姜黄素加重结肠癌细胞株HCT-116线粒体损伤和促进细胞凋亡的作用研究

目的:观察姜黄素对结肠癌细胞株HCT-116细胞增殖和凋亡的影响以及对细胞线粒体形态和功能的改变,并探讨其可能的机制。方法:体外培养结肠癌细胞株HCT-116,给与不同浓度的姜黄素(5、10、20、30μmol/L)处理,细胞计数试剂盒CCK-8观察细胞增殖的变化并筛选出最佳作用浓度。流式细胞术检测细胞凋亡的改变。线粒体膜电位检测试剂盒JC-1检测细胞内线粒体膜电位的变化。电镜和Mito Tracker Deep Red染色观察细胞内线粒体形态结构的变化。三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测细胞ATP和ROS的变化。分光光度计检测与凋亡密切相关的casppase-3和caspase-9活性变化。最后,Western blot检测结肠癌细胞内caspase-3和caspase-9蛋白水平的变化。结果:姜黄素处理细胞株HCT-116细胞后,细胞的增殖水平受到抑制,且呈浓度-时间依赖性,其半数最大抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为13μmol/L。姜黄素不仅增加早期凋亡的结肠癌细胞的比例,还使细胞内线粒体膜电位水平下降,且呈浓度依赖性。电镜结果显示姜黄素处理后,细胞内线粒体出现明显的线粒体肿胀,线粒体嵴肿胀、消失、膜破裂和空泡等。Mito Tracker Deep Red染色后显示线粒体数量减少且呈碎片状。细胞内的ATP生产明显下降。另外,姜黄素还增加细胞内caspase-3和caspase-9酶活性和蛋白水平的表达。结论:姜黄素抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,并促进细胞的凋亡,其机制与姜黄素加重线粒体形态和功能的损伤有关。

蟾蜍他灵对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨不同浓度蟾蜍他灵(BT)对人结直肠癌细胞HCT116增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化的影响。方法采用CCK-8实验检测不同浓度(0、10、20、40、80、160、320 nmol/L)的BT处理24和48 h后的细胞活力,并计算半抑制浓度(IC 50);平板克隆实验验证0、12.5、25.0 nmol/L BT(设为A、B、C组)处理14 d后对HCT116细胞集落形成能力的影响;使用划痕和Transwell实验验证0、25、50 nmol/L BT(设为A、C、D组)处理24 h后对HCT116细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Western blot实验检测A、C、D组处理24 h后HCT116细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。结果CCK-8实验结果显示,BT处理HCT116细胞24或48 h后,随着BT的浓度增加,其抑制HCT116细胞增殖的作用显著增强(F=2106.00、3725.00,P<0.05),处理24和48 h的IC 50分别为49.59、24.10 nmol/L;平板克隆实验结果显示,B、C组细胞的集落数量显著少于A组(F=159.30,t=12.40、17.32,P<0.05);划痕和Transwell实验结果显示,C、D组细胞迁移率和侵袭细胞数量显著低于A组(F=120.30、296.80,t=12.71~21.27,P<0.05);Western blot实验结果显示,BT显著上调HCT116细胞内E-cadherin蛋白表达(F=2736.00,P<0.05),其中C、D组显著高于A组(t=50.27、72.13,P<0.05);而BT显著下调N-cadherin蛋白表达(F=626.80,P<0.05),其中C、D组显著低于A组(t=26.54、33.57,P<0.05)。结论BT可明显抑制人结直肠癌细胞HCT116的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化过程,有望成为结直肠癌治疗的潜在候选药物。

复方葛根汤诱导结肠癌HCT116细胞铁死亡分子机制研究

为探究复方葛根汤对结肠癌HCT116细胞增长作用及其分子机制,通过MTT法检测、克隆形成、形态学分析探讨复方葛根汤对HCT116细胞增长作用,以活性氧试剂盒检测、荧光显微成像及蛋白免疫印迹法探究其分子机制。研究结果显示,与溶媒对照组相比,复方葛根汤能显著抑制HCT116细胞增长能力,并呈浓度和时间依赖性,机制上能显著增加细胞内活性氧,显著上调铁死亡相关蛋白PTGS2、ACSL4蛋白的表达,及明显下调铁死亡相关蛋白GPX4表达,表明复方葛根汤可能通过诱导铁死亡机制抑制HCT116细胞增长。

