MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列多态性分析

目的:分析MNS血型相关基因GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列的特征,了解MNS血型基因的多态性。方法:随机选取无偿献血者500人份离体24 h内的抗凝血各8 ml,以血型血清学方法鉴定MN、Ss、Mia血型。从500例样本中随机选取MNS与Mia血型不同组合的5例样本,使用密度梯度离心法分离外周血中的单个核细胞(PBMC)并提取总mRNA,使用逆转录试剂盒制备cDNA,采用巢式PCR(nested PCR)方法扩增目标片段,切胶回收后分别对GYPA、GYPB、GYPE mRNA全长序列进行测序,通过Oligo 6.0软件分析碱基序列。结果:血清学检测得到MN、Ss和Mia表现型,不同个体间的红细胞与抗-Mia血清反应存在凝集强度差异。检测了5例不同表现型组合样本的GYPA、GYPB、GYPE基因mRNA全长序列,1例样本的GYPA mRNA中exon-6完整缺失,其他4例样本的GYPA mRNA全长完整;2例样本的GYPB mRNA中exon-2完整缺失,Mia血型阴性;2例样本的GYPB mRNA全长完整,Mia血型阳性;1例样本的GYPB mRNA中exon-5存在碱基替换;5例样本的GYPE mRNA全长完整。结论:MNS血型相关基因具有明显的多态性,mRNA全长序列的检测为GYPA、GYPB、GYPE基因结构的分析与MNS血型抗原表达的深入研究奠定了基础。

MN血型GYPA基因测序方法的建立及应用于汉族人群检测

目的建立适合检测中国汉族人群MN血型GYPA基因的测序技术,用于中国汉族人群MN血型基因的分子遗传背景及遗传多态性的研究。方法根据GenBank的NG-007470基因参照序列,自行设计GYPA基因第1—7外显子共7对引物,以随机选取的55份中国汉族人群标本的DNA为检材,探索最佳反应体系与PCR扩增条件,同时扩增GYPA的第1—7外显子,含括了GYPA基因的全长外显子序列。使用PrismTM ABI3730XL DNA测序仪进行碱基序列分析,以Oligo分析软件分析碱基序列。检测结果的可靠性通过血型血清学、PCR-SSP基因分型方法进行验证。结果应用该方法可以在同一扩增条件下同时扩增GYPA基因的全部外显子,同步检测到GYPA基因共7个外显子的碱基序列,55份标本的基因测序结果与血清学、PCR-SSP基因分型结果完全一致。结论本研究的GYPA基因测序方法准确、可靠,适用于中国汉族人群的GYPA基因测序。

中国汉族人群MN血型相关基因gypa分子多态性的研究

本研究探讨中国汉族人群MN血型相关基因gypa的多态性。随机选取中国汉族人群中无血缘关系的无偿献血者202人份,以血清学方法鉴定样本的MN血型表现型。根据GenBank的NG-007470基因参照序列设计gypa第2外显子引物,对202人份的DNA进行PCR扩增,同时对扩增产物进行直接测序。结果表明:所有样本的gypa第2外显子第1、56位碱基均发生了变异,其中MN表现型杂合子主要以1A>C、22T/C、34A/G、35T/G、56T>C的形式存在;MM表现型纯合子主要以1A>C、22C、34G、35T、56T>C的形式存在;NN表现型纯合子主要以1A>C、22T、34A、35G、56T>C的形式存在。结论:中国汉族人群MN血型相关基因的多态性主要由gypa第2外显子的第1、22、34、35、56共5个位点的多态性所决定,其中第1、56位为非功能性SNP位点。

人类红细胞MN血型中抗-M与GYPA基因表达的相关性

目的研究人类红细胞MN血型系统中抗-M的产生与相关基因GYPA表达的相关性,同时揭示M抗原的表达与抗-M产生之间的关系。方法选择无偿献血者和临床中发现的血浆中含有IgG、IgM或两者共存的16例抗-M血液样本,以血清学及分子生物学方法对样本进行MN血型检测,应用自行设计的一对特异性引物检测MN血型相关基因GYPA第二外显子的碱基序列。结果 16例样本中12例表现型为NN型,2例为MN型,2例为MM型。基因测序结果与GenBank参比序列比对,未发现突变碱基,血型表现型的基因定型与血清学定型相一致,经过谱细胞鉴定,该16例患者的血浆中全部携带抗-M抗体。结论人类红细胞MNS血型中抗-M的产生与M抗原是否存在没有必然关联,与相关基因GYPA的表达也无明显关联。

中国人群MN血型中M、N等位基因多态性的研究

目的：检测血型糖蛋白GPA相关基因GYPA中全部外显子与部分内含子碱基序列,探讨中国人群MN血型中M、N等位基因的多态性.方法：随机选取国籍为中国人的无偿献血者225人份的血液样本,以血型血清学方法鉴定M、N血型表现型;自行设计引物,直接测序相关样本GYPA基因的exon-1～7全长碱基序列以及intron-1～7中部分碱基序列,根据序列中碱基的变异分析M、N基因的多态性.结果：M、N血型的基因定型与血清学检测结果一致;根据intron-1中-9位,exon-2中1、22、34、35、56位,intron-2中23位,intron-3中55位,intron-4中63位,intron-5中1373、1374、1375位,intron-6中55、189、190位和exon-7中712位等的变异,可以把M、N基因细分为M101、M102、M103、M201、M202、N101、N102、N103、N104、N201;同时,本研究发现在GYPA基因的intron-2中42、54位突变与59、60位间插入碱基T的变异;intron-3中-28、-29、-65、-102位等基因位点存在新的变异.结论：MN血型中M、N基因具有多态性,中国人群GPA相关基因GYPA的各外显子、部分内含子的结构特点揭示了中国人群的M、N血型基因的多态性,为临床输血、人类群体遗传学及分子生物学的研究提供相关的基础.

