Acetylcholine-induced calcium oscillation in isolated outer hair cells in guinea pig

Objective This study is to explore the relationship between acetylcholine(ACh)-induced calcium release from intracellular Ca2+ stores and function of outer hair cell(OHC) motors, in an attempt to elucidate the mechanism of OHC electromotility at resting state. Methods OHCs were isolated from adult guinea pig (200-300 g) cochlea and loaded with Fluo-3/AM. The cells were treated with ACh/dHBSS, ACh/HBSS, dHBSS only or HBSS only. Intracellular [Ca2+]i variations in cells under the four treatments were observed using an Ar-Kr laser scan confocal microscope. Results [Ca2+]i oscillations were recorded in five OHCs treated with ACh/dHBSS but not in other cells. This is the first time that Ach-excited [Ca2+]i oscillations are reported in guinea pig OHCs independent of extracellular calcium. Conclusions ACh-excited [Ca2+]i oscillations in OHCs originates from intracellular calcium release and may play a crucial role in maintaining active mechanical motility of the OHC at resting and modulating OHC electromotility.

MCU在感音神经性耳聋中的研究进展

感音神经性耳聋(sensorineural hearing loss, SNHL)是世界性的公共健康问题,其制约人际交流,给社会造成严重负担。线粒体功能障碍和氧化胁迫是目前公认的SNHL的发病机制之一。线粒体钙离子单向转运体(mitochondrial calcium uniporter, MCU)作为线粒体的重要钙通道,参与维持细胞的信号传导与钙离子稳态。然而,其在SNHL的研究机制尚不明确,本文旨在讨论MCU及其维持的钙稳态在SNHL等疾病中的研究进展,为SNHL的防治指明可能的方向。

非完全消化-火焰原子吸收光谱法测定人发中的钙和镁

在 8 0～ 130℃的低温下用浓硝酸及过氧化氢消化人发 ,直到溶液呈透明淡棕色 ,加乳化剂OP溶解消化过程中所产生的油脂 ,可获得一均匀的样品乳浊液。取适量乳浊液 ,加入适量琼脂溶液及释放剂La(Ⅲ )溶液配制成试液。对样品处理条件、干扰的消除及检出限进行了考察。本方法的测定结果与灰化法一致 ,相对误差小于± 0 5 %。方法简便、快速、准确。

学龄前儿童发锌、发钙水平及相关因素分析

目的：了解学龄前儿童发锌、发钙水平及其相关影响因素。方法：采用原子吸收光谱法测定学龄前儿童发锌、发钙含量，采用称重法进行为期5天膳食调查。结果：发锌、发钙含量分别为121．8±49．50μg／和792．25±432．32μg／g；锌、钙不足率分别为37．4％和39．2％；发锌含量正常与不足两者间发钙水平（846．81±481．02μg／g、683．06±240．32μg／g）及钙不足率（31．3％和52．5％）均有显著性差异。锌、钙的每人日膳食摄入量分别占RDA的95．33％、42．35％；植物性食物来源分别为69．44％、67．06％。结论：锌、钙的食物来源不合理，锌可能与钙的代谢有关，在补钙时应注意同时补锌。

单纯性肥胖儿童头发钙、血钙与红细胞钙的关系

目的：探讨儿童单纯性肥胖与钙的关系。方法：对65名12～14岁单纯性肥胖儿童的头发钙、血钙与红细胞钙用原子分光光度法进行检测，应用SPSS软件进行统计学分析。结果：与正常儿童比较，单纯性肥胖儿童发钙水平降低（P〈0．05），红细胞钙升高（P〈0．05），血浆钙差异无显著性（P〉0．05）。结论；钙缺乏是单纯性肥胖的原因之一，提示应对单纯性肥胖儿童增加日照和机体补钙。

听毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系

应用激光扫描共聚焦显微镜和ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ双重荧光标记法，研究豚鼠耳蜗分离外毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系。外毛细胞（ｏｕｔｅｒｈａｉｒｃｅｌ，ＯＨＣ）受药物或机械刺激后，其钙信号起源于一侧质膜，可形成钙波传向全细胞，对其中１个ＯＨＣ测得传播速度为０．０２５－０．０４７μｍ／ｓ。钙信号转导过程中各亚细胞区域游离钙浓度增加幅度不同。胞内游离钙增高时伴有细胞长度变化，缩短者占６／１０，伸长者占４／１０。对照组（不予刺激且胞内游离钙无变化者）３个外毛细胞中，缩短者２个，长度无变化者１个。实验表明，听毛细胞受刺激后可产生钙波，钙信号具有不均匀性，外毛细胞的钙依赖慢运动表现为细胞伸长，细胞缩短则在胞内游离钙浓度升高或保持于静态基准浓度时均可发生。

广西玉林青少年头发中钙镁含量与身高体重的关系

目的 :通过调查分析青少年青春期发育阶段头发钙镁含量与身高体重的关系 ,探讨影响该人群生长发育的地域性特征。方法 :采用随机抽样方法从玉林地区检测了 710例 (男 4 2 4 ,女 2 86) 7～ 16岁的健康青少年的身高体重指标并用偏振塞曼原子吸收仪对他们的头发样品中钙镁含量进行测定。结果 :男女头发中钙含量与身高成负相关 ;女性头发中镁含量与身高体重成正相关 ;男女各年龄间头发钙含量存在显著性差异。结论 :在该地区青少年生长发育时期 ,头发中钙镁含量随着体质发育的变化发生不断的改变 ,不同性别、不同年龄发育阶段头发中钙镁含量表现出不同的变化特征 。

噪声习服对听觉损伤的保护作用机制探讨

目的:探讨噪声习服对听觉损伤的保护作用机制。方法:建立噪声习服实验动物模型。采用免疫组织化学、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)及图像分析等技术,定量研究噪声习服后毛细胞内纤维状肌动蛋白(F-actin)、钙调蛋白(CaM)、热休克蛋白70(HSP70)的表达及游离Ca2+浓度的变化。结果:噪声暴露后毛细胞中F-actin、CaM及HSP70的表达均呈增加趋势。与噪声损伤暴露组(H组)比较,噪声习服后损伤暴露组(CH组)中F-actin和HSP70的表达均明显增多,CaM的表达具有增加趋势。声暴露后毛细胞内游离Ca2+浓度升高,噪声损伤暴露组毛细胞内游离Ca2+浓度明显高于噪声习服组(C组)和习服后损伤暴露组。结论:噪声习服使毛细胞对于其后声刺激的保护性反应增强,毛细胞内细胞骨架系统的加强及胞内钙稳态的维持在噪声习服的保护机制中具有重要意义。

豚鼠耳蜗单离外毛细胞游离钙的胆碱能调控

目的 观察胆碱能兴奋剂和拮抗剂对豚鼠耳蜗单离外毛细胞 (OHC)内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响 ,探讨OHC内 [Ca2 + ]i的胆碱能调控机制。方法 健康豚鼠 15只处死 ,Hanks液中分离活性单离OHC ,Fluo - 3/AM负载 30min。分 7组进行不同干预 ,包括乙酰胆碱 (ACH ,胆碱能M和N受体兴奋剂 )、毒蕈碱 (M受体兴奋剂 )、阿托品 (M受体拮抗剂 )、庆大霉素 (N受体拮抗剂 )、加Hanks液对照组和不加干预对照组 ;另 1组为dHanks液中加ACh。用激光扫描共聚焦显微镜 (Bio-Rad ,英国 )观察OHC内 [Ca2 + ]i的变化。结果 Hanks液中不加干预试剂、加毒蕈碱、加Hanks液对照和无钙dHanks液中加ACh等 4组 ,[Ca2 + ]i在 2 5～ 30min内升幅 <1.10倍。Hanks液中加ACh组 [Ca2 + ]i最高升幅平均为 3.0 9倍 ;阿托品 +ACh组 [Ca2 + ]i为 2 .92倍 ;庆大霉素 +ACh组[Ca2 + ]i为 1.81倍。结论 豚鼠耳蜗传出神经递质ACh通过兴奋N受体 ,开放OHC的细胞膜钙离子通道 ,使细胞外Ca2 + 内流外毛细胞内 ;[Ca2 + ]i增加需要细胞外液中钙离子存在。