SOX4靶向miR-17对结肠癌细胞HCT-116生物学行为的影响

目的探讨性别决定区Y框蛋白4(SOX4)及miR-17在结直肠癌中的表达及对HCT-116细胞生物学行为的作用。方法收集2020年3月至2022年1月在河北北方学院一附院和张家口市第一医院的27例结直肠癌患者组织标本并检测SOX4及miR-17的表达水平,并分析与临床病理特征的关系。利用慢病毒转染技术干预HCT-116细胞的SOX4及miR-17表达。检测各组细胞中SOX4和miR-17的表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力、细胞活性变化和相关蛋白表达。结果与正常组织比较,结直肠癌组织中SOX4表达水平升高。SOX4及miR-17在结直肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),SOX4和miR-17的表达和病理分期、淋巴结转移、肝转移情况相关,差异有统计学意义(P<0.05),而与肿瘤的大小、分化程度无相关(P>0.05)。SOX4模拟组细胞增殖能力、迁移能力及细胞活性显著高于对照组及SOX4抑制剂组(P<0.05)。SOX4抑制剂组与对照组相比迁移及增殖相关蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论SOX4在结直肠癌组织中表达上调,SOX4的表达可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,miR-17可能是其下游调控靶点。

HCT变换与联合稀疏模型相结合的遥感影像融合

提出了一种基于HCT变换和联合稀疏模型的遥感影像融合方法,可更有效地利用多光谱所需谱段的光谱信息,最终得到所需谱段的融合影像。该方法将所需谱段的多光谱影像进行HCT变换,获取其亮度分量和角度分量;然后利用亮度分量和全色影像小波变换的低频分量进行联合稀疏模型的构建、系数求解和融合,得到融合的全色低频分量;最后将该低频分量与前面步骤所得其他分量分别进行小波逆变换和HCT逆变换,得到高质量的融合影像。试验利用Pleiades-1和WorldView-2两种卫星数据进行验证,并通过视觉效果和量化的融合评价指标进行对比和分析,验证了本文算法的有效性。

茶树HCT基因的克隆及表达

Cs-EV12(GenBank登录号:GH618817)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树香豆酰辅酶A:莽草酸/奎宁酸香豆酰转移酶的cDNA片段,应用RACE技术克隆了该基因的全长cDNA,命名为CsHCT(GenBank登录号:JQ619537)。CsHCT cDNA序列全长1 653 bp,包含一个编码447个氨基酸的完整开放阅读框。序列分析显示CsH-CT与毛果杨、烟草、拟南芥的HCT在氨基酸序列上一致性分别为54%、41%和40%,含有植物BAHD酰基转移酶家族活性中心的保守基序,以及与HCT正确折叠有关的DFGWG基序。HCT的表达受假眼小绿叶蝉取食、低温、紫外线和茉莉酮酸甲酯的诱导。

木质素生物合成中C3H/HCT的研究进展

木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程中起作用,是控制木质素H-单体与G/S-单体相互转化的关键酶。该文主要对C3H/HCT的研究进展及在木质素生物合成中的作用进行了阐述。

5周高原训练对优秀自行车运动员WBC、RBC、HGB和HCT影响的研究

通过对山东省8名优秀自行车运动员5周高原训练前、训练中与训练后与免疫能力和有氧运动能力相关指标变化规律的分析,研究高原训练对优秀自行车运动员免疫能力以及有氧运动能力的影响。8名研究对象在高原进行为期5周的训练,3天一周期,与平原训练内容一致。运动员WBC水平在上高原后第1周末开始减少,持续3周呈现出显著性差异(P<0.05)后上升,在下高原后的第1周达到一个峰值,并与进高原前呈现显著性差异(P<0.01),随后又下降趋于稳定;RBC、HGB和HCT三个指标变化趋势基本一致,都是在进入高原后升高,到第4、5周达到峰值后趋于稳定,呈现出和高原前比较显著性差异(P<0.05或P<0.01);高原训练结束后下降,直到低于高原训练前水平后回归,第5周左右达到高原训练前水平。经过5周的高原训练,可以观察到运动员的血液指标变化大致呈现3个时相的变化,即升高相、保持相、回归相,提示高原训练导致运动员免疫能力产生明显变化,与运动能力有关的指标显著升高,并持续到下高原后两周左右。高原训练要严格运动员机体监控,在下高原两周内参加比赛更有利于运动员成绩的发挥。

