Enterohaemolysin production and verotoxin genes in Escherichia coli strains isolated from neonatal calves in India

Objective:To screened all haemolytic strains of Escherichia coli(E.coli) for the presence of verotoxin genes and speculate the association between enterohaemolysin production and presence of verotoxin genes.Methods: A total 176 of E.coli strains of 64 serogroups isolated from neonatal calves were selected and screened for alpha -haemolysin and enterohaemolysin production on sheep blood agar and 5%washed sheep blood agar.Two types of haemolytic strains were further characterized by PCR for presence of Verotoxin gene(VT1 and VT2) and confirmed by verocell cytotoxicity assay.Results:Among 27 enterohaemolytic positive strains,19(70. 37%) strains were found positive for presence of verotoxins(VTs) gene and verocell cytotoxicity assay. Whereas 34 alpha-haemolysin strains were found negative for VTs.Eight strains of E.coli were found VTs negative but Ehx positive.Conclusion:The close association between enterohaemolysin production and presence of verotoxin genes makes it useful epidemiological marker for rapid screening of Verotoxic E.coli but this phenotypic marker for screening of verotoxigenic Escherichia coli(VTEC) alone may raise a question in animal.

双重PCR检测携带有tl和tdh基因的副溶血弧菌毒力菌株

在常规PCR技术的基础上优化条件 ,建立并完善双重PCR技术 ,并通过检测阳性对照和待检样品 ,进一步确定其检测的可行性。结果表明在常规PCR方法中为阳性的样品 ,包括阳性对照以及待检样品 ,在双重PCR方法中也呈现阳性 ,为阴性的样品在本方法中则也呈现阴性 ;能在血平板中出现溶血圈的在本法中也被印证含有tdh基因。由此证实本方法确实能对tl和tdh两种基因同时进行检测 ,成功地证明了同时检测tl和tdh两种基因的双重PCR方法的可行性。该法不但具有常规PCR的优点 ,而且还能节省耗材和时间 。

虎眼万年青多糖增强非特异性免疫和体液免疫的作用

目的 :研究虎眼万年青多糖对机体非特异性免疫和体液免疫功能的影响。方法 :采用小鼠碳廓清单核巨噬细胞吞噬功能测定法筛选出虎眼万年青多糖中的有效组分 ,即 60 %醇浓度的虎眼万年青中性多糖 (OCAPS3) ;采用溶血素测定方法研究不同剂量 OCAPS3对小鼠抗体形成的影响。结果 :OCAPS3能显著提高巨噬细胞的吞噬功能以及抗体生成的能力。结论 :证明虎眼万年青多糖能有效地增强小鼠的非特异性免疫和体液免疫功能。

小定鞭藻毒素的分离与鉴定

从大量死鱼的鱼池中收集分离出小定鞭藻Ｐｒｙｍｎｅｓｉｕｍｐｏｒｖｕｍ的毒株，并在实验室成功地进行了单种培养，当温度２３℃，光照６００－８００ｌｘ盐度约１２—１６‰左右时，该藻在海水及人工海水培养基中均生长良好，在对数生长末期到平衡期溶血毒素活性最高。从藻细胞及浓缩的培养液中提取出二种毒素：溶血毒素（Ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｔｏｘｉｎｓ）和鱼毒素（Ｉｃｈｔｈｙｏｔｏｘｉｎｓ）。用新鲜牛血球测定了溶血毒素活性；用孔雀鱼测定了鱼毒素活性。用部分纯化的溶血毒素经元素分析、红外光谱、核磁共振及ＦＡＢ质谱测定，结果显示该藻溶血毒素可能是一个糖脂。

螺旋藻藻蓝蛋白对小鼠免疫功能的影响

研究了螺旋藻藻蓝蛋白（Ｃ－ＰＣ）对正常和异常（经氢化可的松处理）的小鼠免疫功能的影响。实验结果表明，腹腔连续注射１５ｄＣ－ＰＣ，剂量为１００和２００ｍｇ／ｋｇ·ｄ－１能促进ＰＨＡ诱导的正常小鼠脾淋巴细胞的增殖，促进空斑形成细胞的溶血能力和血清中溶血素的含量，能显著对抗氢化可的松对机体免疫功能的损伤作用。

