人参总皂苷增强成骨分化的间充质干细胞促造血作用研究

目的观察人参总皂苷(TSPG)诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的作用,探讨TSPG增强成骨分化的间充质干细胞促造血的可能机制。方法贴壁法培养人源骨髓间充质干细胞(h MSCs),成骨细胞分化和免疫表型进行鉴定。不同剂量的TSPG联合成骨细胞条件诱导液培养h MSCs,MTT法检测细胞增殖活性,对-硝基苯磷酸盐(p NPP)法检测培养上清碱性磷酸酶含量,茜素红染色法观察钙结节数量,Western blot法检测成骨细胞分化转录因子-核心结合蛋白因子2(RUNX2)蛋白表达水平,Elisa法检测培养上清造血相关因子含量,造血祖细胞集落生成实验检测培养上清造血支持能力。结果 MTT和p NPP结果均显示随着TSPG剂量增加,吸光值逐渐增加,呈剂量依赖性。钙结节数量和RUNX2蛋白表达水平明显高于对照组。造血相关生长因子和造血祖细胞集落数明显高于对照组。结论TSPG通过上调RUNX2蛋白表达诱导h MSCs向成骨细胞分化,同时增强成骨分化的MSCs支持造血。

经当归补血汤干预的肌源性干细胞Wnt信号相关基因表达分析

目的:探讨在体外造血微环境中肌源性干细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达情况及当归补血汤(DBD)载药血清的干预作用。方法:将分离纯化并经流式细胞仪鉴定的MDSCs与BMSCs体外培养,根据实验需要随机分为6组进行药物干预,即空白对照组、共培养Wnt激动剂组、共培养Wnt抑制剂组、DBD+共培养组、DBD+共培养激动剂组及DBD+共培养抑制剂组。Real-time PCR检测各实验组MDSCs Wnt通路上下游节点基因Wnt3、Wnt3a、β-catenin及MDSCs增殖分化相关基因Cyclin D1、C-myc、CD34 mRNA的表达变化。结果:流式细胞仪检测结果显示MDSCs CD34、Sca-1阳性。倒置显微镜下观察:共培养Wnt激动剂组、DBD+共培养组、DBD+共培养激动剂组MDSCs较空白对照组生长密集且生长速度快,激动剂组聚团明显,共培养Wnt抑制剂组MDSCs增殖明显受到抑制。Real-time PCR检测结果显示:DBD+共培养激动剂组的Wnt3、Cyclin D1、CD34 mRNA表达水平最高,共培养激动剂组与DBD共培养组其次,空白对照组最低。结论:当归补血汤载药血清作用于共培养体系下的肌源性干细胞,Wnt信号通路持续激活后,体外造血微环境中的MDSCs更易增殖并分化。