以Has-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体建立稳定感染A549细胞株

目的用Has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒来建立稳定感染人非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞株,为进一步研究miR-100在NSCLC细胞中的机制奠定基础。方法用has-miR-100-3p抑制剂的重组慢病毒液,以其最适浓度感染A549细胞,获得稳定感染慢病毒的A549细胞株。荧光显微镜观察细胞感染效率,实时定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)和流式细胞术(FCM)分别检测稳定感染慢病毒的A549细胞株中miR-100的表达量和细胞株中绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果荧光显微镜下可见绿色荧光在细胞中表达。qRT-PCR检测结果显示,感染抑制剂的A549细胞中miR-100的表达量显著减少;流式细胞术检测感染组细胞中均有GFP的表达。结论获得了has-miR-100-3p抑制剂的慢病毒稳定感染的A549细胞株,该细胞株中内源性miR-100的表达下调。

miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-361-3p通过靶向S100A6抑制甲状腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的机制。方法运用逆转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测甲状腺癌组织、细胞中miR-361-3p表达水平;脂质体法将miR-con组(转染miRcon)、miR-361-3p组(转染miR-361-3p)、si-con组(转染si-con)、si-L型氨基酸转运蛋白(S100A6)组(转染si-S100A6)、miR-361-3p+pcDNA组(共转染miR-361-3p和pcDNA)、miR-361-3p+pcDNA-S100A6组(共转染miR-361-3p和pcDNA-S100A6)转染至CAL-62细胞。细胞计数试剂盒(CCK)8、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)法检测细胞增殖情况;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移侵袭能力;Western印迹检测S100A6蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果与癌旁组织、Nthy-ori 3-1相比,癌组织、癌细胞(TPC-1、SW579、CAL-62)中miR-361-3p表达均显著降低(P<0.05)。过表达miR-361-3p后,细胞增殖显著降低,EDU阳性率显著降低,划痕抑制率显著升高,迁移侵袭能力显著降低(P<0.05)。miR-361-3p显著抑制野生型S100A6细胞的荧光活性,并负向调控S100A6蛋白,二者在癌组织中表达呈显著负相关(r=-0.627,P<0.05)。敲减S100A6具有与过表达miR-361-3p相似的作用,过表达S100A6部分逆转miR-361-3p增殖、迁移侵袭抑制作用。结论miR-361-3p可抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移侵袭,产生这种作用的机制与靶向S100A6有关。

has-miR-100-5p靶向含7A的锌指和BTB结构域是绝经后骨质疏松的潜在靶标

背景:miRNAs在骨质疏松症的发病机制中起重要作用,因此可以成为重要的治疗靶点。其中,靶向miR-100-5p调控轴促进成骨细胞分化是骨质疏松的潜在治疗靶标。目的:探讨has-miR-100-5p和has-miR-101-3p在绝经后骨质疏松中的靶向调控作用。方法:比较GSE56814和GSE56815数据中高骨矿物质密度和低骨矿物质密度之间的差异表达基因,并进行富集分析。预测差异表达基因中has-miR-100-5p和has-miR-101-3p的靶向调控的基因。随后,收集40例绝经后骨质疏松患者和40例健康对照者的外周血样本,采用qRT-PCR法检测has-miR-100-5p和has-miR-101-3p以及靶标基因的差异表达。最后,通过双荧光素酶报告基因检测has-miR-100-5p对靶标基因3’UTR的结合作用。结果与结论:①富集分析显示,高骨矿物质密度和低骨矿物质密度之间鉴定到81个共同差异表达基因,显著富集于免疫、核因子κB复合物、肿瘤坏死因子信号通路等;②miRTargetbase数据库和miRTarget数据库预测显示,has-miR-100-5p和has-miR-101-3p均靶向调控含7A的锌指和BTB结构域(zinc finger and BTB domain containing,ZBTB7A);③qRT-PCR检测显示,与健康对照组比较,骨质疏松组has-miR-100-5p mRNA表达上调(P<0.001),has-miR-101-3p和ZBTB7A mRNA表达下调(P<0.001);双荧光素酶报告系统显示,野生型ZBTB7A-3’UTR共转染has-miR-100-5p后,293T细胞的荧光活性下调;④结果显示,has-miR-100-5p靶向ZBTB7A可能是绝经后骨质疏松症的潜在靶标。