豚鼠耳蜗外毛细胞的共聚焦图像

建立了用激光扫描共聚焦显微镜观察豚鼠耳蜗外毛细胞生理变化及细胞形态的方法。以荧光染料Ｆｌｕｏ－３作胞内Ｃａ￣（２＋）指示剂，用共聚焦显微镜观察了乙酰胆碱（ＡＣｈ）、ＡＴＰ、高钾引起的外毛细胞（ＯＨＣ）胞内Ｃａ￣（２＋）浓度的变化。三种物质均引起Ｃａ￣（２＋）升高，但升高的幅度、时相及所在细胞部位不同。高钾还引起ＯＨＣ短缩、偏折。利用共聚焦显微镜“光学切片”的特性，对Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ荧光素染色的活的ＯＨＣ形态及碘化吡啶（ＰＩ）染色的细胞核形态进行了三维重建。讨论了共聚焦显微镜在ＯＨＣ生理及形态学研究中的应用前景。

豚鼠耳蜗各回外毛细胞L型钙通道的分布

目的 探讨耳蜗 2～ 4回外毛细胞 (outerhaircell,OHC)L型钙通道分布密度。方法 豚鼠耳蜗外毛细胞L型钙通道经DM BODIPYDHP和RH414标记后用激光扫描共聚焦显微镜观察 ,以DM BODIPYDHP /RH414荧光比值大小指示L型钙通道密度的高低。结果 ①应用硝苯地平阻断后 ,质膜的DM BODIPYDHP荧光染色明显减弱 ,表明其钙通道为特异性L型钙通道 ;②L型钙通道密度从低频区 (第 4回 )向高频区 (第 2回 )有逐渐增加的趋势 ,方差分析示第 4回和第 2回OHC之间L型钙通道的分布差异有显著性意义 ;③OHC质膜不同区域L型钙通道分布差异无显著性意义。结论耳蜗 2～

双重荧光染色监测听毛细胞游离钙

豚鼠耳蜗分离外毛细胞经fluo-3和fura-red染色后,用激光扫描共聚焦显微镜监测其胞内游离钙的空间分布和动态变化,以fluo-3/fura-red荧光比值大小指示游离钙浓度的高低。外毛细胞胞内游离钙呈不均匀分布,荧光比值分别为细胞质1.71±0.85,质膜1.61±0.75,表皮板1.47±0.65及胞核1.39±0.66,显示细胞质游离钙浓度最高而胞核游离钙浓度最低。静息状态下连续扫描时荧光比值变化小于0.1,而在受到机械刺激后荧光比值增加幅度达0.3—1.2。实验结果表明,fluo-3和fura-red双发射比例法能更准确反映听毛细胞胞内钙的空间分布和动态变化,第二信使钙可能参与了听毛细胞的机械-电换能过程,研究了换能过程中听毛细胞钙信号的时空模式。

