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Taq DNA聚合酶的分子改造及其在探针法qPCR直扩体系中的应用
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作者 胡松青 袁家惠 +1 位作者 刘光毅 侯轶 《华南理工大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2024年第4期8-16,共9页
Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DN... Taq DNA聚合酶作为实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)技术的核心组分,其性能优劣直接影响qPCR技术的进一步发展。然而,野生型Taq DNA聚合酶的耐抑制剂性能差、延伸性能不足。为获得具有高性能的Taq DNA聚合酶,采用基因工程技术将双链DNA结合蛋白Sso7d或Sto7d融合在野生型Taq DNA聚合酶的N端或C端,构建了4个均可溶表达的改造体,再经过耐受性测试筛选较优的改造体,结果显示:改造体Taq-Sto的耐受性最高,其热稳定性不受影响,且在1 s/kbp的延伸条件下能成功扩增靶标,表明Taq-Sto具有增强的延伸性能,在TaqMan探针法qPCR体系中对腐殖酸、单宁酸、全血等抑制剂同样表现出良好的耐受性。EMSA实验发现:Taq-Sto对DNA模板的结合亲和力有所提高,有利于增强Taq-Sto对模板的竞争力;将Taq-Sto应用于非洲猪瘟病毒(ASFV)的TaqMan探针法qPCR检测,与商品化试剂相比,Taq-Sto具有更低的ASFV检出限,且在体积分数为2%~6%的猪粪便样本或猪肉样本中的检测灵敏度分别为100.0%和85.4%,说明Taq-Sto在直扩qPCR检测领域更具有优势。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 双链dna结合蛋白 耐受性 聚合酶链式反应
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DIFFERENT RESULTS BY DIFFERENT COMMERCIAL TAQ DNA POLYMERASE IN RAPD
2
作者 HE Li YUAN Shuiquan +4 位作者 MO Banghui YAO Guanggui LIN Honghui CHEN Fang GUO Xiaocai 《四川动物》 CSCD 2002年第2期101-102,F003,共3页
关键词 taq dna聚合酶 RAPD 片断扩增 稳定性
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重组大肠杆菌生产TaqDNA聚合酶发酵工艺优化
3
作者 肖云 陈洁 《粮油食品科技》 CAS CSCD 2023年第4期154-161,共8页
Taq DNA聚合酶是PCR技术中广泛应用的耐热酶。为提高重组大肠杆菌生产Taq DNA聚合酶的产量,以Taq DNA聚合酶产量和酶的比活力为考察指标,通过单因素实验优化产生TaqDNA聚合酶含量的单因素:发酵温度、pH值、IPTG诱导剂用量、诱导时间、... Taq DNA聚合酶是PCR技术中广泛应用的耐热酶。为提高重组大肠杆菌生产Taq DNA聚合酶的产量,以Taq DNA聚合酶产量和酶的比活力为考察指标,通过单因素实验优化产生TaqDNA聚合酶含量的单因素:发酵温度、pH值、IPTG诱导剂用量、诱导时间、接种量,结果表明:发酵温度、pH值、IPTG诱导剂浓度,对该基因工程菌发酵产Taq DNA聚合酶的比酶活力有显著影响,而诱导培养时间、接种量对产Taq DNA聚合酶的比酶活力影响不显著。故选择发酵温度、pH值、IPTG诱导剂浓度作为响应面的三个因素优化重组大肠杆菌生产Taq DNA聚合酶发酵工艺,响应面分析结果显示对酶的比活力显著性顺序为:IPTG诱导剂浓度>发酵温度>pH值,最佳发酵工艺参数为:发酵温度37.2℃,pH值为7.5,IPTG诱导剂浓度为0.800 mmol/L,在此条件下发酵,Taq DNA聚合酶比活力达到(43.822±0.878)kU/mg。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌 taq dna聚合酶 酶比活力 发酵工艺 响应面分析法
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Quantum dots induce hot-start effects for Taq-based polymerase chain reaction 被引量:1
4
作者 Fuming Sang Yang Yang +2 位作者 Hongyuan Wang Xiaolei Ju Zhizhou Zhang 《Journal of Biomedical Science and Engineering》 2012年第6期295-301,共7页