鲨肝活性肽对小鼠血清溶血素的生成和血清IL-2含量的影响

鲨肝活性肽是从鲨鱼肝脏中分离纯化的一种活性多肽 ,对正常小鼠血清溶血素的生成无明显影响 ,但在 1.5、0 .75和 0 .37mg kg时 ,却能部分缓解环磷酰胺 (cyclophosphamide ,Cy)对小鼠血清溶血素生成的抑制作用 ;在 0 .75～ 6mg kg剂量时 ,能够上调环磷酰胺所致免疫低下小鼠血清IL 2的含量。在体外未发现鲨肝活性肽促进小鼠脾淋巴细胞分泌IL 2。

猪链球菌2型溶血素基因PCR快速检测方法研究

根据猪链球菌2型的溶血素(haemolysin)的基因序列设计一对引物,成功地扩增了溶血素基因,并建立了检测溶血素的PCR方法.用EcoR 限制性内切酶进行酶切,获得了与预期大小一致的869bp和633bp的两个片段.同时另设计一对内引物,进行巢式PCR,亦能扩增出预期片段.PCR检测的敏感程度可达100个细菌;对马链球菌兽疫亚种、猪丹毒杆菌和猪放线杆菌等的PCR检测结果均呈阴性.表明建立的猪链球菌2型溶血素PCR检测方法,其特异性和敏感性均很高,可作为猪链球菌病快速诊断的方法.

侧柏叶中黄酮类化合物对H_2O_2诱导的人红细胞氧化作用的影响

目的 :观察侧柏叶中黄酮类化合物对H2 O2 诱导的人红细胞氧化作用的影响。方法 :用健康成人静脉血制成1%RBC悬液 ,分为H2 O2 损伤组、损伤加不同浓度的黄酮组、损伤加不同浓度的丹参组 (阳性对照 ) ,孵育后测定RBC溶血度和RBC悬液中丙二醛 (MDA)浓度。结果 :加药组的溶血度及MDA的含量分别下降 ,并与药物浓度相关。结论 :黄酮类化合物具有抑制H2 O2

细菌溶血素的分类及代表性溶血素研究进展

【研究目的】溶血素作为细菌致病的重要毒力因子,在动物细菌性疾病的发病过程中起着不容轻视的作用。但是,目前国内尚未见到关于细菌溶血素的系统介绍。另外,细菌溶血素的英文命名并不统一,检索时容易造成漏检或误检;【方法】通过查阅大量英文文献资料,归纳汇总近20年报道的溶血素研究进程;【结果】该文详细列出了细菌溶血素名称、分类以及各溶血素家族列表。并且分别介绍了其中三种典型的穿孔毒素:葡萄球菌α-毒素、链球菌溶血素-O(胆固醇结合家族代表)、埃希氏大肠杆菌溶血素HlyA(RTX家族成员代表)。【结论】最近十几年,溶血素的家族成员、分子结构、分类、作用机理日趋明朗。这无疑是寻找代替抗生素治疗细菌性疾病方法的一条新路。

南方鲇(Silurus meridionalis)豚鼠气单胞菌溶血素的分离、纯化与致病性研究

采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A50凝胶层析法对豚鼠气单胞菌的溶血素进行分离、纯化,获得分子量为32.2kDa的单一多肽溶血素,测定溶血价为25。将该溶血素倍比稀释后梯度接种南方鲇,研究其对南方鲇的致病性和组织病理损伤情况。结果表明:豚鼠气单胞菌溶血素具有较强的毒力,对南方鲇的半数致死剂量(LD50)为0.29mg蛋白/kg体重;病鱼表现为体表褪色,腹部膨大,肝、脾、肾肿大,肝、脾淤血、出血明显;胃肠道内充有大量粘液,黏膜充血、出血;组织病理学表现为骨骼肌水肿、变性,肝细胞变性、坏死,血窦扩张淤血,肾小管上皮细胞变性、坏死,脾脏淋巴细胞减少,胃肠道黏膜上皮变性、坏死,脱落。

