HIV-2gag-gp105嵌合基因DNA疫苗对小鼠的免疫原性研究

利用真核表达载体 pVAX1 构建 HIV-2 gag-gp105 嵌合基因的重组质粒 pVAX1gag-gp105,将其转入 BHK21细胞中,利用间接免疫荧光方法检测其表达情况。进一步分别将核酸疫苗质粒 pVAX1gag-gp105、对照组质粒pVAX1 和 PBS 溶液经肌肉注射免疫 BALB/c 小鼠,检测免疫小鼠脾 CD4+、CD8+T 细胞亚群的数量,脾特异性 CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示,重组核酸疫苗质粒 pVAX1gag-gp105 疫组小鼠脾 CD4+、CD8+T 细胞亚群的数值均比对照组高( P<0.01),脾特异性 CTL 杀伤活性与对照组相比差异极显著(P<0.01),血清抗体滴度显著高于对照组(P<0.01) 。以上结果表明,HIV-2 gag-gp105 嵌合基因 DNA 疫苗对 BALB/c 小鼠具有良好的体液和细胞免疫原性。

HIV-2gp105-gag截短体在毕赤酵母中重组表达研究

目的 实现HIV 2 RODgp10 5 gag截短体重组蛋白tgp10 5 gag的高效分泌表达 ,对其表达条件进行研究。方法 用PCR方法获得HIV 2 RODtgp10 5截短基因 ,将其与HIV 2 RODgag构建HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合基因并克隆到毕赤酵母 (Pichiapastoris)分泌型表达载体pPIC9中 ,转化GS115酵母菌 ,经MD/MM表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆 ,以甲醇诱导表达后进行SDS PAGE分析及Westernblot证实。结果 HIV 2 RODtgp10 5 gag嵌合截短基因在Pichiapastoris酵母系统中获得了有效分泌表达 ,相对分子质量 (Mr)约为 14 0× 10 3 ,表达量约为 16 % ,表达产物可被HIV 2阳性血清识别。最佳表达条件是大于 85 %的溶解氧 ,摇瓶转速 2 4 0r/min ,1.0 %～ 1.5 %甲醇诱导 ,培养时间 3d。结论 在Pichiapas toris表达系统中实现了HIV 2 RODtgp10 5 gag蛋白的有效分泌性表达 ,表达产物具有良好的抗原特异性。