人源新基因hGlyrichin的克隆及其功能的初步研究

目的:克隆获得与mL52新基因(GenBank:AY028425)同源人类新基因hGlyrichin,并研究其功能。方法:采用PCR法从人胎肝cDNA文库中扩增出该新基因,因富含甘氨酸而命名为hGlyrichin,以RT-PCR和Northern杂交分析在多种细胞株中的表达及转录本大小,并对该基因进行生物信息学分析,利用pET22b表达载体构建重组质粒pET22bh-Glyrichin,转化大肠杆菌BL-21(DE3)中进行IPTG诱导表达。结果与结论:电子PCR证实该基因定位于人染色体20q11.22,包含3个外显子和2个内含子。Northern杂交结果显示为单一转录本,大小约600 bp,与mL52全长cDNA长度相符。所编码的蛋白为含有疏水区的小分子阳离子蛋白,相对分子质量和等电点分别为8182.83和9.58,二级结构(Garn ier-Robson模型)预测是以β折叠型为主,这些特点与目前已知的大多数阳离子抗菌肽的结构及部分理化特性极为类似,该基因转化后的大肠杆菌在IPTG诱导表达时的生长受到明显抑制,初步证实了hGlyrichin具有明显的抗菌活性。

人源性抗菌肽的结构特点及研究进展

抗菌肽作为固有免疫系统的重要组成部分,在宿主防御反应中起了重要作用,体内及体外实验均显示出广谱的抗微生物活性并且不易产生抗药性,具有发展成为新型抗感染、抗病毒、抗肿瘤药物的潜力,其结构特点与作用机制及活性密切。相关人源性抗菌肽由于其物种特点,不易产生人细胞毒性及排异反应,更具备优先发展成为新型抗菌药物的潜力。本文对功能已获证实的几种人源性抗菌肽:defensins、cathelicidins和histatins以及国内学者近年来逐渐发掘的新型人源性抗菌肽hGlyrichin进行了综述。

新型抗菌药物——人源性抗菌肽

抗生素的滥用以及院内感染日益严重的现实迫切需要新型抗菌药物的出现,阳离子抗菌肽作为固有免疫系统的重要组成部分,在宿主防御反应中发挥着重要作用,体内及体外实验均显示出广谱的抗微生物活性并且不易产生抗药性,具有发展成为新型抗感染药物的潜力。人源性抗菌肽由于其物种特点,不易产生人细胞毒性及排异反应,更有可能率先发展成为新型抗菌药物。本文对功能已获证实的几个人源性抗菌肽家族:defensins、cathelicidins、histatins以及国内学者近年来发掘验证的新型人源性抗菌肽hGlyrichin家族进行了综述。

人格拉利素新抗菌肽的抗菌作用研究

目的:进一步证实人格拉利素(hGlyrichin)抗菌肽的抗菌功能。方法:根据人格拉利素的氨基酸序列,设计并合成了19个氨基酸长度的多肽(pCM-19),采用试管法和菌落生成法分析该肽对靶细菌生长的影响。结果与结论:pCM-19溶液与不同靶细菌共孵育后,明显抑制了细菌的生长,对实验室常用的BL-21工程菌和多种致病菌(包括杆菌、球菌)的生长都有抑制作用。更为有趣的是对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长有明显抑制作用,显示了其在抗耐药菌感染中的良好前景。

人格拉利素来源肽段的构效关系研究

目的:研究人格拉利素功能肽段一级结构与活性的关系。方法:依据确定的生物学活性,在人格拉利素功能肽段CM19的基础上,利用抗菌肽的特点及已知的抗菌肽构效关系研究结果对CM19进行氨基酸取代、缺失及随机排列设计合成5条肽段,通过试管法和平板法检测相应肽段的抗菌活性。结果:CM19氨基端第一个半胱氨酸在发挥抗菌作用中是必需的;阳性电荷数的增加或者分布不合适不改善抗菌活性;氨基酸的排列顺序明显降低抗菌活性;CM19羧基端7肽无明显的抗菌作用。CM12具有广谱抗菌作用,不但对非耐药菌而且对耐药菌具有同样的作用。结论:氨基酸的取代、缺失及排列对人格拉利素肽段的抗菌功能具有明显的影响。