双重PCR法快速检测欧鳗鲡嗜水气单胞菌

采用已知的嗜水气单胞菌编码溶血素(Hemolysin)和外膜蛋白(Ompts)的基因序列为目的基因,依据其保守序列设计两对相应引物,用双重PCR方法检测了32株从发病欧鳗鲡分离的细菌,将检测结果与试剂盒快速生化鉴定结果进行比较.以嗜水气单胞菌为阳性对照,以大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、铜绿假单胞菌、鳗弧菌、溶壁微球菌、金黄色葡萄球菌为阴性对照检测了嗜水气单胞菌溶血素与外膜蛋白基因的特异性.结果表明:被检测的32株欧鳗鲡致病菌中,检测到的4株既有溶血素基因又有外膜蛋白基因的细菌,其生化鉴定结果全部为嗜水气单胞菌,而仅具有外膜蛋白基因的13株细菌中只有5株生化鉴定结果为嗜水气单胞菌.证明双重PCR法可用于快速检测部分嗜水气单胞菌.

威灵仙总皂苷对小鼠免疫功能的影响

目的观察威灵仙总皂苷对小鼠免疫功能的抑制作用。方法用DNFC对小鼠进行致敏,用鸡红细胞致小鼠溶血素生成,测定威灵仙总皂苷37.5、75、150 mg.kg-1三种剂量对耳片肿胀值、免疫器官胸腺与脾脏的指数及溶血素的影响。结果威灵仙总皂苷37.5、75、150 mg.kg-1三种剂量能减轻DNFC致敏小鼠耳片肿胀程度、降低免疫器官指数,抑制鸡红细胞致小鼠溶血素的生成。结论威灵仙总皂苷具有显著的免疫抑制作用。

不同海洋弧菌中5类溶血素基因的分布及其与溶血活性和磷脂酶活性的相关性

用57株海洋弧菌,包括26株弧菌标准菌株、20株哈维氏弧菌、11株副溶血弧菌(从不同宿主和不同地理环境中分离得到),用PCR法合成5类相应的地高辛标记的溶血素基因探针,利用其进行Southern Blot,检测这5类溶血素基因在57株弧菌中的分布。结果显示,在57海洋株弧菌中,含有TDH、HlyA、TLH、δ-VPH和HLX溶血素基因的菌株分别为2株、2株、49株、3株和30株。另外,1株霍氏格里蒙菌(Grimontia hollisae)和1株副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)中分别含有2个TDH溶血素基因。用鱼血平板和卵磷脂平板检测57株弧菌的溶血活性和磷脂酶活性,结果表明,弧菌溶血活性和磷脂酶活性与TLH溶血素基因具有显著相关性,与另外4类溶血素基因的关系不明显。

利用酒精酵母细胞表面展示技术制备活疫苗及其潜在应用

最近几年,出现把有关的基因在宿主表达之后的目的蛋白分泌并固定在细菌、病毒和酵母菌细胞表面上的技术—表面展示技术。在这些宿主中,酒精酵母菌是最佳的微生物。本文对利用酒精酵母细胞表面展示技术制备活疫苗的基本原理,在酵母细胞表面展示蛋白质的优点,以及哈维氏弧菌溶血素蛋白在酵母菌细胞表面上展示及其作为活疫苗的潜在应用作了综述。研究结果表明在酒精酵母菌细胞表面上展示的哈维氏弧菌溶血素蛋白在海洋动物中具有很好的免疫原性和免疫保护性。

猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化

将猪链球菌 2型 (Streptococcussuistype 2 )江苏分离株HA980 1接种于THB培养基中培养 ,得到含溶血素的培养液 ,其溶血价为 12 8,再经 5 0 %饱和硫酸铵沉淀 ,脱盐 ,得到溶血素粗提物 ,溶血价为 2 0 4 8。粗提物用阴离子交换柱层析及凝胶过滤层析 ,所得活性峰收集液溶血价分别为 4 0 96、10 2 4。通过以上三步的纯化 ,溶血素的比活提高 2 0 0倍。纯化蛋白在SDS_PAGE中呈现一条带 ,达电泳级纯度。