has-miR-1-3p通过调控BDNF/TrkB信号通路抑制人滋养细胞增殖和侵袭

目的:探讨has-miR-1-3p对人滋养细胞HTR-8/SVneo增殖和侵袭的影响及其相关机制。方法:HTR-8/Svneo细胞分为两组,分别转染has-miR-1-3p模拟物作为实验组及无义miRNA为对照组,采用CCK8和Transwell实验分别检测对细胞增殖和侵袭能力的影响。通过在线分析网站预测has-miR-1-3p的靶基因,采用双荧光素酶报告实验和Western blot实验验证has-miR-1-3p对靶基因的调控。结果:与对照组相比,has-miR-1-3p模拟物显著降低了HTR-8/Svneo细胞增殖和侵袭能力;双荧光素酶报告实验和Western blot实验结果表明has-miR-1-3p能够靶向抑制BDNF的表达,抑制TrkB的磷酸化;上调BDNF可降低has-miR-1-3p对HTR-8/Svneo细胞增殖和侵袭能力的抑制。结论:has-miR-1-3p通过调控BDNF/TrkB信号通路抑制人滋养细胞增殖和侵袭。

不同炭化温度制备的C/0.5Al_2O_3-0.5P_2O_5-100SiO_2凝胶玻璃的光学性质

通过醇盐不完全水解制备了含有有机基团(O-C_2H_5)的0.5Al_2O_3-0.5P_2O_5-100SiO_2凝胶,在氮气中加热到300～700℃使其中的有机基团炭化,得到镶嵌在凝胶玻璃中不同尺寸的碳纳米颗粒.利用高分辨电镜、X射线衍射和喇曼光谱研究了碳纳米颗粒的结构,发现凝胶玻璃中的碳颗粒为非晶碳纳米颗粒.测试了它们的吸收光谱,发现了由于量子限域效应引起的吸收边的移动.在532um Nd:YAG激光的激发下镶嵌有碳纳米颗粒的凝胶玻璃有一强的室温发光,发光峰在586um左右.发光峰几乎不随碳纳米颗粒尺寸的变化而变化.这种发光产生于碳纳米颗粒的表面或碳颗粒和凝胶网络的界面.

miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-149-3p通过靶向S100A4抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭行为及其作用机制。方法:qP CR检测miR-149-3p的过表达情况; CCK-8细胞增殖实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞的增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测miR-149-3p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与S100A4的相互作用; Transwell侵袭实验检测S100A4的异位表达逆转miR-149-3p的抗肿瘤作用。结果:miR-149-3p过表达显著抑制培养的膀胱癌细胞48小时的生长能力;过表达miR-149-3p后在膀胱癌细胞中具有抗迁移和侵袭作用; miR-149-3p能与S100A4的3'UTR特异性结合,调控S100A4的表达活性; S100A4的过表达可以逆转由miR-149-3p引起的细胞迁移和侵袭能力的抑制。结论:miR-149-3p在膀胱癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节S100A4的表达影响膀胱癌细胞的增殖和迁移。

miR-100-5p通过靶向FGFR3抑制非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭和糖酵解

目的 探究miR-100-5p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭和糖酵解的影响及作用机制。方法 收集NSCLC患者手术切除的癌组织和癌旁组织60对,RT-qPCR检测组织和细胞中miR-100-5p的表达,利用Lipofectamine 2000将miR-NC、miR-100-5p mimic、miR-100-5p inhibitor、pc-NC、pc-FGFR3质粒分别或联合转染入H1650细胞,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,相应试剂盒检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成和ATP含量,Seahorse XF糖酵解应激测试试剂盒和Seahorse XF细胞线粒体应激测试试剂盒检测细胞外酸化率(ECAR)和细胞耗氧率(OCR),双荧光素酶实验检测靶向关系,蛋白印迹法检测FGFR3蛋白表达水平。结果 miR-100-5p表达与NSCLC患者的性别、年龄和病理类型无关(P>0.05),而与吸烟史、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05)。miR-100-5p在NSCLC组织和细胞中低表达。与对照组相比,miR-100-5p mimic组划痕闭合率显著较低,侵袭细胞数目显著较少,葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较低,OCR显著较高(P<0.01),miR-100-5p inhibitor组划痕闭合率显著较高,侵袭细胞数目显著较多,葡萄糖摄取量、乳酸产生量、ATP含量及ECAR显著较高,OCR显著较低(P<0.01)。miR-100-5p靶向下调FGFR3。共转染pc-FGFR3可逆转miR-100-5p过表达对NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解的抑制作用(P<0.01)。结论 miR-100-5p通过靶向FGFR3 抑制NSCLC细胞迁移、侵袭和糖酵解。

