T和B淋巴细胞中,DNA-PCR分析证明带有人Epo基因的逆转录病毒已整合到T和B淋巴细胞基因中,RT-PCR分析显示了在两种细胞中均表达了 Epo mRNA。体外生物学活性测定显示,在转导的T淋巴细胞培养上清中Epo表达水平高达243mU/ml,在感染的B淋巴细胞培养上清中Epo活性达43mU/ml。在感染的B细胞中,Epo表达在mRNA和蛋白水平均证明了逆转录病毒能有效地和迅速地转导Epo基因到新培养的B细胞中,而不需要药物选择。这些研究开始了逆转录病毒介导的基因转移走向体内Epo基因治疗研究的过程。