猪链球菌2型溶血素的化学修饰

用DTT、H2 O2 、DEPC、EDC、N AI、NBS、PCMB、2 ,3 Diacetyl和SA等 9种化学修饰剂 ,处理猪链球菌 2型江苏分离株提纯的溶血素 ,研究其分子中氨基酸侧链基团与其溶血活性的关系。结果表明 ,巯基、氨基、羧基和酪氨酸残基等与其溶血活性无关 ,而色氨酸、组氨酸和精氨酸的化学修饰引起溶血活性的大幅度下降 ,二硫键的化学修饰引起溶血活性的大幅度增强。显示色氨酸、组氨酸和精氨酸残基是该溶血素的活性必需基团 ,二硫键的断裂可引起其活性增强。

奶牛乳房炎白色念珠菌的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在了解宁夏地区奶牛真菌性乳房炎的发生情况,为诊断和治疗真菌性奶牛乳房炎提供有效依据。采集宁夏周边地区各奶牛场使用抗生素治疗无效的乳房炎奶样,对奶样中的真菌进行分离鉴定,并对分离菌进行生物学特性研究。通过选择性培养基从乳房炎奶样中获得真菌,进一步应用生物化学和分子生物学手段鉴定出样品中的真菌为白色念珠菌。通过溶血性、磷脂酶活性及产膜等方面的研究,证实其具有不同毒力,分离菌株对试验动物有较强的致病性。同时,采用药敏纸片法对分离株进行药敏试验,结果显示,菌株对临床常用抗生素耐药,对临床常用抗真菌药物敏感。结果表明,宁夏地区真菌性乳房炎奶样中分离出的致病菌均为白色念珠菌,感染率为43%,分离株具有较强的毒力,对常用抗生素耐药,对抗真菌药物和中药敏感。

雷公藤多甙的抗炎和免疫抑制作用

目的 探讨雷公藤多甙 (TⅡ)对炎症、变态反应和部分免疫指标的影响。方法 观察TⅡ 对大鼠急性、亚急性和免疫性炎症反应 ,Ⅲ型和Ⅳ型变态反应的作用 ,以及对小鼠抗体的产生、脾淋巴细胞增殖能力和T细胞亚群的影响。结果 TⅡ6 0、12 0mg/kg ,醋酸泼尼松 (pre) 10mg/kg能有效抑制角叉菜引发的大鼠足跖肿胀和大鼠棉球肉芽肿 ;抑制大鼠Ⅲ型、小鼠Ⅳ型变态反应。TⅡ3 0mg/kg有效预防大鼠佐剂性关节炎继发性病变。TⅡ3 0、6 0、12 0mg/kg明显抑制小鼠脾淋巴细胞转化、降低血清溶血素水平 ,不同剂量间有一定的量效关系。TⅡ 6 0mg/kg使T细胞亚群中TS 细胞明显减少 ;TⅡ 12 0mg/kg ,对TH 以及TS 细胞均有抑制作用 ;Pre 10mg/kg以抑制TH 为主 ,使TH/TS 比值下降。结论 TⅡ

结合流式细胞仪检测技术的菌体原位PCR扩增

建立一套原位PCR检测方法 ,联合流式细胞仪作为检测工具 ,作为基因水平转移研究中的基因监控手段。通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数 ;细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增 ,产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测 ,并辅以荧光显微镜镜检。扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光 ,与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分。流式细胞仪检测结果也显示 ,阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别。完成了对目标细菌的原位PCR扩增 ,并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测。由此表明isPCR

猪链球菌血清2型JX02株溶血素基因的克隆及序列分析

采用特异性引物对猪链球菌 2型 (Streptococcus suistype 2 ) JX0 2菌株进行 PCR扩增 ,将扩增到的溶血素基因克隆到 p MD18- T质粒载体中 ,经鉴定后测序。结果显示 ,扩增的 JX0 2株溶血素基因长度为 14 94 bp,与 P1/ 7株和 U S-1933株等进行序列比较 ,核苷酸同源性为 10 0 %和 99.7% ,氨基酸序列同源性为 10 0 %和 99.8%。