水杨酸钠对豚鼠耳蜗单离外毛细胞游离钙浓度影响及其调控机制研究

目的 观察水杨酸钠对豚鼠耳蜗外毛细胞 (outerhaircells,OHC)内游离钙浓度 [Ca2 + ]i的影响 ,并对钙通道调控药物的拮抗作用进行观察 ,以深入探讨水杨酸钠耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀 ,酶 机械法分离获得耳蜗单离OHC。 10 μmol/L的Fluo 3/AM负载30min后用ACASUltima型激光扫描共聚焦显微镜观察不同药物灌流下OHC[Ca2 + ]i的变化。结果 OHC在标准细胞外液灌流过程中 [Ca2 + ]i保持稳定。 1mmol/L水杨酸钠灌流致 8/ 10个细胞的 [Ca2 + ]i明显升高。无钙细胞外液中灌流亦有 10 / 10个细胞 [Ca2 + ]i明显的升高。经 3mmol/L利多卡因作用1h后 ,水杨酸钠灌流不能使细胞 [Ca2 + ]i升高 (n =10 )。盐酸氟桂嗪可以明显阻断水杨酸钠导致的OHC[Ca2 + ]i升高效应 (3/ 12细胞的 [Ca2 + ]i升高 ) ,而尼莫地平无此效应 (7/ 7细胞的 [Ca2 + ]i升高 )。结论 水杨酸钠可以导致OHC[Ca2 + ]i明显增加 ,OHC[Ca2 + ]i升高来源于细胞内钙库的动员和释放。使细胞内 [Ca2 + ]i升高可能是水杨酸钠的耳毒性机制之一。

胆碱能受体激动剂对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

目的：通过观察胆碱能受体激动剂对离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响，探讨前庭毛细胞膜所存在的胆碱能受体及其分型、受体的脱敏现象。方法：用胶原酶消化后机械分离法，分离豚鼠壶腹嵴前庭毛细胞（VHC)， 钙敏荧光探针 Fluo-3 荧光染色，用激光扫描共聚焦显微镜记录VHC细胞内游离钙离子浓度（[Ca2+]i）的动态变化。结果：①胆碱能M和N型受体激动剂乙酰胆碱(ACh)、氨甲酰胆碱(CCh)均可引起离体VHC内[Ca2+]i的升高；N型受体激动剂溴化乙酰胆碱(Ach-Br)仅在高浓度（10 mmol/L）时引起部分（4/5）离体VHC内[Ca2+]i升高，在低浓度(1mmol/L)时影响不明显；②ACh、CCh 引起 VHC内[Ca2+]i升高在同一细胞不能重复出现，存在脱敏现象；而不同类型的受体激动剂先后作用时无脱敏现象；③阿托品对ACh、CCh引起的VHC内[Ca2+]i的升高有抑制作用；加入 0.1 mmol/L 阿托品可使 1 mmol/L ACh 或 CCh 引起的 VHC 内[Ca2+]i升高的峰值明显减小(t检验均有极显著差异，P<0.01)。结论：豚鼠前庭毛细胞膜上存在 M 型和 N 型两种受体，M 型受体激动剂引起 VHC 内[Ca2+]i的升高较 N 型明显。阿托品对 M 型受体激动剂引起的[Ca2+]i 升高有抑制作用；前庭毛细胞膜上的胆碱能受体对同一类型的激动剂有脱敏现象。

深圳市1408例儿童发中钙、铁、镁含量调查与分析

用火焰原子吸收法检测了深圳市1408例13岁以下儿童发中钙、铁、镁的元素含量，并探讨了元素含量与年龄、性别的关系。结果显示，性别差异有显著意义，钙、镁含量随年龄增长有相似变化。

温度变化对豚鼠离体前庭毛细胞内钙离子浓度的影响

目的为探讨温度改变诱发前庭眼震的机理。方法酶孵育后机械分离成功豚鼠前庭毛细胞（ＶＨＣ）３４个，Ｆｌｕｏ－３荧光染色后，改变其外环境的温度，用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下及温度改变时ＶＨＣ内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的变化。结果将分离的ＶＨＣ分为两型，ＬＳＣＭ下钙离子分布图像与相差显微镜下所见细胞外形相似，其钙离子分布在核区略高。１８／２２的Ⅰ型与７／１２的Ⅱ型ＶＨＣ其细胞内［Ｃａ２＋］ｉ随温度的升高而增加，随温度的降低而减少，呈规律性变化，但Ｉ型ＶＨＣ的变化幅度较大；对照试验观察到变温仅对少数（２／９）耳蜗外毛细胞（ＯＨＣ）内［Ｃａ２＋］ｉ有影响。本研究结果显示变温对ＶＨＣ有直接刺激作用，表现为ＶＨＣ内［Ｃａ２＋］ｉ变化。结论对冷热诱发眼震的解释，除Ｂａｒａｎｙ的热对流学说外，尚存在冷热对ＶＨＣ的直接作用。

