新城疫病毒F48E9株HN基因核苷酸序列

本研究采用 Ｓａｎｇｅｒ＇ｓ 双脱氧末端终止法测定了新城疫病毒国内标准强毒株 Ｆ４８ Ｅ９ 血凝素神经氨酸酶基因 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 的核苷酸序列，推导出其氨基酸序列。 Ｆ４８ Ｅ９ Ｈ Ｎ 基因编码区全长为 １７１３ｂｐ，单一的开放阅读框编码５７１ 个氨基酸的糖蛋白。含有６ 个潜在的与天门冬酰胺（ Ｎ）连接的复合寡聚糖和高甘露糖寡聚糖结合位点，其中有 ５ 个簇集在蛋白分子的 Ｃ末端一半内，有１３ 个半胱氨酸残基。发现６ 个 Ｆ４８ Ｅ９ 特有的氨基酸残基，３７ 位 Ｆ（ Ｌ）、３８ 位 Ｓ（ Ａ）、６０ 位 Ｌ（ Ｐ）、１０５ 位 Ｓ（ Ｎ）、４４３ 位 Ａ（ Ｔ）、５７１ 位 Ｉ（ Ｖ），这些位点除了 ６０ 位的 Ｐ有两株为 Ｓ以外，其它的在 １３ 株已知序列中均为高度保守序列。

联合应用新城疫病毒及其HN基因对小鼠黑色素瘤抑制效应的研究

背景与目的尽管新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NDV)对多种肿瘤具有抑制作用,但其抑瘤机制尚不完全清楚。以前的研究结果表明,该病毒的血凝素神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因在该病毒的抗肿瘤作用上发挥重要作用且HN蛋白表达后能够定位于肿瘤细胞膜上,以HN蛋白作为肿瘤细胞的外源抗原来研究其抑瘤作用尚未见报道。本研究拟探讨HN蛋白作为外源抗原在新城疫病毒抗肿瘤的作用以及二者联合应用对小鼠黑色素瘤的抑制效应。方法在C57BL/6小鼠右后肢皮下接种B16黑色素瘤细胞2×105个。荷瘤第2天左后肢肌肉注射含新城疫病毒HN基因的重组质粒,荷瘤第7天,瘤内注射新城疫病毒2×109pfu;同时设单独HN基因或NDV治疗组及注射PBS的对照组。通过抑瘤率观察动物体内的抑瘤效果;通过特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocyteCTL)实验,ICAM-Ⅰ、CD48及新城疫病毒HN蛋白在肿瘤细胞表面表达检测,探讨HN蛋白所介导的抑瘤作用。结果联合应用新城疫病毒及该病毒HN基因对肿瘤的抑制效果明显好于单独HN基因及新城疫病毒,抑瘤率达82.8%,特异性CTL反应增强,对靶细胞的杀伤率为18.4%;单独HN基因及新城疫病毒治疗组的抑瘤率分别为56.6%、41.0%,特异性CTL活性分别为4.4%、10.1%;

4株NDV流行株的分离鉴定、生物学特性及遗传学特性的研究

为研究近年国内的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)流行株与传统疫苗株(Mukteswar、La Sota及Clone 30)的亲缘关系和遗传演化情况,试验从广东、广西和海南地区患病的免疫鸡群病料中分离鉴定得到4株NDV流行株。通过RT-PCR技术对各毒株的F和HN基因进行扩增、克隆与序列分析,然后与GenBank上发表的NDV序列进行同源性比对、遗传进化树分析,并测定各毒株致病指数。结果显示,本试验中HN-08株的鸡胚半数感染量(EID50)、平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉致病指数(IVPI)分别为10-8.37/0.2mL、58.5h、1.78和2.45,XX-08株分别为10-6.50/0.2 mL、75.0h、1.61和2.41,YS-09株分别为10-7.75/0.2mL、64.5h、1.71和2.38,LF-09株分别为10-7.60/0.2mL、63.8h、1.84和2.38。4株鸡源NDV流行株彼此间F和HN基因推导的氨基酸序列同源性在95.8%以上,与鸡源流行株GX11/03、GM株的同源性为96.8%~98.6%,而疫苗株Mukteswar、La Sota及Clone 30株的同源性为86.7%~90.6%,与标准强毒株F48E9的同源性为88.4%~91.3%。表明4株NDV流行株均为强毒株,与近年来国内流行的GX11/03、GM株有较近的亲缘关系,而与传统疫苗株的关系相对较远。

2017～2018年河南省漯河市儿童严重急性呼吸道感染病例中人副流感病毒3型基因特征分析

严重急性呼吸道感染(Severe acute respiratory infection,SARI)是引起婴幼儿就诊和住院的常见原因,也是该年龄段人群发病的主要原因,而病毒感染占呼吸道感染病例的60%以上,其中人副流感病毒(Human parainfluenza viruses,HPIVs)是引起呼吸道感染的常见病原。为分析河南省漯河市儿童严重急性呼吸道感染(SARI)病例中人副流感病毒3型(HPIV-3)检出状况及血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因特征,采用实时荧光定量聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法对河南省漯河市中心医院于2017年10月10日至2018年12月27日送检的627份SARI病例咽拭子进行核酸检测,筛查HPIV-3阳性标本,对HPIV-3阳性标本用反转录聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增其HN基因,并对扩增产物进行序列测定,与GenBank数据库中的国内外HPIV-3 HN基因进行对比分析,绘制系统进化树,并分析基因特征。627份咽拭子标本中,HPIV-3阳性有27份,检出率为4.3%。59%的HPIV-3阳性病例分布于春夏季,发病人群中,6岁以下儿童占96.3%。通过RT-PCR方法共获得18株HPIV-3的HN基因,经过序列测定及对比分析可划分为两个基因亚型:C3a和C3b。C3a亚型有10株,C3b亚型有8株。18株HPIV-3的HN基因序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.1%~100.0%和98.8%~100%。与原型株Wash/47885/57相比,本次扩增18株HPIV-3 HN基因序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为94.5%~95.0%和97.0%~97.7%。与GenBank中国内外的HPIV-3 HN基因的代表株比较,其核苷酸及氨基酸同源性分别为94.1%~98.5%和96.8%~97.0%。本研究提示HPIV-3是河南省漯河市儿童SARI病例中检出的病原之一,2017年10月至2018年12月期间,至少有C3a、C3b两个基因亚型的HPIV-3毒株在漯河市共流行。