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白背飞虱Hsp70基因的克隆及其对非生物胁迫的响应
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作者 许铁龙 周操 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第9期2069-2076,共8页
【目的】探明热休克蛋白Hsp70基因在白背飞虱适应非生物[杀虫剂、高温/低温和紫外线A(UV-A)]胁迫中的作用,为白背飞虱绿色防控提供参考。【方法】基于白背飞虱的基因组和转录组数据,克隆白背飞虱热休克蛋白Hsp70基因并对其进行鉴定,同... 【目的】探明热休克蛋白Hsp70基因在白背飞虱适应非生物[杀虫剂、高温/低温和紫外线A(UV-A)]胁迫中的作用,为白背飞虱绿色防控提供参考。【方法】基于白背飞虱的基因组和转录组数据,克隆白背飞虱热休克蛋白Hsp70基因并对其进行鉴定,同时采用RT-qPCR测定其在杀虫剂、高温/低温和UV-A胁迫下的转录水平。【结果】克隆获得1个Hsp70基因,命名为SfHsp70-1,其全长序列为2322 bp,开放阅读框为2001 bp,编码666个氨基酸残基,分子量为72.91 kDa,理论等电点为5.11。SfHsp70-1氨基酸序列中包含3个Hsp70家族蛋白的保守结构域,且在C端具有内质网Hsp70的保守序列“HDEL”。噻虫嗪亚致死浓度表现出显著的剂量效应,LC_(10)胁迫能够诱导SfHsp70-1基因的转录水平显著升高,为对照(丙酮处理)的2.59倍;而LC_(25)胁迫对SfHsp70-1基因的转录水平无显著影响。10℃(30 min)、20℃(30,60 min)和40℃(10,30,60 min)胁迫均能诱导SfHsp70-1基因的转录水平显著提高,依次较对照(25℃)显著提高77.24%、62.00%、85.89%、138.96%、75.67%和61.10%。UV-A(300μW/cm~2)胁迫显著抑制SfHsp70-1基因的转录水平,分别较对照(照射0 min)显著降低87.85%、88.74%、91.91%、89.78%、93.04%和91.16%,且随处理时间延长其表达水平呈逐渐降低趋势。【结论】SfHsp70-1基因的过表达有助于白背飞虱对噻虫嗪和高温/低温胁迫的适应。研究结果可为进一步明确Hsp70基因在白背飞虱适应非生物胁迫中的作用奠定基础,并为制订白背飞虱绿色防控措施提供参考。 展开更多
关键词 白背飞虱 热休克蛋白 hsp70基因 非生物胁迫
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脊尾白虾热休克蛋白HSP70基因的克隆及其表达分析 被引量:28
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作者 韩俊英 李健 +3 位作者 李吉涛 常志强 陈萍 李华 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1130-1138,共9页
克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。... 克隆了脊尾白虾热休克蛋白基因全长cDNA,并进行了序列分析。该基因由2 250 bp的碱基组成,开放阅读框长1 959 bp,编码由652个氨基酸组成的蛋白,基因两翼分别存在83 bp(5'端)和208 bp(3'端)的非翻译区,将该基因命名为Ec-HSP70。与其它物种HSP70s氨基酸序列进行同源性比较发现,与甲壳动物的同源性都在90%以上,表明该蛋白属于热休克蛋白HSP70家族。聚类分析表明,脊尾白虾热休克蛋白氨基酸序列与中国明对虾和凡纳滨对虾紧密聚为一支,之后聚类顺序依次为斑节对虾、日本囊对虾、刀额新对虾等。通过荧光定量RT-PCR对该基因在肝胰腺、肌肉的表达分析表明,温度、pH和氨氮胁迫都可以引起该基因的高表达,而且肝胰腺中的高表达时间相对肌肉中出现的较早。试验结果表明,温度、pH和氨氮胁迫对脊尾白虾HSP70基因表达有一定的诱导效果,但胁迫的时间过长则抑制其表达,肝胰腺对胁迫比肌肉较敏感。 展开更多
关键词 脊尾白虾 热休克蛋白70 基因克隆 表达分析
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朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因TCHSP70-4的克隆与表达 被引量:6
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作者 李明 卢文才 +3 位作者 冯宏祖 袁亮 王进军 何林 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1235-1243,共9页
