重组人Delta-like 1蛋白表达及其对脐带血CD34+细胞扩增作用

目的构建pET32a(+)-hDll1DSL原核表达载体,表达、纯化hDll1DSL蛋白,观察其对脐带血CD34+细胞的体外扩增作用。方法克隆hDll1DSL,构建pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。重组信号结合蛋白(RBP-J)报告基因实验及Notch下游分子Hes1检测证实hDll1DSL活性。磁珠分选脐带血CD34+细胞,加入hDll1DSL或联合干细胞因子(SCF)、Flt3配体(FL)、血小板生成表(TPO)孵育1周,观察体外扩增作用。结果成功克隆hDll1DSL,并构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hDll1DSL融合蛋白,经镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hDll1DSL融合蛋白。配体活性实验显示,可溶性的Trx-hDll1DSL蛋白可以激活RBP-J报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路。此外,Trx-hDll1DSL融合蛋白与SCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用。结论成功构建了pET32a(+)-hDll1DSL重组表达载体,表达、纯化了具有生物学活性的Trx-hDll1DSL融合蛋白,具有协同刺激CD34+细胞体外扩增的作用,为造血干/祖细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础。