HLA-DQα和PM位点扩增分型技术在法医物证学上的应用

目的：对HLA－DQα和PM位点进行多态性研究并应用于实际检案。方法：用PCR结合反相杂交技术进行扩增并分型。结果：获得HLA－DQα和PM位点的基因频率分布数据。结论：上述位点具有高度多态性，累积个体鉴别能力（DP值）达99．95％，是法医学亲权鉴定和个体识别领域非常有价值的遗传标记系统。

广西贵港地区人群MN血型等位基因多态性的调查研究

目的探讨广西贵港地区人群MN血型等位基因的分布特点。方法收集2018年9月~2019年6月期间广西贵港地区随机人群300人份血样,采用血型血清学方法鉴定其MN表现型,同时提取血样中的DNA,对MN血型相关基因GYPA的exon-2序列扩增后测序,分析广西贵港地区人群MN等位基因的多态性并与中国西安、新疆、贵州、广东等地区随机人群的MN血型基因频率作比较。结果广西贵港地区人群的MN血型血清学定型与基因测序结果完全一致,300例MN血型血清学鉴定中,MM表型为140例,MN表型为121例,NN表型为39例;M基因频率为0.668,N基因频率为0.332。通过数据比较分析可知广西贵港地区人群基因各型的构成比与国内其他地区人群不同,MN血型抗原在不同个体中存在明显的剂量效应。结论广西贵港地区人群MN血型基因具有独特的多态性,了解这种多态性有助于广西贵港地区临床的安全输血,预防新生儿溶血性疾病,为广西贵港地区人类群体遗传学特征及分子生物学的研究奠定基础。

GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列直接测序方法的建立及应用评价

目的建立人类GPA，GPB分子相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列的DNA直接测序方法，并将此方法应用于RBC血型MNS抗原的分析。方法以整群随机抽样法选择从2011年11月至2012年5月在本中心无偿献血的175例健康成年人的全血样品为研究对象。以血清学方法与序列特异引物聚合酶链反应（PCR—SSP）方法鉴定其MNS血型。根据GenBank提供的NG-007470与NG-007483基因参照序列为依据，自行设计GPA相关基因GYPA全部外显子的7对引物与GPB相关基因GYPB全部外显子的5对引物，探索最佳反应体系与PCR扩增条件，且能同时扩增2个基因全长外显子碱基序列，使用ABl3730XLDNA测序仪进行序列分析，以Oli6installer分析软件分析碱基序列。结果所建立的测序方法可于同一反应体系、相同PCR扩增条件同时检测GPA，GPB相关基因GYPA，GYPB外显子全长序列，并准确分析本组血液样本的MNS血型的特征。基因测序结果与血清学分析及PCR—SSP鉴定结果完全一致。结论首次建立了稳定、精确、简捷的基因直接测序分型方法，可用于检测MNS血型基因型，并分析GPA，GPB肽链中氨基酸序列的多态性，为MNS血型系统的研究以及人类群体遗传学及分子进化的研究等方面提供广泛的应用价值。

MN血型四种方法检测比较分析

目的比较MN血型四种方法检测方法的差异,为MN血型检测的准确性研究提供参考。方法分别用血型血清学、免疫印迹法、PCR-SSP法、直接测序法检测MN血型。血型血清学以免疫学为基础,按抗原抗体反应原理测定;免疫印迹法是把SDS电泳分离的红细胞膜蛋白从凝胶转移到PVDF膜上,并检测目标蛋白。PCR-SSP法针对红细胞MN血型系统基因不同碱基的变异设计特异性引物进行测定;直接测序法可测出MN血型的相关外显子基因序列,并与正常人相应的测序进行比对。结果血清学方法检测MN血型200例,其中MM 57例(28.5%),MN 87例(43.5%),NN 56例(28%);基因频率:m为50.25%,n为49.75%。Ss血型系统中,表现型为ss 198例、Ss 2例,未检到SS血型。免疫印迹法结果表明不同血型的红细胞之间膜蛋白图谱基本相似,但存在一些差异点,提示不同血型的红细胞之间可能存在膜蛋白的差异。PCR-SSP法和测序法解决了血清学方法抗体特异性、大量输血患者或自身溶血性贫血患者等问题。4种方法测得的血型结果一致,符合率100%。其中直接测序法可获得核苷酸的变异,使得该方法在研究血型遗传机制中发挥着重要的作用。结论 4种方法检测结果之间不存在差异,但均有一定的局限性和优势,可实现相互验证,确保MN血型检测的准确性。