目的 :构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (h TRAIL )基因的辐射诱导表达载体p Egr- h TRAIL ,并研究其在人肺腺癌细胞株 A 5 4 9中的表达及促凋亡作用。方法 :采用常规分子生物学方法构建表达质粒 p Egr- h TRAIL ,体外通过脂质...目的 :构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (h TRAIL )基因的辐射诱导表达载体p Egr- h TRAIL ,并研究其在人肺腺癌细胞株 A 5 4 9中的表达及促凋亡作用。方法 :采用常规分子生物学方法构建表达质粒 p Egr- h TRAIL ,体外通过脂质体转染 A5 4 9细胞 ,经 G4 18筛选稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL ,利用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测目的基因的表达 ,采用 Annexin- V- FITC凋亡检测试剂盒检测细胞早期凋亡。结果 :经限制性内切酶酶切鉴定 p Egr- h TRAIL表达质粒构建正确 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的 h TRAILm RNA表达量明显增加 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的凋亡细胞百分数明显增加 ,是 A5 4 9细胞的 1.8倍(P<0 .0 5 )。结论 :成功构建 p Egr- h TRAIL表达质粒 ,体外稳定转染细胞 A5 4 9- sh TRAIL具有明显诱导凋亡作用。展开更多
文摘目的 :构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (h TRAIL )基因的辐射诱导表达载体p Egr- h TRAIL ,并研究其在人肺腺癌细胞株 A 5 4 9中的表达及促凋亡作用。方法 :采用常规分子生物学方法构建表达质粒 p Egr- h TRAIL ,体外通过脂质体转染 A5 4 9细胞 ,经 G4 18筛选稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL ,利用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测目的基因的表达 ,采用 Annexin- V- FITC凋亡检测试剂盒检测细胞早期凋亡。结果 :经限制性内切酶酶切鉴定 p Egr- h TRAIL表达质粒构建正确 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的 h TRAILm RNA表达量明显增加 ;稳定转染细胞 A 5 4 9- sh TRAIL的凋亡细胞百分数明显增加 ,是 A5 4 9细胞的 1.8倍(P<0 .0 5 )。结论 :成功构建 p Egr- h TRAIL表达质粒 ,体外稳定转染细胞 A5 4 9- sh TRAIL具有明显诱导凋亡作用。
