gp96-肽复合物体外诱导CTL反应及其抗肿瘤效应研究

目的研究小鼠肝癌腹水瘤H22细胞来源的gp96-肽复合物体外诱导小鼠脾淋巴细胞特异性细胞毒T细胞(CTL)的产生及其抗肿瘤效应。方法利用蛋白提取纯化技术、Western blot法、细胞培养技术、流式细胞术、CCK-8法、RT-PCR法等研究gp96-肽复合物体外诱导扩增CTL及其抗肿瘤效应。结果流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8^+T细胞比例达到近70％,远远高于对照组的35％、26％。该活化的CTL细胞在效靶比为50：1时的肿瘤细胞杀伤率达72％与对照组相比具有统计学意义；将活化的CTL细胞回输小鼠体内能产生对该肿瘤细胞良好的过继性免疫保护,延长荷瘤小鼠的生存时间；RT-PCR法检测该活化的脾细胞较正常脾淋巴细胞高表达IFN-γ mRNA。结论小鼠肝癌腹水瘤H22细胞来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,并增强脾细胞IFN-γ mRNA的表达,该CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫作用。

人腺样囊性癌细胞热休克蛋白gp96肽复合物的纯化和鉴定

目的:建立从人腺样囊性癌细胞系中提取gp96-肽复合物的方法。方法:培养人腺样囊性癌(ACC-M和ACC-2)细胞系,经裂解、盐析、过Con A亲和柱、透析、DEAE-Sepharose离子交换层析后得到目的蛋白,对进行蛋白质浓度、分子量及性质进行鉴定。结果:取湿重同为1g的两株细胞,纯化后得到总量分别为77μg和85μg的产物,电泳结果显示纯化蛋白分子量约为96KD,western blot显示产物是gp96-肽复合物。结论:采取上述方法从腺样囊性癌细胞中得到了较高纯度的gp96-肽复合物。