Decent hot-start effects were here reported in Taq DNA polymerase-based polymerase chain reaction (PCR) when water-soluble CdTe quantum dots (QDs) were employed. The hot-start effects were revealed by the higher ampli... Decent hot-start effects were here reported in Taq DNA polymerase-based polymerase chain reaction (PCR) when water-soluble CdTe quantum dots (QDs) were employed. The hot-start effects were revealed by the higher amplicon yields and distinguished suppression of nonspecific amplification after pre-incubation of PCR mix with quantum dots between 30°C and 56°C. DNA targets were well amplified even after PCR mixture was pre-incubated 3 hr at 30°C or 1 hr at 50°C. Importantly, the effects of QDs nanoparticles could be reversed by increasing the polymerase concentration, suggesting that there was an interaction between QDs and Taq DNA polymerase. Moreover, control experiment indicated that hot-start effect is not primarily due to the reduced polymerase concentration resulted from the above interaction. This study provided another good start to investigate potential implications of quantum dots in key molecular biology techniques. 展开更多
关键词 Quantum Dots Hot-Start polymerase Chain Reaction (PCR) dna taq dna polymerase
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Taq DNA聚合酶功能区域的定位 被引量:6
5
作者 季朝能 杜汉森 +2 位作者 郑佐华 黄啸宇 毛裕民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第3期432-435,共4页
通过参U法定点突变产生了TaqDNA聚合酶N端分别缺失3个,235个,287个和443个氨基酸的4个缺失体,利用Bal-31连续缺失法产生了TaqDNA聚合酶的C端分别缺失了2个、16个、29个、32个、34个氨基酸... 通过参U法定点突变产生了TaqDNA聚合酶N端分别缺失3个,235个,287个和443个氨基酸的4个缺失体,利用Bal-31连续缺失法产生了TaqDNA聚合酶的C端分别缺失了2个、16个、29个、32个、34个氨基酸的5个缺失体.经DNA聚合酶活性测定表明N端缺失3个,235个,287个氨基酸后活力和完整的Taq相近,而缺失443个氨基酸后则失去了DNA聚合酶活力;C端的5个缺失体都失去了DNA聚合酶活性.据此TaqDNA聚合酶的功能区域被定位在287~832氨基酸之间. 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 功能区域 定位
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基因重组Taq DNA聚合酶的制备 被引量:7
6
作者 王天云 秦川 +1 位作者 杨瑞 杨献军 《新乡医学院学报》 CAS 2007年第6期551-553,共3页
目的制备重组Taq DNA聚合酶,为PCR提供试剂。方法用Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导12 h表达Taq DNA聚合酶,溶菌酶、NP40裂解细菌,硫酸铵沉淀、4℃透析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-... 目的制备重组Taq DNA聚合酶,为PCR提供试剂。方法用Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导12 h表达Taq DNA聚合酶,溶菌酶、NP40裂解细菌,硫酸铵沉淀、4℃透析,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和PCR扩增分析其纯度和活性。结果分离纯化制备的Taq酶,纯度、活性都可与同类产品相比,能有效扩增DNA片段。结论该方法制备可用于PCR的Taq酶具有快速简便的优点。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 基因工程 分离纯化
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大肠杆菌表达重组Taq DNA聚合酶的分离和纯化 被引量:7
7
作者 何钢 王义强 +1 位作者 李樊 刘贤桂 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期50-54,共5页
