hBAFF-R-Fc融合分子的构建、表达与鉴定

目的构建人hBAFF-R-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的人hBAFF-R-Fc融合蛋白。方法化学合成法合成人hBAFF-R膜外区cDNA编码基因,酶切测序证实后,与hIgG4.Fc/Leu235Glu突变体一起导入线性化pSec/WG真核表达载体,阳性重组体酶切测序证实后,采用脂质体法稳定转染CHO细胞,用夹心ELISA检测其表达;收集的蛋白经蛋白A亲和纯化,以SDS-PAGE与Western blot进行鉴定并检测hBAFF-R-Fc的活性。结果测序证实构建的hBAFF-R膜外区与hBAFF-R-Fc cDNA阅读框完整,ELISA证实转染hBAFF-R-Fc基因的CHO细胞培养上清中含有hBAFF-R-Fc蛋白,SDS-PAGE与Western blot鉴定证实其为hBAFF-R-Fc蛋白。hBAFF-R-Fc蛋白对活化后的B细胞有抑制增殖的作用。结论成功构建了人hBAFF-R-Fc真核表达载体,并使有生物学活性的hBAFF-R-Fc蛋白在CHO细胞上获得了稳定表达。为进一步研究该蛋白在狼疮性肾炎等自身免疫性疾病治疗中的作用奠定了基础。