为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长21... 为了研究朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)热激蛋白HSP70的表达与其适应高温和低温胁迫的关系,我们利用物种的同源性及RACE技术,获得朱砂叶螨热激蛋白HSP70基因1个,命名为TCHSP70-4(GenBank登录号为EU977182)。该基因全长2182bp,包含1959bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,理论分子量为70.9kDa,等电点为5.4,含有HSP70家族高度保守的基序。运用real-time PCR分析冷激(4℃)和热激(40℃)1h后TCHSP70-4在朱砂叶螨体内的表达量。结果显示冷激后TCHSP70-4表达量明显下降,而热激后TCHSP70-4表达量却明显上升。这些结果一方面表明该基因属于诱导型HSP70基因,另一方面揭示了朱砂叶螨分别受到冷和热胁迫后体内TCHSP70-4的表达及所起的保护作用是不同的。 展开更多
关键词 朱砂叶螨 热激蛋白 hsp70基因 克隆 表达 温度胁迫 实时定量PCR
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维氏气单胞菌感染对西伯利亚鲟血清指标和hsp70基因表达的影响 被引量:7
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作者 田照辉 徐绍刚 +3 位作者 朱华 胡红霞 王巍 董颖 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-12,共7页
为研究西伯利亚鲟Acipenser baerii在维氏气单胞菌Aeromonas veronii感染过程中的生理免疫反应,进行了维氏气单胞菌攻毒试验,将体质量为(260.2±37.8)g的西伯利亚鲟从背部肌肉注射菌液浓度为2.0×107cfu/mL的维氏气单胞菌,注射... 为研究西伯利亚鲟Acipenser baerii在维氏气单胞菌Aeromonas veronii感染过程中的生理免疫反应,进行了维氏气单胞菌攻毒试验,将体质量为(260.2±37.8)g的西伯利亚鲟从背部肌肉注射菌液浓度为2.0×107cfu/mL的维氏气单胞菌,注射后40h后开始死亡,62h后停止死亡,累积死亡率为46.7%。结果表明:40h对照组和53h处理正常鱼组中的血清皮质醇含量最低,与不再出现死亡后的处理组和对照组无显著性差异(P>0.05),与处理患病鱼各组有显著性差异(P<0.05);62h处理组血清超氧化物歧化酶(SOD)活力最低,与40h对照组、53h处理组、53h处理正常鱼组、93h对照组、93h处理组有显著性差异(P<0.05);93h处理组血清丙二醛(MDA)含量最低,与40h处理组、44h处理组、53h处理正常鱼组、62h处理组有显著性差异(P<0.05),其他各组之间无显著性差异(P>0.05);各处理组血清溶菌酶(LZM)活力从44h开始升高,直到62h,各个处理组均显著高于40h的处理组和对照组以及93h和168h的对照组和处理组(P<0.05);实时定量了肝、鳃、脾、肠组织中hsp70基因表达的变化。研究表明:西伯利亚鲟感染维氏气单胞菌后,血清皮质醇含量和溶菌酶活力升高可作为机体免疫状态的参考指标;热休克蛋白hsp70基因的诱导表达较血清指标变化更为灵敏,hsp70基因在鳃组织最先有较高的诱导表达。 展开更多
关键词 西伯利亚鲟 维氏气单胞菌 细菌感染 血清指标 热休克蛋白hsp70基因
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瓜实蝇热激蛋白基因hsp70的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 姜建军 王凤英 +3 位作者 黄立飞 陈红松 李磊 杨朗 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期800-805,共6页
【目的】克隆分析瓜实蝇热激蛋白hsp70基因序列特征,为进一步研究瓜实蝇的热适应性机制及制定综合防治策略奠定基础。【方法】根据NCBI数据库中已报道的昆虫hsp70基因保守序列,设计合成扩增瓜实蝇hsp70基因部分片段的简并引物,并利用RAC... 【目的】克隆分析瓜实蝇热激蛋白hsp70基因序列特征,为进一步研究瓜实蝇的热适应性机制及制定综合防治策略奠定基础。【方法】根据NCBI数据库中已报道的昆虫hsp70基因保守序列,设计合成扩增瓜实蝇hsp70基因部分片段的简并引物,并利用RACE-PCR扩增其全长序列。【结果】克隆获得瓜实蝇hsp70基因c DNA全长序列(获取号:KM112021)2271 bp,含1911 bp的开放阅读框,编码636个氨基酸,具有真核生物hsp70基因家族的3个明显基序标签,同时在C-末端具有EEVD基序,推测其属于胞质型热激蛋白。BLAST分析结果表明该序列与双翅目实蝇科昆虫hsp70基因高度相似,最高相似度达91%。氨基酸序列系统发育分析结果显示,瓜实蝇与双翅目实蝇科昆虫聚类为一个分支,证实hsp70基因的高度保守。【结论】瓜实蝇hsp70基因具有真核生物hsp70基因家族的特征,序列表现为高度的保守性,可作为今后研究瓜实蝇抗逆性机制的一个参数指标。 展开更多
关键词 瓜实蝇 热激蛋白70基因 RACE-PCR 序列分析
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热休克蛋白70(hsp70)基因对利什曼原虫中国分离株的系统发育分析 被引量:4
6
作者 张春莹 黄玉霞 +2 位作者 袁余 胡孝素 马莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期163-168,190,共7页