以插入Taq DNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化E.coli菌株,表达Taq DNA聚合酶,用反复冻融的方法裂解菌体.表达产物为可溶性蛋白,采用Duo-Flow系统(Bio-Rad)及S柱,Tris缓冲液pH为7.5.以0-1 mol/L盐梯度洗脱方式,收集洗脱峰.透析... 以插入Taq DNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化E.coli菌株,表达Taq DNA聚合酶,用反复冻融的方法裂解菌体.表达产物为可溶性蛋白,采用Duo-Flow系统(Bio-Rad)及S柱,Tris缓冲液pH为7.5.以0-1 mol/L盐梯度洗脱方式,收集洗脱峰.透析去盐可得到高纯度的产品.经PCR反应与商品Taq酶的一个活性单位相比较,重组的Taq酶活性有1个单位.用该方法可以从1 L培养液中分离得到5.51 mg产品. 展开更多
关键词 生物技术 taq dna聚合酶 大肠杆菌 表达 分离 纯化
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重组TaqDNA聚合酶在大肠杆菌中的表达与纯化 被引量:7
8
作者 汪靖超 李荣贵 《青岛大学学报(工程技术版)》 CAS 2004年第1期93-96,共4页
从嗜热菌Thermusaquaticus中分离出的TaqDNA聚合酶由于其热稳定性,在聚合酶链式反应(PCR)中得到广泛的应用,我们根据编码TaqDNA聚合酶的基因序列,设计出一对引物,通过PCR扩增出TaqDNA聚合酶基因,并将其克隆到表达载体pET-15b中,转化大... 从嗜热菌Thermusaquaticus中分离出的TaqDNA聚合酶由于其热稳定性,在聚合酶链式反应(PCR)中得到广泛的应用,我们根据编码TaqDNA聚合酶的基因序列,设计出一对引物,通过PCR扩增出TaqDNA聚合酶基因,并将其克隆到表达载体pET-15b中,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导后,重组TaqDNA聚合酶在大肠杆菌中实现了大量表达。经过热变性、亲和层析、阳离子交换层析获得了电泳纯的重组TaqDNA聚合酶。本研究的生产程序可作为TaqDNA聚合酶生产的一种新方法。 展开更多
关键词 重组taq dna聚合酶 表达 纯化 大肠杆菌 嗜热菌
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2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较 被引量:2
9
作者 秦川 杨献军 +1 位作者 杨瑞 王天云 《新乡医学院学报》 CAS 2008年第5期469-471,共3页
目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫... 目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 表达 纯化
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以冻融法快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶 被引量:1
10
作者 孙亮先 骆红梅 +1 位作者 董海涛 李德葆 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2001年第4期495-497,共3页
用含有TaqDNA聚合酶基因的 pTaq表达质粒转化E .coliDH5α菌株 ,IPTG诱导表达TaqDNA聚合酶。利用该酶的热稳定性 ,反复 2次 - 70℃、75℃交替冻融以裂解细胞释放胞浆 ;以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯... 用含有TaqDNA聚合酶基因的 pTaq表达质粒转化E .coliDH5α菌株 ,IPTG诱导表达TaqDNA聚合酶。利用该酶的热稳定性 ,反复 2次 - 70℃、75℃交替冻融以裂解细胞释放胞浆 ;以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯化TaqDNA聚合酶的目的。PCR扩增反应和SDS -PAGE分析表明所制备的TaqDNA聚合酶的纯度、活力、敏感性、特异性均达到试验要求。该方法具有快速简便的优点。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 纯化 聚合酶链式反应 PCR技术 冻融法 基因工程
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利用Taq DNA聚合酶反转录cDNA第一链的研究 被引量:1
11
作者 张银东 彭存智 +1 位作者 曾宪松 郑学勤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期79-82,共4页
应用TaqDNA聚合酶(ThermusaquaticusDNApolymerase)直接对RNA进行反转录成cDNA第一链,然后用特异引物进行PCR扩增,结果表明,反转录达到AMV逆转录酶的效果,且可能得到比AMV逆... 应用TaqDNA聚合酶(ThermusaquaticusDNApolymerase)直接对RNA进行反转录成cDNA第一链,然后用特异引物进行PCR扩增,结果表明,反转录达到AMV逆转录酶的效果,且可能得到比AMV逆转录酶更完整的cDNA第一链。 展开更多
关键词 taqdna聚合酶 逆转录 cdna第一链
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耐热Taq DNA聚合酶的酸酐修饰及其在降低PCR非特异性扩增中的应用评价 被引量:1
12
作者 周晓薇 朱雪蛟 +1 位作者 田玲 曹林 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期500-505,共6页
酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落... 酸酐能与聚合酶上的赖氨酸结合形成聚合物,试验通过选用合适的酸酐,修饰TaqDNA聚合酶。在常温下,酶活性被封闭,升温过程中不表现酶活,从而减少非特异性扩增和引物二聚体的形成;而在较高的温度下一段时间后,一般为94℃、15 min,酸酐脱落,聚合酶得以恢复正常的扩增活性,从而实现PCR反应的热启动。由此建立的热启动PCR体系灵敏度高,可以检测到10个拷贝的DNA分子,较普通PCR体系提高了2个数量级。此方法较其他方法操作简单成本低廉,且所得的热启动TaqDNA聚合酶稳定性好,便于保存,其灵敏性与特异性也更高。这种通过化学修饰形成的复合物达到热启动PCR目的的方法的建立,具有着重要的意义,是提高PCR灵敏度和特异性的重要方法之一。 展开更多
关键词 热启动PCR taq dna聚合酶 化学修饰
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快速纯化高活力基因工程Taq DNA聚合酶 被引量:3
13
作者 孙亮先 黄周英 +2 位作者 谢进金 董海涛 李德葆 《泉州师范学院学报》 2001年第4期64-66,共3页
用含有TaqDNA聚合酶基因的 pTaq表达质粒转化E .coliDH5α菌株 ,IPTG诱导表达TaqDNA聚合酶 .利用该酶的热稳定性 ,经两轮 - 70℃深度冷冻和 75℃水浴 ,细菌裂解释放内容物 ,以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到... 用含有TaqDNA聚合酶基因的 pTaq表达质粒转化E .coliDH5α菌株 ,IPTG诱导表达TaqDNA聚合酶 .利用该酶的热稳定性 ,经两轮 - 70℃深度冷冻和 75℃水浴 ,细菌裂解释放内容物 ,以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯化TaqDNA聚合酶的目的 .PCR扩增反应表明所制备的TaqDNA聚合酶的活力、敏感性、特异性均达到试验要求 .该方法具有快速简便的优点 . 展开更多
关键词 taqdna聚合酶 冻融 纯化 聚合酶链式反应 基因工程酶 酶活力 热稳定性
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重组TaqDNA聚合酶在大肠杆菌中表达条件的优化 被引量:1
14
作者 何钢 邢伟一 +2 位作者 罗丽华 石慧 韩文军 《中南林学院学报》 CSCD 2004年第4期62-65,共4页
 以插入重组TaqDNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化大肠杆菌菌株,转化菌铺平板的最佳量为50至100μL,可获得转化菌的单菌落,单菌落扩大到200mL培养量,表达TaqDNA聚合酶,经SDS-PAGE分析,表达带的相对分子质量约为82ku,最佳表达条件为...  以插入重组TaqDNA聚合酶基因的pET-24a表达质粒转化大肠杆菌菌株,转化菌铺平板的最佳量为50至100μL,可获得转化菌的单菌落,单菌落扩大到200mL培养量,表达TaqDNA聚合酶,经SDS-PAGE分析,表达带的相对分子质量约为82ku,最佳表达条件为接种量1/500,工程菌培养到OD600值为1.0开始诱导,以2mmol/LIPTG诱导8h,TaqDNA聚合酶可获得较高的表达效率. 展开更多
关键词 生物化学 重组taq dna聚合酶 大肠杆菌 表达条件
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利用Taq DNA聚合酶直接从双链RNA模板中扩增靶序列 被引量:2
15
作者 刘莉 陈集双 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期57-60,共4页
利用Taq DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性义具有反转录酶活性的特点,探索了在Taq DNA聚合酶单独作用下以双链RNA为模板进行PCR反应的条件。结果表明靶序列长度为277 bp、369 bp、987 bp时,均可直接进行PCR扩增;短片段序列扩增的退火温度... 利用Taq DNA聚合酶既具有DNA聚合酶活性义具有反转录酶活性的特点,探索了在Taq DNA聚合酶单独作用下以双链RNA为模板进行PCR反应的条件。结果表明靶序列长度为277 bp、369 bp、987 bp时,均可直接进行PCR扩增;短片段序列扩增的退火温度在47.0℃、47.9℃、50.2℃、52.6℃、54.9℃、56.7℃条件下,均可有效扩增,而长片段序列扩增的退火温度在50.2℃、52.6℃、54.9℃、56.7℃条件下,也可扩增出相应的靶序列。这一结果提示利用Taq DNA聚合酶可以dsRNA为模板直接扩增目的片段,尤其是短片段的扩增。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 反转录活性 PCR 双链RNA
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表达于工程菌 DH5α 中 Taq DNA 聚合酶的纯化 被引量:3
16
作者 包永明 祖国仁 《大连轻工业学院学报》 1997年第4期67-70,共4页
