hCLP46基因在不同侵袭转移潜能乳腺癌细胞表达中的差异及其意义

目的探讨hCLP46基因在MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞中表达的差异性及其意义。方法采用RT-PCR的方法检测2个细胞系（乳腺癌低度侵袭转移细胞系MCF-7、中度侵袭转移细胞系MDA-MB-231）中hCLP46mRNA的表达差异。取MCF-7和MDA-MB-231细胞株进行培养，分别加入100μmol／L的转化生长因子-B（TGF-β）并设对照组，培养72h，用Western-blot方法分析P15蛋白表达。结果RT-PCR检测hCLP46结果显示，在MCF-7和MDA-MB-231细胞系中，内参基因GAPDH的表达量相近，hCLP46基因在两个细胞系中均表达，其中MDA-MB-231细胞系中的表达高于MCF-7细胞系。两个细胞系分别加入TGF-β培养72h后，与相应的对照细胞系相比，P15的表达均有降低，hCLP46基因高表达的MDA-MB-231细胞中P15表达较MCF-7细胞显著降低。结论hCLP46基因过表达可能抑制TGF-β对MDA-MB-231和MCF-7乳腺癌细胞P15基因的上调，hCLP46可能在乳腺癌的发病中起到-定作用。

人CD_(34)^+干/祖细胞异常表达基因hCLP46功能初步探讨

hCLP46是从MDS-AML的CD3+4细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因,为了进一步对该基因进行功能、性质研究,利用RT-PCR技术证明该基因在人脑组织中有表达,而在人胚胎肝组织中无表达.将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染U937细胞,发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-β对P15基因的上调.利用生物信息学手段对该基因进行序列分析,得到其启动子区存在一个典型的"CpGisland".提示该基因有可能参与甲基化调节途径,为进一步研究该基因的作用机制打下基础.

串联亲和纯化技术筛选hCLP46的相互作用蛋白

hCLP46(human CAP10-like protein46)是从MDS-AML患者的CD34+干细胞cDNA文库中筛选出的基因.我们利用串联亲和纯化技术来筛选与hCLP46有相互作用的蛋白.通过体内交联-甘氨酸洗脱策略,检测到7条有差异的蛋白带,经液相色谱-质谱联用鉴定,得到了CNX和PDI等一系列内质网伴侣蛋白.所以hCLP46可能是一个糖蛋白,其成熟过程利用了BiP/Grp94和CNX/CRT 2套伴侣蛋白系统.

hCLP46基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨hCLP46基因在乳腺癌中mRNA表达情况及其临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR方法检测48对乳腺癌组织和癌旁正常组织中hCLP46基因的mRNA表达情况.结果 乳腺癌组织中hCLP46基因表达量高于癌旁正常组织（t=2.368,P＜0.05）;癌组织中hCLP46基因表达水平仅与腋淋巴结转移有显著统计学意义（P＜0.05）.结论 hCLP46基因在乳腺癌中表达量增高,且与淋巴结转移相关,可能有助于乳腺癌的靶向治疗.

酵母双杂交技术筛选hCLP46的相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交技术,筛选人白细胞cDNA文库中能与人类CD34+干/祖细胞异常表达蛋白hCLP46(human CAP10-like protein46)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,研究hCLP46基因在骨髓增生异常综合症MDS-AML的作用机制,为MDS-AML的临床治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-hCLP46为诱饵质粒筛选人白细胞cDNA文库,得到阳性克隆,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果:经过两次筛选、验证,从人白细胞cDNA文库中得到5个阳性克隆,对验证后的阳性克隆的外源片段进行测序及同源性分析,最终得到4个不同的候选基因序列。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到4个不同的基因,其编码蛋白与hCLP46有相互作用,可能与MDS-AML发病机制相关。

通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用

采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值.