电针对脑缺血再灌注小鼠脑组织NOX2/gp91phox表达的影响

目的:探讨电针对脑缺血再灌注(I/R)损伤后的神经保护机制,明确电针对脑损伤后氧化应激的抑制作用。方法:采用小鼠大脑中动脉闭塞模型制备脑局灶性缺血1 h再灌注3、24、48 h模型。每组又分为模型组、电针组、药物组、gp91phox基因敲除组(下文简称基因组),另设同时段假手术组。以神经功能缺损评分和局灶脑血流(rCBF)变化为造模成功和效应指标,并RT-PCR检测NOX2/gp91phox基因在小鼠脑组织的表达情况,光泽精增强发光法检测NOX活性。结果:①神经行为学评分:造模各组均有不同程度的缺损表现,再灌注即刻缺损情况较再灌注干预后严重,基因组灌注即刻评分明显低于模型组(P<0.05),与模型组比较,灌注后3、24、48 h基因组、药物组、电针组神经行为学评分均明显降低(P<0.05)。②rCBF:各造模组rCBF明显减少,灌注后3、24、48 h各组rCBF均有增加,药物、电针组比模型组升高明显(P<0.05)。③NOX活性:模型组各时相之间无明显差异,基因组NOX活性无明显表达(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物和电针组的组间比较无明显差异。④NOX2/gp91phox基因表达:模型组各时相之间无明显差异,基因组无蛋白表达,与各组比较均有显著差异(P<0.01),药物组、电针组比模型组的同时相均有明显下降(P<0.01),药物组和电针组的组间比较无明显差异。结论:通过与敲除gp91phox基因组的小鼠相比较,电针“百会”“大椎”穴位可以通过抑制NOX2/gp91phox表达,达到抑制I/R后小鼠的氧化应激损伤效果,发挥保护脑组织的作用。

雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制（英文）

目的探讨雌马酚对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制。方法以PC12细胞为研究对象,构建体外神经元缺氧/复氧损伤模型,用雌马酚进行干预。MTT法检测细胞活力,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量,免疫细胞化学法检测活性氧(ROS)含量,Western blotting检测缺氧/复氧损伤的PC12细胞内NADPH氧化酶2(gp91phox)和磷酸化Src(p-Src)激酶的表达。结果雌马酚可有效减轻缺氧/复氧引起的PC12细胞损伤,降低缺氧/复氧损伤细胞培养上清液中LDH的活性和MDA的含量,明显抑制ROS的生成及gp91^(phox)和p-Src的表达。结论雌马酚通过抑制p-Src激酶和gp91^(phox)表达,减少ROS生成,从而对PC12细胞缺氧/复氧损伤产生保护作用。

缬沙坦对人冠脉内皮细胞氧化应激过程中gp91^(Phox)的影响

目的研究缬沙坦对人冠脉内皮细胞(HCAEC)氧化应激过程中gp91Phox的影响。方法对照组:体外贴壁培养HCAEC,不进行其他干预;实验组:相同培养条件下加入缬沙坦(10μmol/L)培养24 h。应用Western blot法和细胞免疫荧光法测定两组细胞中gp91Phox的水平,对两组结果进行统计分析并比较。结果实验组HCAEC中gp91Phox的水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论缬沙坦可以显著减少HCAEC中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91Phox的表达,从而降低氧化应激水平。

偏硅酸钠对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧生成的影响

目的观察偏硅酸钠(Na2SiO3)对高脂血症家兔外周血白细胞活性氧(ROS)生成的影响,为其抗动脉粥样硬化(AS)作用提供进一步支持。方法 12只健康雄性新西兰大白兔随机分为正常对照组,高脂血症组,喂硅组,每组4只。分离各组家兔外周血白细胞后检测加或不加脂多糖(LPS)和N-甲酰-甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酸(f MLP)条件下的ROS。以RT-PCR的方法检测CD36,TLR4,TLR2及gp91phox m RNA的表达。结果高脂血症组和喂硅组血浆胆固醇均显著高于正常对照组,但两组间无显著差异(P>0.05),高脂血症组白细胞ROS的生成量比正常对照组增加(P<0.01),喂硅组比高脂血症组ROS生成量减少(P<0.01),高脂血症组单个核细胞及中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2和gp91phox的m RNA均比正常对照组显著增加(P<0.01),喂硅组这四种基因的m RNA均显著下调(P<0.01)。结论 Na2SiO3对LPS和f MLP刺激的高脂血症家兔外周血白细胞产生ROS有抑制作用;饮用Na2SiO3可以下调高脂血症家兔外周血单个核细胞和中性粒细胞CD36、TLR4、TLR2及gp91phox m RNA水平,Na2SiO3的这种作用不通过降低血脂而实现。

