豌豆中可与Gro EL抗体发生免疫学反应的热激诱导蛋白

通过Ｗｅｓｔｅｒｎ印渍方法，发现在豌豆（ＰｉｓｕｍｓａｔｉｖｕｍＬ．）叶存在一种高分子量的蛋白可与ＧｒｏＥＬ抗体发生免疫学反应，它含有两种亚基，分子量分别为６０．４ｋＤ（α）和６５．５ｋＤ（β），具有弱的ＡＴＰａｓｅ活性。热激处理后此蛋白的表达升高３～４倍，但外源ＡＢＡ处理并不增加它的表达。用３５Ｓ标记蛋白和氯霉素抑制实验表明，此蛋白可能是在８０Ｓ核糖体上合成的胞质蛋白。

大豆蚜内共生菌groEL克隆及表达水平分析

为了解大豆蚜(Aphis glycines Matsumura)传播的大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)与其体内共生菌产生的病毒结合蛋白(Gro EL)之间的作用机制,运用RT-PCR技术克隆得到大豆蚜内共生菌groEL基因全序列,把该基因与pET21b载体重组后进行原核表达,经Ni-Agarose His亲和层析得到纯化的蛋白,并利用荧光定量PCR技术分析了饲毒不同时间、不同龄期大豆蚜内共生菌gro EL基因表达量的变化。序列分析表明:大豆蚜内共生菌groEL基因全长序列为1 647 bp,编码548个氨基酸,推测蛋白分子量和pI值分别为69 k Da和5.24,成功构建重组载体pET21bGro EL进行原核表达,Western-blot鉴定确定为目的蛋白,蛋白可溶性分析发现重组蛋白为包涵体。随饲食SMV时间的延长大豆蚜内共生菌groEL的表达量显著增加,且无翅成虫与有翅成虫内共生菌groEL的表达量显著高于其它4个若虫期。大豆蚜内共生菌groEL基因能在原核细胞中稳定、正确表达,并且大豆蚜在饲食SMV后会诱导其内共生菌gro EL的表达,从而增加SMV爆发流行的可能性。

简单节杆菌groEL基因表达对大肠杆菌抗逆性能的影响

以简单节杆菌(Arthrobacter simplex)TCCC 11037基因组为模板,通过PCR方法进行gro EL基因克隆,结果表明,该菌株中Gro EL的核苷酸和氨基酸序列与Nocardioides sp.JS614来源的Gro EL同源性最高,分别为89%和95%。通过p ET-22b(+)将其在大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达,结果表明,重组菌株在甲醇、高渗和强酸这3种压力高浓度冲击条件下的存活能力和适当压力条件下的生长性能均明显提高。

2种恙虫病东方体核酸检测方法的比较

目的探讨巢式PCR法与实时荧光PCR法在恙虫病诊断中的作用。方法采集2010年-2014年北京市404例恙虫病疑似患者的全血样本,分别以巢式PCR法与实时荧光PCR法检测恙虫病东方体的gro EL基因与47 k D蛋白基因,以血清特异性Ig M检测结果为诊断恙虫病的金标准,研究2种PCR方法的灵敏度。结果以急性期血清Ig M阳性或恢复期血清Ig M转阳作为确诊标准,374例患者确诊为恙虫病。其中巢式PCR法检测gro EL基因阳性者323例,灵敏度为86.36%;实时荧光PCR法检测47 k D蛋白基因阳性者328例,灵敏度为87.70%。而单份急性期血清Ig M抗体检测的灵敏度为87.17%。结论实时荧光PCR法的检测时间短,适合用于快速诊断,但对于检测阴性的样本应考虑进行血清Ig M或多个基因的分子生物学检测以明确诊断。