输血患者在红细胞输注后Hb、Hct的变化

目的了解武汉地区红细胞输注前后Hb及Hct的变化情况。方法组织专家对全市26家医院进行红细胞应用的专项检查。每家医院抽取20份含内科及外科的病历。对输血前及输血后〈72h，Hb及Hct值检测。结果520份病历中，有359名患者在输血前后做了Hb及Hct的检查。非手术科室在不同年龄段输血前Hb平均值都低于手术科室，无论手术科室还是非手术科室，以18—30岁组的输血前Hb平均值最低。手术科室〉80岁组，输血前Hb平均值（97．30±23．60）g／L，输血后Hb平均值（95．90±23．59）g／L，并未达到理想的效果。非手术科室Hb改变值整体要高干手术科室。结论本次检查中临床医师对18—30岁的患者输血指征把握较其他年龄段严格。手术科室对于高龄患者，输血指征放的较宽但输血效果较差。临床医师对输血疗效评价的必要性认识还需加强。

瞬时转染后WAF1基因对肠癌细胞株Hct/8的生物学效应

目的 :探讨外源基因 WAF1的转染、表达活性和生物调控作用。方法 :采用脂质体转染技术将外源基因 WAF1转入 Hct/ 8细胞 ;经免疫荧光染色和流式细胞仪分别监测外源基因的表达和对细胞分化增殖、细胞凋亡的调控作用。结果 :外源基因 p2 1 WAF1/CIP1- pc DNA3在 Hct/ 8细胞阳性表达为 89.6% ,显著高于空质粒对照和空白对照组 ( P<0 .0 1 ) ;转染 48h后细胞分裂减慢 ,2 4～48h凋亡指数开始增高 ,72 h达到高峰 ,以后逐渐下降。结论 :克隆的外源基因 WAF1具有表达活性及诱导 Hct/ 8细胞凋亡的作用 ,揭示

EphA2对结肠癌细胞株HCT116中VEGF和MMP9蛋白表达的影响

目的:探讨EphA2对结肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases9,MMP9)蛋白表达的影响。方法:用Western印迹验证选择高表达EphA2蛋白的结肠癌细胞株HCT116;脂质体转染法将EphA2反义寡核苷酸瞬时转染入HCT116细胞,Western印迹检测反义寡核苷酸转染效率后,ELISA检测转染前后细胞上清液中VEGF蛋白的表达;明胶酶谱分析法检测转染前后细胞上清液中明胶酶的分泌。结果:EphA2反义寡核苷酸成功抑制了EphA2总蛋白的表达,降低了VEGF蛋白和MMP9蛋白的表达。结论:EphA2反义寡核苷酸通过降低结肠癌细胞株HCT116中VEGF,MMP9蛋白的表达来抑制结肠癌细胞株HCT116的侵袭和转移。

低氧环境地高辛通过抑制HIF-1α下调结肠癌HCT 116细胞VEGF表达的实验研究

目的研究低氧环境下地高辛能否通过抑制HIF-1α下调结肠癌HCT 116细胞VEGF的表达。方法将HCT 116细胞分为常氧组(Normoxia组)、低氧组(Hypoxia组)和低氧+地高辛组(Hypoxia+Digoxin组)。在低氧环境下对结肠癌HCT 116细胞使用地高辛干预,在3个不同时间点(0、24和72h)使用MTT法对HCT 116细胞活性进行检测;同时在干预24小时后分别采用RT-PCR法和western blotting法对HCT 116细胞VEGF和HIF-1α的mRNA和蛋白水平进行检测。结果低氧环境下HCT 116细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05);且在各时间点低氧+地高辛组细胞活性较低氧组细胞下降更加明显,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在干预24小时后,HCT 116细胞VEGF和HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平较未干预细胞明显降低(均P<0.05)。结论在低氧环境下,地高辛可以通过抑制HIF-1α的合成下调结肠癌HCT 116细胞VEGF的表达,抑制肿瘤细胞增殖。

洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察两种不同提法的洋葱黄酮类物质对人结肠癌HCT116细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用热水浸提法和乙醇抽提法从洋葱中提取黄酮类物质,MTT法测定其对人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,免疫细胞化学染色检测Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法观察细胞凋亡,并通过基因组DNA电泳观察凋亡特征性"梯状"条带。结果:MTT法结果显示两种不同方法提取的黄酮类物质对HCT116细胞的增殖均有抑制作用,呈现时间和剂量依赖性,而热水浸提法和乙醇抽提法相比,后者提取的物质抑制作用优于前者,发挥作用的起始浓度也较低;基因组DNA琼脂糖凝胶电泳显示黄酮类物质作用于HCT116细胞后出现凋亡细胞特有的DNA阶梯状条带;免疫细胞化学染色和TUNEL结果均表明在一定药物浓度作用后,细胞出现凋亡。结论:洋葱中的黄酮类物质对体外培养的人结肠癌HCT116细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导的作用,其中乙醇抽提法提取的黄酮类物质作用更强。

RNAi抑制大肠癌HCT116细胞株VEGF-mRNA表达的实验研究

目的 研究载体介导的RNAi(RNAinterference)技术对大肠癌细胞株HCT116中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)mRNA表达的抑制作用。方法 依据Tuschl等设计siRNA的原则,以VEGF为靶基因设计并合成有小发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆到载体Pavu6+ 2 7中构建重组体(Pavu6+ 2 7 VEGFsiR NA)。DOTAP脂质体法转染重组体至大肠癌HCT116细胞株,经G418筛选,以空质粒(Pavu6+ 2 7)转染为对照;半定量RT PCR法观察HCT116细胞中VEGF mRNA表达改变。结果 ①成功构建发卡样VEGFsiRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体(Pavu6+ 2 7 VEGFsiRNA) ;②Pavu6+ 2 7 VEGFsiRNA转染HCT116细胞后,VEGF mRNA表达较空载体Pavu6+ 2 7转染的对照组显著下降。结论 成功构建载体介导的VEGF靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制HCT116细胞中VEGF mRNA表达,为下一步利用RNAi技术抑制肿瘤血管形成以及局部侵袭和远处转移提供研究基础。

电视辅助胸腔镜手术对外周血HCT,WBC的影响

1996年 1月～ 1999年 11月 ,经检测 15例胸腔镜手术病人及 15例常规开胸手术病人术前 1天、术后第 1天、术后第 5天肘静脉血HCT值以及WBC计数并作统计学分析。结果胸腔镜组手术前后HCT值相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。常规开胸组术后第 1天HCT值低于胸腔镜组 (P <0 .0 5 ) ,WBC计数高于胸腔组 (P <0 .0 1) ,胸腔镜组WBC计数术后第 1天高于术前第 1天 (P <0 .0 5 ) ,术后第 5天与术前 1天相比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。常规开胸组WBC计数术后第 1天高于术前 1天及术后第 5天 (P <0 .0 1) ,术后第 5天仍高于术前水平 (P <0 .0 5 )。结果表明 :VATS手术与常规开胸手术相比 ,出血量较少 。

剖腹探查结合术中肠镜在消化道出血诊疗的应用及RBC、Hb和HCT改变

目的探讨剖腹探查结合术中肠镜在消化道出血诊疗的应用及RBC、Hb和HCT改变。方法选取2019年2月至2021年4月新疆医科大学第一附属医院附属医院创伤急救中心收治的89例消化道出血患者为观察组。于同期选取行常规肠镜检查的30例消化道出血患者为对照组。比较两组患者手术情况及疗效的差异,分析治疗前后RBC、Hb和HCT变化。结果观察组总有效率(94.38%)显著高于对照组(50.0%),差异有统计学意义(P<0.05);治疗前,两组RBC、Hb及HCT水平变化比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后1周、治疗后1个月RBC、Hb及HCT水平较治疗前显著升高(P<0.05),且观察组治疗后1周、1个月RBC、Hb及HCT水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中重度出血量患者RBC、Hb和HCT水平显著低于轻度出血量患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论消化道出血患者可采取剖腹探查结合术中肠镜的方式,临床诊治率较高,可有效减少RBC、Hb和HCT流失。

