Studies on DNA Vaccine of the Conservative Region of Gene Encoding the Male-Specific Gynecophoral Canal Protein of Schistosoma japonicum (Chinese strain)

In order to observe the protective effect induced by vaccinating animals with the DNA vaccine of Sex-specific expression gene of Schistosoma, A 868 bp cDNA fragment amplified by RT-PCR from adult Schistosoma japonicum (Chinese strain) mRNA was cloned into the eukaryotic expression vector pcDNA3 and the recombinant eukaryotic expression vector pcDNA3-SjGCP1 was directly injected into BALB/c mice intramuscularly 3 times with the interval of 3 weeks .Both the vaccinated and control group of mice were challenged with 40 cercariae of Sj 5 weeks after last injection and perfused 7 weeks post-challenge. The worm and egg reduction rate got from vaccinated mice was 32.4% and 46.9% respectively. The result indicated that pcDNA3-SjGCP1 DNA vaccine induces the significant protection in animal against Schistosoma japonicum infection.

日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区cDNA核酸疫苗的研究

目的 为研究血吸虫性别特异性表达基因的核酸免疫特性。方法 本研究将所克隆的编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因保守区cDNA片段克隆到真核表达载体 pcDNA3中 ,得到的重组质粒直接免疫昆明系小鼠 ,感染血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数。结果 其减虫率为 32 4 % ,肝脏减卵率为 4 6 9% ,与对照组比较差异显著。

编码日本血吸虫抱雌沟蛋白及肌动蛋白的基因性别间的表达差异性

研究了所克隆的日本血吸虫两个基因的性别间的表达差异性。分别将所克隆到的编码日本血吸虫抱雌沟蛋白的cDNA (SjGCP1)和肌动蛋白的cDNA (SjAct)制成DNA探针 ,利用Southernblotting ,Northernblotting和斑点印迹法对其相应基因性别间的表达差异性进行了研究。结果显示 ,日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因在雄虫中转录而雌虫中不转录 ,血吸虫肌动蛋白基因在雄虫中转录量高于雌虫 ,表现出转录量的差异。证明这两个基因转录具有性别间的表达差异性。

日本血吸虫抱雌沟蛋白基因表达的性别与时相差异性研究

用Southernblotting ,Northernblotting技术对所克隆的日本血吸虫抱雌沟蛋白编码基因SjGcp进行了性别和时期差异表达研究。结果显示日本血吸虫抱雌沟蛋白基因为雄虫特异性表达基因 ,在感染后第

日本血吸虫编码抱雌沟蛋白保守区cDNA片段的克隆表达及其免疫保护功能

本研究根据曼氏血吸虫抱雌沟蛋白 (Gynecophoralcanalprotein)基因SmGCP保安区片段设计一对引物 ,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板 ,用TR_PCR法扩增出一大小为 86 8bp的基因片段。测序后分析序列推断该片段与SmGCP相应片段碱基同源性 86 .6 % ,说明所克隆的基因为编码日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白基因 ,推断的氨基酸序列同源性为84.1%。将其克隆到表达载体pET2 8(a)中 ,在大肠杆菌BL2 1中获得了较高量的融合表达 ,表达产物分子量约 2 9kD。利用日本血吸虫成虫粗抗原免疫大白兔所得抗血清对该表达产物进行Westernblot检测 ,在预测位置出现了明显的识别条带 ,显示了该表达产物良好的抗原性。将该表达产物用佐剂处理免疫昆明系小鼠 ,攻击血吸虫尾蚴 ,7周后剖杀小鼠冲虫 ,进行成虫和虫卵计数 ,其减虫率为 35 .2 % ,减卵率为 37.8% ,与对照组比较差异显著 ,初步证明血吸虫抱雌沟蛋白具有一定的免疫保护功能。

酵母双杂交诱饵蛋白日本血吸虫抱雌沟蛋白重组质粒的构建及鉴定

为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein ofSchistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒。根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒。随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况。结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长。可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质。

噬菌体展示技术筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白分子受体

目的筛选日本血吸虫抱雌沟蛋白相互作用分子。方法利用噬菌体展示技术,以融合表达的抱雌沟蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法筛选日本血吸虫44d成虫噬菌体展示cDNA文库。结果得到70条有效表达序列标签,对其进行聚类分析、同源性搜索与功能预测等生物信息学分析,获得5个与血吸虫抱雌沟蛋白有相互作用的蛋白或多肽。结论采用筛选噬菌体展示文库的方法成功获得抱雌沟蛋白相互作用分子。

日本血吸虫抱雌沟蛋白DNA疫苗的研究

为构建含日本血吸虫抱雌沟蛋白(SjGCP)完整ORF的核酸疫苗,评估该核酸疫苗在小鼠体内诱导抗血吸虫感染的免疫保护效果及其保护机制,将编码日本血吸虫大陆株抱雌沟蛋白基因ORF片段克隆到真核表达载体pVAX1中,用重组质粒pVAX1-SjGCP三次肌肉注射BALB/c小鼠,攻击感染血吸虫尾蚴,攻击感染后第42天剖杀小鼠冲虫,计算减虫率及肝和粪便的减卵率,评估其免疫保护效果。用流式细胞术(FCM)检测第3次免疫后小鼠淋巴细胞亚群CD4+、CD8+占总淋巴细胞的百分比及细胞因子IL-4、IFN-γ表达水平,探讨核酸疫苗的免疫机制。结果显示,小鼠经pVAX1-SjGCP质粒免疫后诱导了31.9%的减虫率,以及47.85%、68.04%的肝减卵率和粪便减卵率,与PBS组差异显著;pVAX1-SjGCP免疫组淋巴细胞亚群CD4+、CD8+百分比增加,细胞因子IFN-γ及特异性IgG水平提高,与pVAX1组差异显著。结果表明,血吸虫抱雌沟蛋白基因DNA疫苗能够诱导宿主细胞免疫和体液免疫应答,产生Th1/Th2型混合的细胞免疫反应,具有一定的抗血吸虫感染的免疫保护效果。