hHGF基因肾脏电转染对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠肾脏进行hHGF基因转染,观察该基因转染对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:雄性SD大鼠20只,随机分为转染组和对照组,每组10只.在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染方法转入大鼠肾脏,3d后建立大鼠肾热缺血模型,观察hHGF的药代动力学,并对缺血肾脏进行功能和组织学评价.结果:hHGF基因电转染组肾组织及血浆hHGF基因表达水平高于对照组(P<0.01).转染组血肌酐水平低于对照组(P<0.01),肾功能恢复快于对照组.组织学评价显示,转染组肾小管细胞凋亡评分低于对照组(P<0.05).转染组淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒细胞浸润均较对照组少.结论:肾脏hHGF基因电转染组hHGF药代动力学和治疗效果均显示,该基因电转染对肾脏缺血再灌注损伤有保护作用.

hHGF基因肾脏电转染对大鼠慢性移植肾病的影响

目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠移植肾进行hHGF基因转染,观察该基因对防治大鼠慢性移植肾病的作用。方法:雄性SD大鼠20只,随机分为治疗组和对照组,每组10只。利用移植肾离体灌流时机将含有hHGF基因的质粒(治疗组)及空质粒(对照组)用电转染方法转入大鼠肾脏,并行自体肾移植及对侧单肾切除。于移植第8天及12周后观察hHGF基因在肾组织中的表达,并对移植肾进行功能和组织学评价。结果:治疗组肾组织hHGF基因表达于移植后第8天为阳性,对照组及治疗组移植后12周hHGF基因表达阴性,治疗组血浆hHGF水平在电转染后第7天为(76.9±11.7)pg/ml,第12周的hHGF浓度为0,而对照组第7天及第12周均未测到hHGF。治疗组血肌酐、尿素氮水平于移植后12周显著低于对照组。组织学评价显示,于肾移植后12周,治疗组肾间质纤维化程度显著轻于对照组。结论:hHGF基因转染治疗对减轻移植肾的肾功能损伤和肾间质的纤维化具有远期效果,这种远期效果可能与hHGF基因对移植肾早期缺血再灌注损伤的保护作用及抗纤维化作用有关。因此,本组认为hHGF基因转染在肾移植初期的治疗作用对预防慢性移植肾病的发生和发展起了重要的作用。

人类肝脏cDNA文库的构建及hHGF基因的筛选、克隆与表达

目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-hHGF后转化大肠杆菌BL21(DE3α),以异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,收集菌体后提取蛋白样品并对其进行SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹检测。结果成功地构建了人类肝脏的cDNA文库;经筛选得到约2200bp的hHGF基因;对其进行测序确认;成功地构建该基因的表达型质粒,并对表达蛋白进行蛋白免疫印迹检测,检测出其表达产生的蛋白质相对分子量在100000左右。结论人类肝脏cDNA文库成功地构建后可用于筛选获取完整的cDNA基因,从中筛选、克隆hHGF基因,并测序确认,进行表达蛋白质检测,结果正确,以上工作为进一步深入地进行与人类肝脏cDNA文库及hHGF相关的实验研究奠定了一定的基础。

人肝细胞生长因子基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨人肝细胞生长因子(hHGF)基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:♂SD大鼠20只,随机分为2组,即研究组和对照组,每组10只。研究组大鼠接受hHGF肌肉电转染,在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染技术转入大鼠双侧胫前肌肉内,3d后建立大鼠肾热缺血模型,测定hHGF的血药浓度,并对缺血再灌注肾脏进行功能和组织学评价。结果:研究组肾组织及血浆hHGF基因表达水平显著高于对照组。研究组血肌酐水平较对照组低。组织学评价结果显示,研究组肾小管细胞凋亡评分显著低于对照组。研究组淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒细胞浸润均较对照组少。结论:本研究结果表明hHGF基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用,并提示肌肉hHGF基因电转染有可能成为防治移植肾缺血再灌注损伤的安全有效的方法之一。