布鲁氏菌侵染过程中has-miR-5196-3p对炎症小体的调控作用

试验旨在研究miRNA分子has-miR-5196-3p在布鲁氏菌侵染THP1细胞过程中对NOD样受体蛋白3炎症小体(NLRP3)的调控作用。运用TargetScan、MiRDB等生物信息学预测网站预测has-miR-5196-3p和NLRP3-3′UTR的结合位点,构建其野生型及突变型双荧光素酶报告载体,分别与has-miR-5196-3p mimics及阴性对照共转染293T细胞,通过双荧光素酶报告系统检测各组相对荧光素酶活性的变化,验证has-miR-5196-3p和NLRP3-3′UTR的靶向关系;布鲁氏菌侵染THP1细胞,实时荧光定量PCR检测NLRP3、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase1)及has-miR-5196-3p mRNA的表达情况,Western blotting检测NLRP3和caspase1蛋白表达水平;将has-miR-5196-3p mimics、has-miR-5196-3p inhibitor及阴性对照转染至THP1细胞,实时荧光定量PCR及Western blotting检测NLRP3和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase1)的表达水平。结果显示,试验成功构建含有NLRP3-3′UTR的野生型及突变型双荧光素酶报告载体;has-miR-5196-3p mimics极显著降低pmirGLO-NLRP3-3′UTR-wt的相对荧光素酶活性(P<0.01);布鲁氏菌侵染THP1细胞后,NLRP3炎症小体被激活,而has-miR-5196-3p无明显变化(P>0.05);has-miR-5196-3p mimics能显著抑制NLRP3的表达(P<0.05),而has-miR-5196-3p inhibitor则相反。结果表明,miRNA分子has-miR-5196-3p可与NLRP3-3′UTR结合并抑制其表达,布鲁氏菌侵染THP1细胞过程中通过has-miR-5196-3p靶向负调节NLRP3炎症小体的表达及炎症的发生。

miR-325-3p通过靶向调控S100B对帕金森病模型细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究miR-325-3p对帕金森病(PD)模型细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法用100μmol/L的1-甲基-4-苯基吡啶阳离子(MPP+)诱导人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞建立PD模型,qRT-PCR检测MPP+诱导的SK-N-SH细胞中S100B mRNA和miR-325-3p的表达,Western印迹检测S100B、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase3)蛋白表达,试剂盒检测检测细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-325-3p与S100B的调控关系。结果与Con组相比,MPP+组诱导的SK-N-SH细胞中S100B mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-325-3p表达量显著下降(P<0.05);过表达miR-325-3p和干扰S100B表达均可减轻MPP+诱导的SK-N-SH细胞氧化损伤,抑制细胞凋亡;miR-325-3p靶向负调控S100B的表达;过表达S100B逆转了过表达miR-325-3p对MPP+诱导的SK-N-SH细胞氧化损伤和凋亡的作用。结论miR-325-3p通过靶向抑制S100B表达减轻MPP+诱导的SK-N-SH细胞损伤,抑制细胞凋亡。miR-325-3p可能是成为PD的分子靶点。

长链非编码RNA LINC01116靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤进程

目的观察脑胶质瘤细胞中长链非编码RNA LINC01116表达变化及shRNA转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,同时探究LINC01116可能参与的调节方式。方法取神经胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172细胞及正常星形胶质细胞(NHA),采用Real TimePCR法检测LINC01116表达。随后胶质瘤细胞分别加入或不加入sh-RNA转染,CCK-8实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测LINC01116可能的调节方式,并采用双荧光素酶报告基因验证RNALINC01116与has-miR-4693-3P的调控作用。结果LINC01116在胶质瘤细胞中高表达,其抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和胶质瘤侵袭。CCK8实验显示,sh-LINC01116处理的胶质瘤细胞存活率显著低于未转染的(P<0.05)。细胞划痕实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.01)。Transwell实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞穿膜细胞数明显低于对照组(P<0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示LINC01116k可靶向调控has-miR-4693-3P。结论胶质瘤多种细胞中LINC01116表达升高,shRNA转染能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力,同时LINC01116可靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤的进程。

