伊曲康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A2、3A4活性的作用

目的观察伊曲康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A23、A4活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据。方法采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和伊曲康唑处理组。处理组分别加入0.1、0.2、1.0、2.0、10.0、20.0 mg.L-1的伊曲康唑1mL,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶1A2和3A4的相应底物(分别为非那西丁和睾酮)再孵育20min。反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为对乙酰氨基酚与6β-羟基睾酮)的生成量代表1A2和3A4的活性。结果细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比各处理组与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05),而同工酶3A4的相对活性百分比随伊曲康唑质量浓度增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05)。细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)伊曲康唑的质量浓度为0.16 mg.L-1。结论伊曲康唑在临床应用血药质量浓度范围内,对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶1A2的活性无显著影响,然而对细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用。

紫外线照射对成人原代肝细胞免疫原性及蛋白合成性的影响

背景受体的免疫排斥反应是影响肝细胞移植疗效的主要因素,而紫外线可以引起免疫抑制的作用;寻找适当的紫外线照射强度,既能降低肝细胞免疫原性,又能避免紫外线对肝细胞的过度损伤,从而较好保存肝细胞的稳定性和细胞合成功能.目的探讨紫外线照射降低成人原代肝细胞免疫原性和对细胞生物活性的影响.方法取成人良性病变肝组织以胶原酶灌注分离肝细胞,分为对照组(0 J/m^2)及200、350、550和750 J/m^24个不同紫外线照射强度的实验组.台盼蓝拒染法和CCK-8法检测细胞活率;JC-1检测线粒体膜电位变化;混合淋巴细胞肝细胞培养(mixed lymphocyte hepatocyte culture,MLHC)检测受体T细胞增殖;并检测培养上清液中血白蛋白(serum albumin,ALB)、乳酸脱氢酶水平.结果(1)新分离的肝细胞活率大于90%;(2)CCK-8检测发现实验组200 J/m^2照射强度的肝细胞活力最高,与对照组无明显区别,明显高于其他实验组;(3)荧光显微镜观察到对照组和200 J/m^2实验组在JC-1液作用下肝细胞以红色荧光为主,随着照射强度的增大,而呈现棕色(350 J/m^2)、黄绿色(550 J/m^2)、绿色(750 J/m^2)的变化.酶标检测显示200 J/m^2组OD值最高,与对照组无显著差异,说明肝细胞膜电位稳定,细胞活性最好;随着照射强度增大,细胞膜电位随之下降,差异显著;(4)MLHC检测显示200 J/m^2照射组的肝细胞引起淋巴细胞增殖能力较对照组显著降低,而350 J/m^2、550 J/m^2、750 J/m^2组则有所增强;(5)生化检测提示200 J/m^2组的ALB水平最高,与对照组无差别.培养第3天肝细胞的分泌和合成功能处于最佳状态.结论强度200 J/m^2紫外线照射可降低成人原代肝细胞引起T细胞增殖能力;肝细胞的活力和合成功能得到较好保留.

药物对人肝CYP450酶诱导和抑制作用体外评价体系的建立与验证

建立药物对CYP450酶诱导与抑制作用的体外评价方法并进行验证。LC-MS/MS法测定人肝微粒体CYP450酶7种主要亚型的8个底物代谢产物;在优化的温孵条件下,底物法测定人肝微粒体CYP450酶的活性;应用已知抑制剂对所建立的温孵体系进行验证。LC-MS/MS法测定人肝细胞CYP450酶3种主要亚型的底物代谢产物;底物法测定人原代肝细胞CYP450酶的活性,同时收集温孵后的人肝细胞,应用Taqman荧光探针法测定主要亚型m RNA的表达量;应用已知诱导剂对所建立的温孵体系进行验证。建立的LC-MS/MS分析方法符合生物分析要求;已知抑制剂和诱导剂在本实验温孵体系下均表现出明显的抑制作用或诱导作用。建立的实验方法准确、可靠,可用于体外评价药物对CYP450酶的诱导或抑制作用。