中等强度冲击波负压暴露对豚鼠耳蜗毛细胞游离钙浓度的影响

目的:观察实验性冲击波负压(BUP)暴露对豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响。方法:在激光共聚焦显微镜下,用钙敏荧光探针Fluo-3作为指示剂,观察豚鼠暴露中等强度实验性BUP后耳蜗外毛细胞[Ca2+]i的变化。结果:中等强度BUP暴露后8 h,至暴露后24 h和3 d稍有回落,但仍高于正常对照组。上述这些变化与听性脑干反应阈值的升高是一致的。结论:豚鼠暴露中等强度性BUP可引起耳蜗外毛细胞内[Ca2+]i的明显增高,且可能是听功能损害的主要原因之一。

硝普钠对豚鼠耳蜗外毛细胞全细胞钙电流作用的实验研究

目的 探讨一氧化氮供体———硝普钠 (sodiumnitroprusside ,SNP)对豚鼠单离耳蜗外毛细胞钙电流的影响及作用机制。方法 利用急性分离的豚鼠耳蜗外毛细胞 ,在全细胞膜片钳电压钳记录技术下 ,通过分离离子电流成分的方法 ,记录豚鼠耳蜗外毛细胞全细胞钙电流。结果 SNP对内向钙电流有抑制作用 ,在钳制电位为 -60mV ,刺激电压为 + 10mV的条件下 ,10mmol/L的SNP能抑制 (61 12± 1 99) %的内向钙电流 ( x±s ,n =5)。从 5～ 8个细胞得到的量效关系曲线中 ,其半数作用浓度为 1 9mmol/L ,最大抑制浓度为 10 0mmol/L ,斜率为 0 98。作用的机制为SNP可选择性地阻断外毛细胞膜上的L 型钙通道 (n =6)。结论 SNP作为一氧化氮的一种供体 ,能影响豚鼠耳蜗外毛细胞的生理功能 ,是通过阻断外毛细胞L

62例佝偻病患儿头发钙元素分析

为了解佝偻病患儿头发钙含量情况 ,将测得的 62例佝偻病患儿发钙值进行了分析。结果表明 ,男女佝偻病患儿头发钙含量均高于正常值 ,其中男患儿头发钙与正常值相比 ,差异具有高度显著性意义 (P <0 0 1 ) ;男女佝偻病患儿与体检儿头发钙比较 ,前者均高于后者 ,但无统计学意义 ;男女体检儿及男女佝偻病患儿之间头发钙含量差异无显著性。结果提示 ,佝偻病患儿发钙值并不比正常值低 ,相反还高于正常值 。

用共聚焦显微镜观察ACh及ATP对豚鼠耳蜗外毛细胞Ca^（2＋）的调控

用激光扫描共聚焦显微镜研究了一般公认的耳蜗传出神经递质乙酰胆碱（ＡＣｈ）和三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对豚鼠耳蜗外毛细胞（ＯＨＣｓ）胞内游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的作用，ＯＨＣｓ用Ｃａ２＋敏感荧光染料Ｆｌｕｏ－３着色，胞内Ｃａ２＋的分布以细胞底部稍强。ＡＣｈ在ＯＨＣ底部引起［Ｃａ２＋］ｉ的缓慢上升并维持在一个较高水平。ＡＴＰ在整个ＯＨＣ引起一个急剧的［Ｃａ２＋］ｉ升高，升高的幅度在ＯＨＣ顶部最大。随着ＡＴＰ的持续作用，［Ｃａ２＋］ｉ缓慢下降，呈耗竭趋势，但此时用ＡＣｈ刺激仍能引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高，这提示ＡＣｈ引起的［Ｃａ２＋］ｉ升高有胞外Ｃａ２＋流入的成分，ＡＴＰ引起的［Ｃａ２＋］ｉ；升高可能主要为胞内Ｃａ２＋库的释放，但也不排除通过ＡＴＰ门控的阳离子通道的直接进入。