散发性大肠癌错配修复基因hMLH1的突变及甲基化研究

背景与目的:研究散发性大肠癌hMLH1(humanmutlhomologlgene,hMLH1)基因突变和启动子甲基化的状况。材料与方法: 采用毛细管电泳-单链构象多态性分析(Capillaryelectrophoresis_singlestrandconformationpolymorphism,CE_SSCP)结合基因序列分析的方法,对50例散发性大肠癌标本hMLH1基因第3、8、12、13、15和16号外显子进行突变检测;利用HapⅡ和MspⅠ酶切结合聚合酶链反应(Reversetranscriptase_polymerasechainreaction,RT_PCR)方法对hMLH1基因启动子区进行甲基化检测。结果: ①50例标本有3例hMLH1基因第12号外显子检出突变,突变率为6 %。突变位点均是12号外显子的第1151位碱基发生杂合型突变T→A ,使该碱基所处的第384位密码子发生错义突变(GTT→GAT,Val384Asp) ,其他外显子均未发现突变。②9例标本出现hMLH1基因启动子区甲基化,占18 %。结论:散发性大肠癌hMLH1基因突变可能是偶发事件;hMLH1基因第12号外显子第384位密码子的错义突变可能增加罹患大肠癌的危险性;hMLH1基因启动子甲基化与肿瘤临床病理参数间无明显相关关系。

非小细胞肺癌组织中DNMT1表达和hMLH1、hMSH2甲基化状态的变化及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)癌及癌旁组织中DNMT1表达和hMLH1、hMSH2基因甲基化状态的变化及意义。方法通过实时荧光定量PCR法检测52例肺癌及癌旁组织中DNMT1表达,同时用甲基化特异性PCR(MSP)法检测hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化状态。DNMT1表达与hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平相关性用Spearman相关分析。结果 52例NSCLC患者癌及癌旁组织中DNMT1 mRNA相对表达量分别为3.162 3±0.512 5、2.873 1±0.370 6,P<0.01;癌及癌旁组织中hMLH1基因启动子区甲基化阳性率分别为53.8%(28/52)、32.7%(17/52),差异有统计学意义(χ~2=4.740,P<0.05);癌及癌旁组织中hMSH2基因启动子区甲基化阳性率分别为57.7%(30/52)、34.6%(18/52),差异有统计学意义(χ~2=5.571,P<0.05)。hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理学类型、淋巴结转移、侵犯周围组织等无关(P均>0.05)。DNMT1表达与hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平呈显著正相关(r分别为0.479、0.528,P均<0.05)。结论 NSCLC癌组织中DNMT1呈高表达,DNMT1表达与hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化水平呈正相关性;三者表达与NSCLC患者临床病理特征无关。