利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性

目的:利用胚胎干细胞试验模型评价矮壮素的发育毒性。方法:以DMSO为阴性对照,使用不同剂量(7.8125、15.625、31.25、62.5、125、250、500、1 000μg/m L)的矮壮素染毒小鼠胚胎干细胞D3(ES-D3)和3T3成纤维细胞,观察矮壮素对ES-D3细胞向心肌细胞分化的影响,以及对ES-D3和3T3细胞的细胞毒性,在此基础上,根据发育毒性判别公式对矮壮素致畸性进行判定。提取ES-D3分化抑制试验中的拟胚体总RNA,进行real-time PCR,在基因水平检测矮壮素对ES-D3向各胚层分化的影响。结果:1 000μg/m L矮壮素染毒可明显促进体外培养ES-D3、3T3细胞增殖;250μg/m L的矮壮素作用下,观察到具有心肌细胞收缩的拟胚体数仅占接种拟胚体总数的69.4%;1 000μg/m L矮壮素能够影响ES-D3向心肌细胞分化的基因标志物(Nkx2.5,α-MHC)的表达。结论:无法利用判别公式对矮壮素进行发育毒性评价;矮壮素在不引起3T3、ES-D3细胞毒性的水平下,影响ES-D3向心肌细胞的分化,有产生胚胎毒性的可能。

应用胚胎干细胞试验模型对碱性成纤维细胞生长因子发育毒性的初步评价

目的利用小鼠胚胎干细胞试验(EST)模型,初步评价bFGF的发育毒性。方法体外培养小鼠胚胎干细胞(ESC),通过形态学观察、碱性磷酸酶染色和RT-PCR方法进行ESC未分化鉴定;MTT法检测不同浓度bFGF对ESC和3T3细胞的毒性,RT-PCR半定量分析法检测bFGF对未分化基因Sox-2表达的影响。结果 bFGF对ESC和3T3的半数抑制浓度和ESC的半数抑制分化浓度分别为IC50ESC=15.2 mg.L-1,IC50 3T3=24.2 mg.L-1,ID50 ESC=1.7 mg.L-1。结论 bFGF发育毒性的判定为弱胚胎毒性。

小鼠下颌下腺发育中转化生长因子β受体的表达

背景:小鼠的下颌下腺是研究唾液腺的发育的良好模型,转化生长因子β是器官发育和疾病中重要的生长因子,但是在下颌下腺中转化生长因子β受体的表达以及作用机制至今并不明确。目的:观察胚胎小鼠下颌下腺发育过程中转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体以及p-ERK1/2的表达,揭示转化生长因子β在小鼠涎腺发育中的作用。方法:取C57BL/6J小鼠胚胎期第14.5天的标本,使用转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体以及p-ERK1/2抗体,对小鼠的下颌下腺进行免疫组化染色。取新生小鼠标本,大体观察下颌下腺,并且使用苏木精-伊红染色观察其形态。结果与结论:①小鼠出生时,下颌下腺位于下颌骨下方;苏木精-伊红染色发现小鼠下颌下腺的腺泡、导管和闰管细胞也已经分化完成。②在胚胎期第14.5天,转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体在腺泡上皮和导管上皮内高表达,而腺体上皮细胞外的间充质没有表达。③p-ERK1/2主要也是表达在下颌下腺的上皮细胞中,与转化生长因子βⅠ型受体和Ⅱ型受体在下颌下腺中的表达基本一致。说明在小鼠下颌下腺的发育过程中,转化生长因子β蛋白可能通过与上皮细胞表面的受体结合,激活ERK信号通路来调节涎腺腺泡和导管的发育。