目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并... 目的选用hsp70基因探讨我国各疫区不同宿主利什曼原虫的种系发育关系。方法采用PCR方法扩增分离自中国各疫区不同宿主的利什曼原虫之热休克蛋白70(hsp70)基因,将扩增的目的片段纯化后测序。使用MEGA 5.0软件对测序产物进行多序列比对并构建系统发育树,同时与国外利什曼原虫分离株的hsp70序列共同分析,观察利什曼原虫中国分离株在世界范围利什曼原虫的系统发育和分子进化中的地位。结果中国各流行疫区利什曼原虫均获得约1 300bp长度的hsp70基因片段,存在丰富的多态位点。中国23株利什曼原虫经hsp70基因分型聚集为四群,其中人来源的原虫分离株均在A群,为杜氏利什曼原虫(L.donovani),并分为杜氏利什曼原虫指名亚种(L.donovani)和杜氏利什曼原虫婴儿亚种(L.infantum)两个亚支;分离自新疆沙鼠或白蛉的6株利什曼原虫聚在B群,为都兰利什曼原虫(L.turanica);分离自新疆白蛉和内蒙古沙鼠的两株利什曼原虫为C群沙鼠利什曼原虫(L.gerbilli);分离自内蒙古蜥蜴和新疆白蛉的两株原虫为D群蜥蜴利什曼原虫(Sauroleishmania)。结论利什曼原虫中国分离株属于利什曼原虫亚属的不同种和蜥蜴利什曼原虫亚属,我国利什曼原虫分离株的种系发育复杂多样。 展开更多
关键词 利什曼原虫 种系发育 热休克蛋白70(hsp70)基因
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2个柞蚕诱导型HSP70基因的克隆及热应激表达特征 被引量:5
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作者 刘微 李慧君 +6 位作者 王勇 孙影 李喜升 黄伶 肖红 姜义仁 秦利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期83-91,共9页
研究柞蚕热休克蛋白基因在高温胁迫下的表达变化,有助于从分子水平解析柞蚕对高温的应激反应机制。采用RTPCR技术从柞蚕蛹脂肪体组织中克隆了2个热休克蛋白70基因Ap HSP70-1(Gen Bank登录号:KR821069)、Ap HSP70-2(GenBank登录号:KT2254... 研究柞蚕热休克蛋白基因在高温胁迫下的表达变化,有助于从分子水平解析柞蚕对高温的应激反应机制。采用RTPCR技术从柞蚕蛹脂肪体组织中克隆了2个热休克蛋白70基因Ap HSP70-1(Gen Bank登录号:KR821069)、Ap HSP70-2(GenBank登录号:KT225460),2个基因的开放阅读框(ORF)均为1 905 bp,编码634个氨基酸,蛋白质具有细胞质特征基序,推测为诱导型热休克蛋白,其序列N端为高度保守的ATPase功能域,C端为多肽结合功能域,是差异位点的主要分布区域。Ap HSP70-1和Ap HSP70-2蛋白之间的序列相似度为86.91%,二者与Ap HSC70蛋白序列的相似度分别为71.82%和70.14%。半定量RT-PCR检测显示,高温(43℃)诱导后柞蚕蛹脂肪体组织中Ap HSP70-1、Ap HSP70-2基因的表达量明显升高,而Ap HSC70基因的表达量变化不大;相对于Ap HSP70-2,正常环境下Ap HSP70-1在柞蚕蛹各组织中几乎不表达,但热激后被诱导表达。qRT-PCR检测高温(43℃)诱导处理后柞蚕蛹脂肪体组织中的Ap HSP70-2表达量上调了6.32倍,Ap HSP70-1的表达量上调了4.18倍。推测克隆的2个Ap HSP70基因在柞蚕应对热激胁迫的反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 柞蚕 热休克蛋白70 基因克隆 序列结构 高温 诱导表达
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拟南芥热激蛋白HSP70基因片段克隆实验体系的建立 被引量:1
8
作者 郭丽红 杨晓虹 +1 位作者 刘开庆 袁燕 《昆明学院学报》 2009年第6期46-48,共3页
以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系.首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoR I酶切位点双链的人工接头... 以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系.首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoR I酶切位点双链的人工接头,通过EcoR I对其进行酶切.再与经过EcoR I酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置入到感受态大肠杆菌细胞中(即转化),并让这种细胞在含有Amp+/IPTG/X-Gal的LB培养基上生长.挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆. 展开更多
关键词 拟南芥 热激蛋白hsp70 基因片段 克隆
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新基因MAGE-n表位肽与人HSP70融合基因的构建及表达纯化 被引量:1