慢性肉芽肿性疾病原始单核细胞的基因转移

慢性肉芽肿性疾病(CGD)是因编码吞噬细胞特异性酶系NADPH氧化酶基因中的分子病变引起的一组异型性的原发性免疫缺乏症。该系由一种界膜黄胞色素b558构成,黄胞色素b558又由亚单位p22phox,gp91phox及三个胞浆因子p47phox,p67phox,p21rac组成,细胞激活时,它们易位至膜上。导致CGD分子病变成分除p21rac外皆已鉴定,60％分子病变产生于编码gp91phox的连锁基因。余者遵循常染色体隐性遗传。

心肌梗死大鼠奥美沙坦酯灌胃后AT1受体和gp91^(phox)表达变化的实验研究

目的观察心肌梗死(MI)后大鼠予奥美沙坦酯(OLM)灌胃后血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型(AT1)受体表达的变化,以及尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)活性及其亚单位gp91^(phox)表达的变化。方法选择体质量270~380 g的雄性SD大鼠,随机分为对照组、奥美沙坦酯组、安慰剂组,对照组以5-0线穿绕但不结扎前降支(LAD);奥美沙坦酯组结扎LAD后予奥美沙坦酯灌胃(10 mg/kg)4周;安慰剂组LAD结扎后,经灌胃注入等容积蒸馏水4周。4周后称重并计算左室质量指数(LVMI),分离出左室中非梗死部位的心肌组织,检测AT1受体mRNA、gp91^(phox)mRNA及其蛋白的表达程度、超氧阴离子自由基(O_(2)^(-))水平、NOX活性。结果安慰剂组LVMI、AT1受体mRNA的表达程度、gp91^(phox) mRNA的表达程度、gp91^(phox)蛋白同内参GAPHD的灰度比、O_(2)^(-)浓度、NOX活性均高于对照组及奥美沙坦酯组,差异均有统计学意义(P<0.05)。gp91^(phox)mRNA与AT1受体mRNA表达程度呈正相关(r=0.729,P<0.05);O_(2)^(-)浓度与gp91^(phox)mRNA表达程度及NOX活性呈正相关(r值分别为0.735,0.843,P<0.05)。结论心肌梗死后大鼠AT1受体被激活,NOX活性增加,O_(2)^(-)增多,氧化应激反应加剧,导致左室重构;奥美沙坦酯阻断AT1受体后,NOX活性及其亚单位gp91^(phox)表达降低,O_(2)^(-)减少,从而减缓氧化应激反应,防止心肌梗死后左室重构。

低频磁场通过调控MDSCs的功能抑制结肠癌的生长

磁场生物效应是当前生物医学工程学界的研究热点.磁场对人类自身的影响与健康效应已引起人们的普遍关注,涉及对中枢神经系统、血液和免疫系统、血管与内分泌系统等效应的研究,其中引人注目的是低频磁场在肿瘤治疗方面的应用.前期研究发现,低频磁场能够明显抑制肝癌、肺癌和黑色素瘤细胞的增殖和调控免疫细胞来发挥抑瘤作用.本研究将进一步探究低频磁场(0.4 T, 7.5 Hz)对结肠癌细胞的生长和髓系来源的抑制性细胞(MDSCs)的影响.本研究建立了小鼠结肠癌移植瘤模型,通过流式细胞术、免疫组化、实时定量PCR、蛋白质印记等技术研究了低频磁场对结肠癌和MDSCs的影响.结果发现,低频磁场明显抑制CT26结肠癌移植瘤模型的肿瘤生长,降低了肿瘤组织中的Ki-67阳性细胞数.低频磁场降低了肿瘤组织中MDSCs的细胞比例并减弱了MDSCs的抑制功能.体外实验发现低频磁场通过抑制了Gp91^(phox)和P47^(phox)的表达降低了MDSCs的活性氧(ROS)产生,抑制了MDSCs的功能,进而发挥对结肠癌治疗作用.