大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓IL-6、IL-6受体表达的关系

目的 观察大鼠去卵巢后骨髓源性破骨细胞形成的动态变化及其与骨髓细胞IL-6、IL-6受体以及gpl30基因表达水平改变的关系。方法 健康3月龄雌性SD大鼠60只,30只作为假手术对照组,30只经腹手术去卵巢。分别于去卵巢后2,4,6,8,12周取去卵巢组和对照组各6只大鼠骨髓细胞作细胞培养和提取RNA。培养的第6天分别作瑞氏-吉姆萨染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,以胞核3个或3个以上以及TRAP(+)为破骨细胞标志,计数细胞数。骨髓细胞提取总RNA进行逆转录PCR。结果 术后2周去卵巢组破骨细胞形成数即多于对照组(P<0.05);第4-6周,去卵巢组破骨细胞形成达高峰,明显多于2周(P<0.01);去卵巢后的8周,较峰值下降,直至12周去卵巢组破骨细胞形成数仍高于对照组(P<0.05)。与破骨细胞的变化相对应,术后2周,骨髓细胞IL-6及IL-6RmRNA表达均明显增高(分别为P<0.01,P<0.05);第4周时,IL-6表达水平达到高峰,保持至第6周,IL-6R表达则在第6周达最高;第8周,IL-6、IL-6R基因表达水平较峰值下降,但直至第12周仍高于对照组。去卵巢后全程未见gp130基因表达水平有明显变化。结论 大鼠去卵巢后骨髓干细胞分化形成破骨细胞明显增加,呈时间相关动态过程,第6周达高峰,这一过程与骨髓细胞IL-6、IL-6R基因表达的动态变化一致,提示去卵巢后骨髓细?

白介素-6保护小脑颗粒神经元抵抗NMDA的神经毒性作用

近来研究发现,细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)不仪是重要的免疫调节因子,而且也是重要的神经调节因子。中枢神经系统中IL-6的作用是复杂的,尤其是对脑损伤时IL-6所发挥的作用及其作用机制尚不十分清楚。为此,我们利用N-甲基-D-天门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)处理小脑颗粒神经元引起急性损伤的细胞模型,探讨IL-6对神经元损伤的保护及其作用机制。取出生后8 d幼鼠的小脑,进行小脑颗粒神经元培养。将IL-6(5或10 ng/mL)加入到小脑颗粒神经元的培养液中孵育8 d,然后用NMDA(100μmol／L)刺激小脑颗粒神经元30 min以造成神经元损伤。用噻唑兰(methyl-thiazole tetrazolium,MTT)比色法检测神经元的活性;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测神经元的凋亡;用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察神经元内游离Ca2+浓度的动态变化。用抗gp130单克隆抗体(75 ng／mL)抑制IL-6的活性,然后观察IL-6抗NMDA神经毒性作用的变化;并利用Western blot法检测IL-6对小脑颗粒神经元表达IL-6的细胞内信号转导蛋白——信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase 1／2,ERK1／2)磷酸化水平的影响。NMDA刺激未经IL-6处理的小脑颗粒神经元,导致神经元活性降低、神经元凋亡增加和神经元内Ca2+超载。NMDA刺激经IL-6慢性预处理的小脑颗粒神经元,其损伤程度与未经IL-6处理的神经元相比明显减轻,包括神经元活性明显增强、神经元凋亡显著减少和神经元内Ca2+超载减轻。抗gp130抗体可阻断IL-6减轻NMDA激发的神经元内Ca2+超载的作用;经IL-6慢性处理的小脑颗粒神经元,其细胞内STAT3和ERK1／2的磷酸化水平显著增加。结果表明,IL-6能保护神经元抵抗由NMDA诱导的兴奋性神经毒性,此神经保护机制与IL-6减轻神经元内Ca2+超载密切相关,而且可能通过激活神经元内IL-6的信号转导路径调节细胞内的基因表达而实现。

肾虚型不孕症与gp130家族成员的相关性研究

目的探讨肾虚不孕症gp130家族成员的分泌峰值阶段其血清含量的变化,分析不孕症肾虚型与子宫内膜容受性的相关性。方法选择不明原因性不孕症患者90例,分为肾阴虚、肾阳虚和非肾虚组,对照组30例,分别于排卵后的第4、6和8天,用酶联免疫吸附法(ELISA)方法检测血清白血病抑制因子(LIF)、白介素-6(IL-6)和白细胞介素-11(IL-11)的水平,用化学发光法检测排卵后第8天血清雌二醇(E2)和孕激素(PRG)水平。结果肾虚不孕患者排卵后第4天血清LIF水平明显低于对照组;排卵后第8天肾不孕症组血清PRG水平明显低于对照组,而血清E2水平明显高于对照组,以肾阳虚组最高;不孕患者血清LIF与PRG水平呈正相关(r=0.3);LIF、E2和年龄与肾虚不孕症存在相关性,LIF为肾虚不孕症的保护因素(ORLIF=0.015),E2和年龄为肾虚不孕症的促进因素(ORE2=1.009和OR年龄=1.261)。结论分泌峰值日血清LIF水平下降和E2水平上升,为肾虚不孕症的微观指标变化之一,患者的年龄是促进肾虚不孕症发生的重要因素。子宫内膜容受性下降为肾虚不孕症的发病机制之一。

rhIL-11对中子辐射IEC-6细胞IL-11Rα和gp130表达的影响

目的探讨rhIL-11对中子照射后IEC-6细胞IL-11Rα和gp130表达的影响。方法培养的IEC-6细胞经4·0Gy中子照射并于照前12h与照后即刻给予100ng/ml的rhIL-11,采用流式细胞术、免疫组化、Westernblot及图像分析等技术检测IEC-6细胞的凋亡和坏死率、IL-11Rα和gp130的表达。结果中子照射后6h,IEC-6细胞凋亡率增加(P<0·01),应用rhIL-11可以降低细胞凋亡率(P<0·05)。IL-11Rα于正常IEC-6细胞膜和浆呈强阳性,中子照射后6h,IL-11Rα表达明显减少(P<0·01),24h恢复至正常水平(P<0·01),应用rhIL-11后IL-11Rα表达高于单纯照射组(P<0·05)。gp130于正常IEC-6细胞浆呈强阳性,中子照射后48h内呈进行性减少(P<0·05),应用rhIL-11后gp130表达于照射后24h恢复正常,48h降低但高于单纯照射组(P<0·05)。结论IL-11对IEC-6细胞中子辐射损伤起保护作用,其机制可能是通过上调其特异性结合受体亚基IL-11Rα和信号转导亚基gp130发挥作用。