9
作者 张秀敏 史琪琪 +6 位作者 李增山 叶菁 王军伟 林慧 曲萍 胡沛臻 隋延仿 《中国医药生物技术》 CSCD 2010年第4期257-260,共4页
目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGI... 目的构建MAGE-n159-167(QLVFGIEVV)表位肽与人热休克蛋白70(HSP70)的融合基因并表达纯化。方法应用PCR方法,将QLVFGIEVV的cDNA序列融合到人HSP70基因的3'端,将融合基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组质粒pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70;采用双酶切(Sac Ⅰ、Hind Ⅲ)及PCR鉴定后测序;转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),用IPTG诱导表达,Ni Sepharose6FF亲和填料进行分离纯化,SDS-PAGE检测表达及纯化结果。结果经PCR扩增成功获得约2.0kb的目的片段,重组体经Sac Ⅰ、Hind Ⅲ双酶切分析及PCR结果与预期结果一致,测序正确。转入重组质粒的E.coli BL21(DE3)经IPTG诱导、SDS-PAGE分析得到71kD左右的目的蛋白条带。用Ni Sepharose6FF亲和填料分离纯化,获得了纯化的融合蛋白。结论成功构建原核表达载体pET-28a(+)QLVFGIEVV-HSP70,并获得纯化的融合蛋白,为基于MAGE-n的肿瘤疫苗研制提供良好的抗原奠定了实验基础。 展开更多
关键词 hsp70热休克蛋白类 基因融合 癌症疫苗 MAGE-N 表位肽 原核表达
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HSP70-2基因多态性与糖尿病肾病易感性的关系 被引量:1
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作者 林新伟 杨阳 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期898-901,共4页
目的探讨HSP70-2(+1267A/G)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法收集河南省平顶山市152医院肾内科住院及行定期健康体检的人群资料,按照纳入与排除标准纳入研究对象共677例,其中2型糖尿病患者447例(糖尿病肾病组226例,糖尿病非肾病组... 目的探讨HSP70-2(+1267A/G)基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。方法收集河南省平顶山市152医院肾内科住院及行定期健康体检的人群资料,按照纳入与排除标准纳入研究对象共677例,其中2型糖尿病患者447例(糖尿病肾病组226例,糖尿病非肾病组221例),正常对照组230例。对研究对象进行一般情况问卷调查、体格检查及实验室生化指标检测,并采用PCR-RFLP技术分析HSP70-2基因(+1267A/G)多态性。结果糖尿病肾病组的HSP70-2基因G/G基因型频率高于糖尿病非肾病组和正常对照组,差异有统计学意义(χ2=8.123,P<0.01;χ2=11.651,P<0.01);糖尿病肾病组的G等位基因频率高于糖尿病非肾病组和正常对照组,差异有统计学意义(χ2=9.392,P<0.01,OR=1.782;χ2=11.971,P<0.01,OR=2.153)。G/G基因型携带者MALB/Cr和BMI水平高于A/A基因携带者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP70-2基因1267位点G/G基因型可能与糖尿病肾病及全身性肥胖易感性相关;G等位基因增加了携带者患糖尿病肾病的风险。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 hsp70热休克蛋白质类 多态性 单核苷酸
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冠心病患者HSP70-2+1267A/G多态性与高敏C反应蛋白水平的相关性研究 被引量:1
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作者 段成城 陈倩 +5 位作者 王方剑 江勇 潘小华 郑美梅 董丽妍 温武金 《心脑血管病防治》 2010年第4期267-269,共3页