采用聚乙烯亚胺沉淀、BioRex70离子交换、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、PCR检测等简单方法,在30h内完成TaqDNA聚合酶的基因重组质粒在工程菌DH5α中超表达酶的提取纯化及酶活标定。2000ml发酵液可提纯3... 采用聚乙烯亚胺沉淀、BioRex70离子交换、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、PCR检测等简单方法,在30h内完成TaqDNA聚合酶的基因重组质粒在工程菌DH5α中超表达酶的提取纯化及酶活标定。2000ml发酵液可提纯3万U的TaqDNA聚合酶,与国外优质产品(promega)相比,热稳定性没有差别,扩增特异性尚需进一步探讨。 展开更多
关键词 taq-dna聚合酶 纯化 大肠杆菌DH5α DH5Α
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普通Taq DNA聚合酶扩增幽门螺杆菌尿素酶基因长片段 被引量:1
17
作者 赵庆萱 董勇前 陈翠萍 《微生物学免疫学进展》 1999年第2期32-34,共3页
PCR反应扩增较长的DNA片段比较困难。本实验对幽门螺杆菌染色体DNA上的27Kb尿素酶基因用普通TaqDNA聚合酶进行扩增,扩增结果以琼脂糖凝胶电泳证实,得到所需的27Kb的片段。该实验为今后幽门螺杆菌工作的进... PCR反应扩增较长的DNA片段比较困难。本实验对幽门螺杆菌染色体DNA上的27Kb尿素酶基因用普通TaqDNA聚合酶进行扩增,扩增结果以琼脂糖凝胶电泳证实,得到所需的27Kb的片段。该实验为今后幽门螺杆菌工作的进一步研究提供了经济,有效,简捷的条件。 展开更多
关键词 taqdna聚合酶 PCR 幽门螺杆菌 尿素酶
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TaqDNA聚合酶表达载体的构建及表达条件优化 被引量:1
18
作者 鞠守勇 《武汉职业技术学院学报》 2022年第5期106-109,共4页
Taq DNA聚合酶是基因工程中最重要的商业化工具酶之一,对于大量分子克隆的教学实验来说,存在一定的经济成本负担。一般基因工程实验室都有能力自主生产Taq酶,这样可以节省大量的科研经费,同时还可以培养学生综合实训能力。研究构建Taq ... Taq DNA聚合酶是基因工程中最重要的商业化工具酶之一,对于大量分子克隆的教学实验来说,存在一定的经济成本负担。一般基因工程实验室都有能力自主生产Taq酶,这样可以节省大量的科研经费,同时还可以培养学生综合实训能力。研究构建Taq DNA聚合酶表达载体,在大肠杆菌E.coli BL21(ED3)中表达,并成功提取Taq酶,检测其活性。PCR实验表明研究得到的Taq酶与商业化Taq酶的活力相当,为自主生产Taq DNA聚合酶教学实验室和研究实验室提供参考,极大降低实验室Taq酶的成本。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 基因工程 taq dna聚合酶表达
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一种采用阴离子交换柱快速纯化Taq DNA聚合酶的方法
19
作者 余彦 李程勋 +4 位作者 陈树清 叶长亮 黄力坤 许铁城 林文雄 《福建农业学报》 CAS 2012年第7期734-738,共5页
通过37℃恒温振荡培养含有Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株,并用IPTG诱导该基因表达获得TaqDNA聚合酶蛋白,利用40%硫酸铵沉淀该蛋白后溶解于storage buffer中。此法获得的Taq DNA聚合酶带负电荷,因此采用阴离子交换柱纯化蛋白。试验结果... 通过37℃恒温振荡培养含有Taq DNA聚合酶基因的E.coli菌株,并用IPTG诱导该基因表达获得TaqDNA聚合酶蛋白,利用40%硫酸铵沉淀该蛋白后溶解于storage buffer中。此法获得的Taq DNA聚合酶带负电荷,因此采用阴离子交换柱纯化蛋白。试验结果表明,此法与传统的透析方法相比能快速地去除生物小分子杂质,同时去除透析方法无法除去的杂蛋白;既能保证Taq DNA聚合酶的生物学活性,同时能缩短纯化时间、提高Taq DNA聚合酶的纯度。以土壤微生物DNA、水稻cDNA为模板进行PCR扩增并对扩增产物进行测序,结果显示纯化后的Taq DNA聚合酶具有较高的扩增效率和保真性。 展开更多
关键词 taq dna聚合酶 硫酸铵 阴离子交换柱
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Taq DNA聚合酶制备技术的优化 被引量:5
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作者 肖朝文 杜娟 李晚忱 《四川农业大学学报》 CSCD 2004年第4期318-321,共4页
以酶蛋白表达量、酶活性和比活性为指标 ,从工程菌菌株、转化方法、诱导表达时间、诱导剂浓度 4个方面 ,对TaqDNA聚合酶制备技术进行了优化筛选。用JM 1 0 9菌株制备的总酶活力高于DH5α ,电击法的转化率高于热激法 ,用 1 0mmol/LIPT... 以酶蛋白表达量、酶活性和比活性为指标 ,从工程菌菌株、转化方法、诱导表达时间、诱导剂浓度 4个方面 ,对TaqDNA聚合酶制备技术进行了优化筛选。用JM 1 0 9菌株制备的总酶活力高于DH5α ,电击法的转化率高于热激法 ,用 1 0mmol/LIPTG诱导 1 2h ,酶蛋白表达量、酶活性和比活性均显著高于其他浓度和时间的处理。SDS PAGE电泳和PCR扩增结果表明 ,用优化技术制备的TaqDNA聚合酶 ,纯度、酶活力和特异性均达到分子生物学实验的要求 。 展开更多
关键词 taqdna聚合酶 制备 优化 E.COLI
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