miR-206-3p靶向调控S100A9对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨miR-206-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及分子机制。方法实验设置正常对照(Con)组、H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-206-3p组、H/R+si-NC组、H/R+si-S100A9组、H/R+miR-206-3p+pcDNA组、H/R+miR-206-3p+pcDNA-S100A9组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-206-3p和S100A9 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测S100钙结合蛋白A9(S100A9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;采用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测细胞SOD、GSH-Px活性和MDA含量;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光素酶报告实验检测miR-206-3p对S100A9的靶向调控。结果H/R诱导的心肌细胞中miR-206-3p低表达,S100A9高表达,MDA含量明显升高,SOD、GSH-Px活性明显降低,细胞凋亡率明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-206-3p或抑制S100A9表达,MDA含量明显降低,SOD、GSH-Px活性明显升高,细胞凋亡率明显降低,Bcl-2蛋白表达水平明显升高,Bax蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-206-3p靶向调控S100A9的表达;上调S100A9表达逆转了miR-206-3p过表达对H/R诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论过表达miR-206-3p通过靶向下调S100A9抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,miR-206-3p对H/R诱导的心肌细胞损伤具有保护作用。

基于重度抑郁症患者血清中miR-221-3p表达的相关研究

目的检测重度抑郁症患者血清中微小RNA-221-3p(miR-221-3p)的表达,分析其临床意义,探讨miR-221-3p与脑源性神经营养因子(BDNF)、人神经营养因子4(NT-4)、S-100B蛋白(S-100B)和超氧化物歧化酶(SOD)的关系,以及血清与脑脊液中miR-221-3p表达的一致性。方法选择重度抑郁症患者59例作为观察组,留取正常血清标本,选择正常成人血清标本59例作为对照组。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测两组中miR-221-3p的表达,应用酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测观察组中BDNF、S100B的表达,应用黄嘌呤氧化酶法检测血清中SOD的表达,应用Western Blot检测血清中NT-4的表达。对重度抑郁症中39例患者抽取脑脊液,检测脑脊液中miR-221-3p的表达。结果两组中miR-221-3p的表达差别有统计学意义(P<0.05),miR-221-3p在有无精神障碍家族史亚组中的差别有统计学意义(P<0.05)。miR-221-3p与BDNF(r=-0.51,P=0.036)、miR-221-3p与SOD(r=-0.57,P=0.013)、miR-221-3p与NT-4(r=-0.62,P=0.009)呈负相关,miR-221-3p与S-100B(r=0.59,P=0.014)呈正相关。miR-221-3p在血清和脑脊液中的表达呈正相关(r=0.72,P=0.001)。结论重度抑郁症患者血清miR-221-3p的异常表达参与病变的形成和进展,miR-221-3p可能通过对神经营养因子、损伤因子和应激指标的调控发挥作用。脑脊液中miR-221-3p的表达与血清中具有一致性。

抑制microRNA-202-3p表达促进滑膜间充质干细胞软骨分化

目的:探究microRNA-202-3p(miR-202-3p)对滑膜间充质干细胞(SMSCs)软骨分化能力的影响。方法:从骨关节炎(OA)患者手术切除的滑膜组织标本中分离培养SMSCs,分别以Has-miR-202-3p inhibitor和Has-miR-202-3p inhibitor negative control(NC)转染第3代SMSCs,分别设为实验组和对照组,培养7 d内,检测两组细胞增殖曲线;培养21 d后,组织学观察两组成软骨能力;qRT-PCR检测两组成软骨分化后细胞的软骨特异性基因表达。结果:滑膜间充质干细胞从第3天开始进入快速增殖期,CCK-8实验和亚甲蓝染色显示实验组细胞增殖数量明显多于对照组;成软骨诱导21 d后,实验组软骨特异性基因Ⅱ型胶原蛋白、蛋白多糖、Sox9基因表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论:抑制microRNA-202-3p表达可促进滑膜间充质干细胞增殖和向软骨细胞分化。

超声微泡介导miR-187-3p调节S100A4对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的 探究超声微泡(UM)介导miR-187-3p对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR检测不同乳腺细胞中miR-187-3p表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-187-3p与S100钙结合蛋白A4(S100A4)的靶向关系。使用miR-187-3p mimic、miR-NC或UM介导的miR-187-3p mimic、miR-NC处理MDA-MB-231细胞,并过表达S100A4进行回复实验,采用qRT-PCR、Westernblot检测细胞中miR-187-3p、S100A4mRNA和蛋白表达水平,CCK-8、EdU染色检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 miR-187-3p在人乳腺癌细胞中低表达,其中MDA-MB-231细胞中miR-187-3p表达水平变化最为明显。过表达miR-187-3p可抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭;UM介导的miR-187-3p进一步增强了miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用;经验证,MDA-MB-231细胞中miR-187-3p与S100A4存在靶向调控关系,且过表达S100A4可部分减弱UM介导的miR-187-3p对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 UM介导的miR-187-3p可能通过负靶向调节S100A4抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