Objective To explore the relationship between heat-shock protein 70-2 gene +1267A/G polymorphism(HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism) and serum level of high sensitivity C-reactive protein(Hs-CRP) in patients with coro... Objective To explore the relationship between heat-shock protein 70-2 gene +1267A/G polymorphism(HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism) and serum level of high sensitivity C-reactive protein(Hs-CRP) in patients with coronary artery disease(CAD).Methods Serum Hs-CRP level and HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism were detected in 185 patients with CAD.HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism was screened by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP).Results The genotype distribution of the HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism was as follows: AA was in 24 of 185 patients(12.97%),AG in 93 of 185 patients(50.27%) and GG in 68 of 185 patients(36.76%).Patients with GG、AG subtype had higher Hs-CRP levels compared with carriers of the AA subtype(4.5±1.8mg/L,3.2±1.2mg/L and 2.7±1.1mg/L,respectively,P<0.05).Among patients who had Hs-CRP >3mg/L,GG,and AG gene subtypes had higher percentage than A allele homozygotes(92.6%,74.2% and 45.8%,respectively.χ2=17.75,28.04,P<0.05).Conclusions This study indicated G allele of HSP70-2 gene +1267A/G polymorphism may be an independent risk factor in systemic inflammation with stable CAD. 展开更多
关键词 冠心病患者 冠状动脉粥样硬化斑块 蛋白水平 相关性 C反应 多态性 protein ARTERY
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虫草HSP70基因测序技术分析
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作者 陈贤 代永东 +2 位作者 虞泓 袁峰 杨德 《西部林业科学》 CAS 北大核心 2014年第4期15-20,共6页
基于冬虫夏草全基因组测序,对其HSP70基因测序技术进行分析,以5种虫草样本为试材,比较冬虫夏草HSP70基因整序列PCR测序技术与近缘种HSP70基因分段PCR测序技术两种方法适用性。结果表明,前者进程较短,效率较高,但仅适用于冬虫夏草材料;... 基于冬虫夏草全基因组测序,对其HSP70基因测序技术进行分析,以5种虫草样本为试材,比较冬虫夏草HSP70基因整序列PCR测序技术与近缘种HSP70基因分段PCR测序技术两种方法适用性。结果表明,前者进程较短,效率较高,但仅适用于冬虫夏草材料;而后者通用性较好,适用于虫草多物种的分析,但工作量较大。HSP70基因在冬虫夏草种内分化小于种间的分化,冬虫夏草种及其近缘种HSP70基因序列分析结果与Sung的虫草分类系统分类相吻合。 展开更多
关键词 热激蛋白 hsp70基因 PCR扩增 冬虫夏草
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融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效果
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作者 梅伟群 李晓雅 +6 位作者 王伟国 马炬明 季卫丹 胡慧珍 宋启哲 苏长青 吴孟超 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期257-262,共6页
