人热休克因子1对抗增殖蛋白基因启动子转录调控的研究

目的:研究人热休克因子1(hHSF1)对抗增殖蛋白(prohibitin)启动子转录活性的影响。方法:采用PCR方法扩增hHSF1全长编码序列,构建pcDNA3.1(+)-hHSF1真核表达载体,将pcDNA3.1(+)-hHSF1和人prohibitin基因启动子表达载体pGL3-prohibitin共同转染HEK293细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测双荧光素酶活性,分析hHSF1对抗增殖蛋白基因启动子的转录调控作用。结果:成功构建pcDNA3.1(+)-hHSF1真核表达载体,荧光素酶活性测定发现hHSF1明显上调pGL3-prohibitin转录。结论:hHSF1对prohibitin具有转录调控作用。

还原型Western blot方法检测人热休克转录因子1的氧化还原构像

目的 分辨、检测人类热休克转录因子 1 (hHSF1 )的氧化还原构像 ,以了解构像的改变对其功能的影响。方法 建立了一种新型的还原型Westernblot检测法 ,使已形成稳定屏障式抗原核心 ,双硫键交联的氧化型人类热休克转录因子 1 (ox -hHSF1 )还原 ,恢复其免疫检测活性。结果 无论在变性聚丙烯酰胺凝胶电泳或非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的还原型Westernblot中都可检测出一个在常规不能检测出的、移动快速、结构致密、分子内双硫键交联的ox hHSF1构像。ox hHSF1的出现 ,使hHSF1在体外不能被热诱导激活形成三体 ,失去其与DNA结合的功能。结论 还原型Westernblot的建立 。