Has-miR-31-3p表达与K-ras基因野生型转移性结直肠癌患者抗EGFR治疗的无进展生存期有关

目前抗EGFR治疗只应用于KRAS野生型转移性结直肠患者，然在这些患者的获益率只有不到40％。因而寻找更多更精确的生物标志物用于筛选出最适宜的治疗患者显得尤为迫切。为此，多中心协作开展了一项研究，该研究目的是筛选出能预测KRAS野生型转移性结直肠患者抗EGFR治疗疗效的miRNAs。该研究分析了87例mCRC患者miRNA表达谱，这些患者均对化疗耐受而选用抗EGFR治疗。其中包括回顾性的33例新鲜冷冻组织标本、35例福尔马林固定石蜡包埋标本，以及19例前瞻性研究获得新鲜冻藏标本。之后对前瞻性研究中转移性结直肠癌抗EGFR治疗患者中19例新鲜冻存和26例福尔马林固定石蜡标本（共45例）进行独立验证。

hsa-miR-221-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-221-3p进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-221-3p的靶基因、基因功能及信号通路。方法利用UCSC和miRBase在线数据库对hsa-miR-221-3p进行基因定位、分析其序列保守性,然后利用miGator v3.0数据库分析hsa-miR-221-3p在人类不同疾病和组织器官中的表达情况,利用Target Scan、miRTarBase和miRDB数据库交叉预测hsa-miR-221-3p的靶基因,使用在线软件Venny2.1对上述3个数据集绘制维恩图推导得到交集靶基因,再将预测的靶基因利用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号转导通路富集分析,采用String11.0数据库构建交集靶基因编码的蛋白间相互作用(PPI)网络图,进行编码蛋白间相互作用分析。结果hsa-miR-221-3p基因成熟序列高度保守,在肺部组织中富集表达;hsa-miR-221-3p的34种关键靶基因存在细胞多个组分中,执行多种分子功能,参与多种生物过程;这些靶基因富集于癌症和PI3K-Akt信号通路,编码的蛋白间形成了复杂的网络图。结论hsa-miR-221-3p在多种肿瘤组织和细胞中异常表达,通过靶基因对多种癌症发挥致癌或抑癌作用,以致癌作用为主,其可作为肿瘤潜在的研究标记物和治疗靶标。

转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)促进缺氧诱导的肾小管间皮细胞转分化

目的研究长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(MALAT1)参与缺氧诱导的肾小管上皮细胞上皮间质转分化(EMT)调控的机制。方法 HK-2肾小管上皮细胞缺氧处理0、12、24、48、72 h,实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平。HK-2细胞分别感染特异性lncRNA慢病毒和miRNA慢病毒下调MALAT1和miR-100-3p,采用实时定量PCR检测MALAT1 mRNA和miR-100-3p水平,免疫荧光细胞化学染色检测上皮钙黏素(ECD)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅳ型胶原蛋白α1链(COL4A1)的表达。构建单侧输尿管梗阻(UUO)动物模型,设置单侧输尿管未结扎组(对照组)、结扎7 d组(UUO7 d组)、结扎3周组(UUO 3周组)、腺相关病毒(AAV)组。在UUO动物模型中,采用AAV感染下调MALAT1水平后,采用HE和Masson染色检测各组肾组织病变情况,采用免疫组织化学染色检测肾组织ECD和α-SMA的表达。结果在缺氧诱导的HK-2细胞中,随缺氧刺激时间延长,MALAT1表达逐渐升高,而miR-100-3p表达逐渐减低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,慢病毒感染下调MALAT1水平,miR-100-3p水平升高,同时ECD表达增加、COL4A1和α-SMA表达降低;缺氧诱导HK-2细胞72 h后,转染下调miR-100-3p水平,MALAT1水平无显著变化,miR-100-3p水平降低,ECD表达降低,COL4A1和α-SMA表达增加;体内实验:与对照组相比,UUO动物模型组MALAT1表达显著升高,而miR-100-3p表达明显降低; AAV组与3周组比较,ECD表达显著升高,而α-SMA表达显著降低。结论 MALAT1可通过负向调控miR-100-3p,进而促进COL4A1表达,促进缺氧诱导的HK-2细胞EMT,并且可以促进UUO肾病小鼠肾脏纤维化。