目的:观察融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效应。方法:采用编码11个精氨酸(11R)的穿膜肽序列融合HSP70基因序列,构建重组腺病毒载体AdCMV-HSP70s、AdCMV-HSP70(无穿膜肽对照)和AdCMV-EGFV(空载体对照)。Western... 目的:观察融合穿膜肽的HSP70基因联合CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤的治疗效应。方法:采用编码11个精氨酸(11R)的穿膜肽序列融合HSP70基因序列,构建重组腺病毒载体AdCMV-HSP70s、AdCMV-HSP70(无穿膜肽对照)和AdCMV-EGFV(空载体对照)。Western blotting、ELISA法检测重组腺病毒介导的HSP70基因在胃癌SCG-7901细胞中的表达,MTT检测重组腺病毒感染后HSP70分泌性表达对胃癌细胞的抑制作用。裸鼠移植瘤模型的抗瘤实验检测HSP70基因联合CIK细胞对胃癌移植瘤的抗瘤效应。结果:与AdCMV-HSP70感染细胞比,AdCMV-HSP70s感染细胞的HSP70表达量明显增加[胃癌SGC-7901细胞:(360.72±20.89)vs(121.01±15.94)ng/ml,P<0.05;胃黏膜上皮GES-1细胞:(188.62±10.82)vs(135.00±13.96)ng/ml,P<0.05]。融合11R的HSP70蛋白能够穿膜并分泌到细胞外后对胃癌细胞产生一定的增殖抑制作用[MOI=100 pfu/cell时,细胞存活率(66.33±4.33)%vs(101.33±7.64)%,P<0.01]。AdCMV-HSP70s+CIK联合治疗对胃癌移植瘤的抑制率显著高于AdCMV-HSP70+CIK组[(66.5±7.3)%vs(43.6±5.6)%,P<0.05],该组移植瘤组织间质中CD3+T细胞浸润数量也明显多于后者。结论:融合穿膜肽可明显促进HSP70蛋白的表达和分泌,和CIK细胞联合治疗能增强抗瘤免疫效应,从而显著抑制裸鼠胃癌移植瘤。 展开更多
关键词 胃癌 热激蛋白 hsp70 穿膜肽 腺病毒 基因治疗
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多子小瓜虫HSP70基因ORF的克隆及表达分析
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作者 夏润林 潘厚军 +4 位作者 赵飞 方翔 石存斌 李华 吴淑勤 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期347-353,共7页
热激蛋白(HSP)是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫Ichthyophthirius multifiliis HSP70(Im HSP70)基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体... 热激蛋白(HSP)是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫Ichthyophthirius multifiliis HSP70(Im HSP70)基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体和包囊3个不同发育阶段的表达情况。结果表明:Im HSP70基因的ORF为1995 bp,预测编码为664 aa;Im HSP70蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规卷曲为主,空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域;与其他物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现,Im HSP70与螅状独缩虫Carchesium polypinum HSP70的同源性最高,为78.08%;Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫Tetrahymena thermophila、变藓棘毛虫Sterkiella histriomuscorum的HSP70聚在一个分支;3种温度下幼虫的HSP70表达量均最低,20℃和25℃时,HSP70基因在滋养体中的表达量显著高于幼虫和包囊(P<0.05),而30℃时,HSP70基因在包囊中的表达量显著高于滋养体和幼虫(P<0.05);30℃时HSP70基因在包囊中的表达量显著高于25℃(P<0.05)。研究表明,试验所用多子小瓜虫的HSP70基因在30℃时仍大量表达,且能感染试验鱼,推测该虫株为热带型多子小瓜虫,HSP70基因在多子小瓜虫对抗外界高温环境中可能发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 多子小瓜虫 热激蛋白70 (hsp70) 基因表达
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脑缺氧缺血损伤新生大鼠热休克蛋白70基因的表达研究 被引量:6
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作者 陈惠金 蒋明华 +4 位作者 钱龙华 周建德 周伟 周泽汉 吴圣楣 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 2000年第4期187-189,共3页