Hb和Hct作为红细胞输注评估指标的回顾性分析

目的探讨Hb/Hct作为红细胞输注评估指标的作用与临床意义。方法收集本院2010年1月～2011年12月住院和门诊红细胞输注患者的输血信息及相关Hb检测结果,分析内科患者不同Hb区间红细胞输注量和Hb改变情况,以及手术科室不同输血类型和儿科患者红细胞输注量与输注前Hb值和改变情况。结果 27 913例次有效输血申请,输血前Hb平均值手术科室患者最高(85.23±20.23)g/L,儿科次之(83.60±21.13)g/L,内科最低(68.16±16.22)g/L;80%以上内科患者输注前Hb<80 g/L,且Hb越低,红细胞输注量随之略有增加;手术科室患者输注前Hb检测率仅为67.44%,且每例次输血申请中,红细胞输注量差异较多大,最高量为78 U,最低量为1U;非手术类输血Hb改变值明显高于手术类输血(含术中)(P<0.05)。结论 Hb/Hct可作为红细胞输注适应证评估及输注疗效评价的客观指标督导临床用血,但同时结合其他因素,如患者年龄、基础疾病、临床症状、失血量以及使用促造血细胞因子情况等,综合评判将更加全面、准确。

旋毛虫对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞的作用

目的观察旋毛虫感染对BALB/c小鼠体内人结肠癌HCT-8细胞生长的作用。方法用不同剂量的旋毛虫感染BALB/c小鼠,并在不同时间接种HCT-8细胞,荷瘤20 d后解剖小鼠,测定小鼠体内肿瘤的体积、重量,计算抑瘤率,并检测T淋巴细胞亚群。结果各实验组小鼠肿瘤体积和重量均显著低于对照组,CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、未长瘤小鼠比例、小鼠死亡率和抑瘤率均显著高于对照组;先接虫后荷瘤组抑瘤效果优于先荷瘤后接虫组。结论旋毛虫对BALB/c小鼠体内的人结肠癌HCT-8细胞的生长有一定的抑制作用。

小檗碱抑制HCT116细胞生长与Wnt/β-catenin信号的关系研究

目的研究小檗碱对结肠癌细胞的增殖抑制作用与Wnt/β-catenin信号的关系。方法结晶紫染色法检测小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用,采用流式分析及West-ern blot研究小檗碱诱导HCT116细胞凋亡;Western blot检测β-catenin蛋白表达、RT-PCR法检测β-catenin mRNA表达,确定小檗碱对其表达的影响;采用外源性过表达β-cate-nin研究小檗碱抑制HCT116细胞增殖与β-catenin的关系。结果小檗碱处理组细胞较对照组细胞增殖明显受到抑制,并诱导HCT116细胞凋亡。小檗碱处理组全细胞、胞质及核内β-catenin蛋白水平均明显较对照组低。外源性过表达β-catenin能减弱小檗碱对HCT116细胞增殖的抑制作用。小檗碱处理组β-catenin mRNA表达明显受到抑制。结论小檗碱能抑制HCT116细胞增殖并抑制Wnt/β-catenin信号转导,其机制可能与下调β-catenin mRNA表达有关。

新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤的治疗

目的 :寻求有效的肿瘤基因治疗方法 ,研究新城疫病毒HN基因与鸡贫血病毒VP3基因在无胸腺裸鼠体内的抗肿瘤作用。方法 :建立BALB/c裸小鼠荷人结肠癌模型 ,瘤内注射脂质体包裹的真核重组子 pVHN和pVVP3。观测 pVHN和pVVP3治疗荷HCT裸鼠的效果 ,免疫组化法检测肿瘤细胞Bcl 2和PCNA的表达。结果 :经HN基因和VP3基因联合治疗组的小鼠与荷瘤对照组小鼠相比 ,肿瘤体积明显缩小 ,抑瘤率可达 70 %。病理组织切片表明 ,治疗组裸鼠体内肿瘤细胞大量凋亡 ,局部地方可见细胞消失。免疫组化表明 ,Bcl 2和PCNA蛋白在荷HCT裸鼠对照组与各治疗组均有表达 ,其中Bcl 2表达在荷瘤对照组与pVHN治疗组差异有显著意义 (P <0 .0 5 ) ,PCNA表达在荷瘤对照组与 pVHN +pVVP3治疗组差异极其显著 (P <0 .0 1)。结论 :NDVHN基因与凋亡素VP3基因对裸鼠荷HCT肿瘤细胞的增殖有一定抑制作用 ,可诱导其凋亡 ,其凋亡可能与下调Bcl 2表达有关。