目的 对所建立的新生大鼠脑缺氧缺血 (HI)模型进行热休克蛋白 70基因的表达研究 ,评估检测该基因的表达能否作为缺氧缺血及其程度的有用标志。方法 应用自行研制的新生大鼠缺氧实验装置 ,建立新生大鼠脑缺氧缺血模型。应用竞争性RT PC... 目的 对所建立的新生大鼠脑缺氧缺血 (HI)模型进行热休克蛋白 70基因的表达研究 ,评估检测该基因的表达能否作为缺氧缺血及其程度的有用标志。方法 应用自行研制的新生大鼠缺氧实验装置 ,建立新生大鼠脑缺氧缺血模型。应用竞争性RT PCR方法对脑HI模型进行热休克蛋白 70基因表达的检测。结果 HI组在HI后 2h即观察到HSP70mRNA出现明显表达 ,48h达高峰 ,并在 72h内维持较高水平 ,HI后 7d表达明显下降 ,但仍高于正常水平。正常新生大鼠在相应各时段内 ,其HSP70mRNA的表达则极其微弱。结论 缺氧缺血诱导了HSP70基因的表达 ,检测HSP70基因可作为缺氧缺血及其程度的有用标志 。 展开更多
关键词 脑缺氧缺血损伤 热休克蛋白70 新生儿 动物模型
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PM_(2.5)对秀丽隐杆线虫的毒性效应 被引量:6
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作者 王云彪 侯晓丽 +1 位作者 武海涛 张世春 《城市环境与城市生态》 CAS CSCD 2012年第6期10-13,共4页
大气颗粒物PM2.5受到人们广泛关注,利用模式生物对PM2.5健康风险进行系统环境医学角度和生物监测实践的研究尚少。本文以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为材料,于2012年4月初在长春市典型生活区采集PM2.5进行毒理学试验。结果表... 大气颗粒物PM2.5受到人们广泛关注,利用模式生物对PM2.5健康风险进行系统环境医学角度和生物监测实践的研究尚少。本文以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为材料,于2012年4月初在长春市典型生活区采集PM2.5进行毒理学试验。结果表明,热休克蛋白基因hsp70缺失型突变体线虫受PM2.5影响较大,头摆、咽动和繁殖率等指标与胁迫强度存在较好的线性关系,PM2.5的毒性效应具有遗传特征,可影响子代幼体的发育。hsp70在机体对PM2.5的胁迫响应中作用明显,秀丽隐杆线虫突变体可作为PM2.5的指示生物,对PM2.5进行有效的快速风险评价。通过模式生物应激响应,发现PM2.5可能对人体行为、免疫以及生殖等方面都有不同程度的影响,本研究对大气污染区的环境风险预警与人体健康评价研究提供了理论视角和实践可能。 展开更多
关键词 空气污染 颗粒物 生物监测 生物标志物 秀丽隐杆线虫 生态风险评价 热休克蛋白基因hsp70
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双酚A作用机制的研究进展 被引量:3
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作者 盛磊 朱焰 曹霖 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2012年第5期417-421,共5页
双酚A(bisphenol A,BPA)是一种化工原料,对人体内分泌有一定干扰作用。研究表明,长期暴露于BPA可能对人体产生不良影响。目前对BPA作用机制的研究主要集中于受体[雌激素受体(ER)、雌激素受体相关受体(ERR)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素... 双酚A(bisphenol A,BPA)是一种化工原料,对人体内分泌有一定干扰作用。研究表明,长期暴露于BPA可能对人体产生不良影响。目前对BPA作用机制的研究主要集中于受体[雌激素受体(ER)、雌激素受体相关受体(ERR)、雄激素受体(AR)、糖皮质激素受体(GR)、甲状腺激素受体(TR)]、基因[同源盒基因(HOXA10、HSP70)]、细胞因子[白细胞介素(IL-4、IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)等]和信号通路(Fas/FasL信号通路、线粒体信号通路)对生殖系统的影响等。最近研究发现,BPA可与其他一些物质产生相互作用,如BPA与维生素C联合应用的肾脏氧化损伤,应加强对BPA与其他物质相互作用的研究。 展开更多
关键词 酚类 受体 雌激素 基因 同源盒 hsp70热休克蛋白质类 细胞因子类 泌尿生殖系统 信号传导
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远隔缺血预适应血清外泌体增加SH-SY5Y细胞糖氧剥夺耐受的生物信息学分析
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作者 邹明新 刘晓蕾 +4 位作者 刘娜 崔钧贺 张璞 邵国 时静华 《中华老年心脑血管病杂志》 北大核心 2021年第3期306-309,共4页
目的研究远隔缺血预适应(RIPC)血清外泌体对SH-SY5Y细胞基因表达的影响,探讨差异表达基因对神经细胞在糖氧剥夺(OGD)耐受中的作用。方法RIPC前后分离人血清外泌体,取RIPC前外泌体(HuE-C)和RIPC后外泌体(HuE-RIPC)。将SH-SY5Y细胞分为空... 目的研究远隔缺血预适应(RIPC)血清外泌体对SH-SY5Y细胞基因表达的影响,探讨差异表达基因对神经细胞在糖氧剥夺(OGD)耐受中的作用。方法RIPC前后分离人血清外泌体,取RIPC前外泌体(HuE-C)和RIPC后外泌体(HuE-RIPC)。将SH-SY5Y细胞分为空白组(正常培养细胞),对照组(培养液加入HuE-C)和RIPC组(培养液加入HuE-RIPC),采用高通量测序各组细胞基因表达并进行生物信息学分析,将3组细胞置于OGD条件下,检测细胞活力,采用实时定量PCR及Western blot检测与神经低氧/缺血相关的基因表达。结果生物信息学显示,RIPC组热休克蛋白(HSP)基因差异表达增加。MTS检测发现,OGD条件下,RIPC组细胞活力明显高于空白组(0.673±0.056 vs 0.481±0.027,P<0.01)。实时定量PCR和Western blot检测显示,OGD条件下,RIPC组HSP70 mRNA表达和蛋白表达明显高于空白组和对照组(P<0.05)。结论人RIPC血清外泌体可引起众多基因表达变化,其中HSP70表达增加可能是其低氧耐受增加的一个原因。 展开更多
关键词 缺血预处理 外泌体 基因表达 hsp70热休克蛋白质类
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水牛热休克蛋白70基因克隆及其表达分析 被引量:3
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作者 汤玉燕 姚顺 +4 位作者 濮黎萍 赵秀玲 陈东荣 张鹏飞 张明 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期2599-2607,共9页
【目的】克隆水牛热休克蛋白70基因(HSP70)并进行生物信息学分析,同时明确HSP70基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和2-细胞期胚胎中的表达情况,为研究HSP70在水牛卵母细胞成熟及着床前早期胚胎发育中的作用机理提供理论依据。【方法】根据N... 【目的】克隆水牛热休克蛋白70基因(HSP70)并进行生物信息学分析,同时明确HSP70基因在水牛成熟卵母细胞(MII期)和2-细胞期胚胎中的表达情况,为研究HSP70在水牛卵母细胞成熟及着床前早期胚胎发育中的作用机理提供理论依据。【方法】根据NCBI已公布的水牛HSP70基因mRNA预测序列(MH814759.1)设计引物,通过RT-PCR克隆水牛HSP70基因,运用DNAStar、MEGA 7.0、TMHMM 2.0及SignalP 4.1 Server等在线软件进行生物信息学分析;同时采用细胞免疫荧光分析HSP70在水牛成熟卵母细胞及2-细胞期胚胎中的表达情况。【结果】水牛HSP70基因编码区(CDS)长度为1926 bp,共编码641个氨基酸残基。克隆获得的水牛HSP70基因序列与NCBI已公布水牛HSP70基因mRNA预测序列(MH814759.1)的相似性高达97.7%;与牛、家犬、山羊、小鼠、绵羊和大鼠的HSP70基因序列具有较高的相似性,其中与牛的相似性高达99.1%。基于HSP70基因核苷酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,水牛与牛的亲缘关系最近。水牛HSP70分子量为70.27 kD,分子式为C3088H4967N8670972S15,理论等电点(pI)为5.67,不稳定系数为32.84,属于稳定蛋白;不存在跨膜结构及信号肽,主要定位于细胞质(60.9%)、细胞核(30.4%)及线粒体(8.7%),其亲水性较强;水牛HSP70蛋白结构以α-螺旋和β-折叠为主。HSP70在水牛成熟卵母细胞及2-细胞期胚胎中均有表达,且主要集中在细胞质。【结论】水牛HSP70基因在进化过程中具有高度的保守性,在水牛成熟卵母细胞和着床前早期胚胎中均有表达,且主要集中在细胞质,属于结构型HSP70。 展开更多
关键词 水牛 热休克蛋白70(hsp70) 基因克隆 表达分析 细胞质
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纳米TiO2对四膜虫多药耐药基因和热激蛋白基因的影响
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作者 吴雅靖 赵群芬 +1 位作者 陈晓菲 周梦媛 《纳米科技》 2012年第3期9-12,26,共5页
为探讨纳米TiO2在分子水平对生物的影响,运用RT—PCR半定量法研究不同浓度纳米TiO2对四膜虫多耐药(MDR1)和热激蛋白70(HSP70)基因表达活性的影响,结果表明,处理组中MDR1基因表达均高于对照组,且差异极显著(p〈0.01);HSP70... 为探讨纳米TiO2在分子水平对生物的影响,运用RT—PCR半定量法研究不同浓度纳米TiO2对四膜虫多耐药(MDR1)和热激蛋白70(HSP70)基因表达活性的影响,结果表明,处理组中MDR1基因表达均高于对照组,且差异极显著(p〈0.01);HSP70表现为高浓度抑制、低浓度诱导,表达量在低浓处理组中高于对照组,差异显著(p〈0.05)。随着纳米TiO2浓度的升高,处理组中HSP70表达量不断下降,当纳米TiO2浓度为100mg·L-1和500mg·L-1时,HSP70的表达量显著低于对照组中的表达量(p〈0.05),因此,纳米TiO2颗粒可以从分子水平影响梨形四膜虫,但确切的毒理还需要进一步的研究探索及验证。 展开更多
关键词 纳米TIO2 四膜虫 多耐药基因 热激蛋白基因
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