影响HMME在不同溶液中光漂白速率的主要因素分析

目的分析在不同溶液体系中,影响国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)光漂白速率的主要因素。方法首先从理论上,根据光漂白速率方程分析了可能影响光漂白速率的主要因素。然后测定不同溶液中不同浓度HMME的光漂白(充氧),通过绘制光漂白曲线(HMME浓度-照光时间)比较HMME漂白速率。结合理论推导结果与实验结果分析各因素对漂白速率的影响。结果HMME的光漂白速率在白蛋白悬液中快于DMSO中,DMSO中快于细胞悬液和PBS中,后两种溶液中HMME的光漂白速率相近。HMME对532nm光的摩尔消光系数:εDMSO>εcells-suspension>εalbumin-buffer>εPBS。结论光敏剂溶液条件会影响光敏剂光漂白速率。其中摩尔消光系数、光敏剂浓度、溶液微环境对光漂白速率影响较大。摩尔消光系数增加HMME光漂白速率,蛋白、DMSO的存在可以加速HMME的光漂白。

激光功率密度对HMME-PDT的视网膜和脉络膜生物学效应的影响

目的观察激光功率密度对血卟啉单甲醚(HMME)的视网膜和脉络膜的光动力效应的影响。方法以新西兰兔正常脉络膜毛细血管层为实验对象,HMME注射剂量为5mg/kg,波长532nm激光作为激发光源,眼底光斑能量密度为20J/cm2,功率密度分别为100、200、300和400mW/cm2,相匹配的照射时间分别为200、100、66和50s,照光时机为注射药物结束后5min之内。在PDT后第6小时和12小时,1、3和5天进行眼底观察、荧光眼底造影,并在眼底造影出现脉络膜毛细血管闭塞时取照光部位进行组织学检查。结果激光功率密度为100mW/cm2,PDT后第5天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为200mW/cm2时,PDT后第3天出现脉络膜毛细血管的选择性闭塞;功率密度为300mW/cm2时,PDT后第1天出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第3天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管闭塞;功率密度为400mW/cm2时,PDT后第6h出现视网膜的非选择性损伤,PDT后第5天视网膜恢复正常,脉络膜毛细血管和大部分脉络膜大血管的闭塞。结论在激光能量密度相同时,其功率密度是影响生物学效应的重要因素。即随着功率密度的增加,生物学效应出现的时间提前,照射部位的视网膜和脉络膜大血管受累的可能性越大。

基于HMME的PDT体外灭活HL60实验研究

目的:探讨血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力疗法(HMME-PDT)对HL60细胞的作用及PDT前后HL60细胞表面超微结构的变化。方法:CCK-8法检测光敏剂浓度和光照剂量对HL60细胞抑制率的影响,荧光分光光度计监测PDT过程中光敏剂荧光强度随时间的变化,Fluo 3-AM荧光探针检测不同浓度HMME作用后HL60细胞内Ca2+变化,原子力显微镜观测PDT作用前后不同扫描范围HL60细胞表面的超微结构图。结果:细胞灭活率呈光敏剂浓度-光剂量依赖关系,当HMME为50μg/mL,光照剂量为24 J/cm2时,灭活效率达到70%;随着光照时间的增加,光敏剂的荧光强度不断减弱,下降速率也逐渐变慢;随HMME作用浓度增加,钙离子浓度显著升高;HMME-PDT作用后HL60细胞表面结构出现明显变化。结论:HMME-PDT能有效灭活HL60细胞,光敏剂浓度和光剂量是影响PDT疗效的重要因素,PDT过程中伴随有光漂白现象的发生,细胞凋亡和钙离子浓度增加呈正相关,PDT作用前后细胞出现明显萎缩,细胞膜粗糙度增加。

光动力疗法治疗鲜红斑痣的临床应用

鲜红斑痣(PWS)是一种以皮肤表面毛细血管和毛细血管后微静脉的结构异常为特征的先天性进行性毛细血管畸形。这种明显的外观差异通常被认为是一种身体缺陷,随之而来的社会歧视往往会严重影响患者的情绪和身体健康。海姆泊芬(HMME)是国内新批准的用于治疗PWS的光敏剂,自2017年以来,海姆泊芬光动力疗法(HMME-PDT)被广泛用于PWS患者的治疗。HMME-PDT作为治疗PWS的一种新兴疗法,具有良好的安全性和有效性,是最有前景的治疗策略之一。本文将对HMME-PDT治疗PWS的临床问题进行概述,期待未来有更多的研究以提高治疗的有效性、安全性和舒适性。

血啉甲醚体外光敏效应观察

本文用化学发光法检测 HMME的’O2 和 ROS产量 ,并与 Hp D相比较 ,同时观察 HMME光敏效应与浓度、激光照射功率密度、照射时间、激光波长的关系。结果显示 :HMME浓度在 2 .5— 4 0μg/ ml范围内 ,其光敏效应随浓度的增加而呈线形上升 ,以后便略下降 ;578.2 nm激光以 1 0 m W/ cm2 照射 2 .5μg/ ml,HMME的’O2 和 ROS产量是 Hp D的 8倍 ;HMME光敏效应与激光照射的功率密度密切相关。各功率密度照射HMME后’O2 和 ROS产量变化的趋势为 :5m W/ cm2组 >1 0 m W/ cm2组 >2 0 m W/ cm2组 >1 m W/ cm2组 ;三种波长激光照射 HMME产生的’O2 和 ROS量为 :51 0 .6nm组 >578.2 nm>62 7.8nm组。结论 :HMME体外光敏效应强于 Hp D,其强度与 HMME浓度、激光波长、照射功率密度密切相关 ,过高或低功率密度照射产生效应不佳。

血啉甲醚用于光动力疗法治疗鲜红斑痣的初步临床研究

经六年大量临床验证，光动力疗法已成为具有高度选择性和稳定可靠疗效的无瘢痕治疗鲜红斑痣的新方法。为解决治疗后的较长时间皮肤光敏反应这一主要副作用，本文对２１例志愿鲜红斑痣患者的２６个病灶应用血啉甲醚（ＨＭＭＥ）为光敏剂进行了治疗，对ＨＭＭＥ的作用进行了临床观察，发现ＨＭＭＥ具有良好的疗效、较轻的局部反应、较短的避光期和可行重复治疗的间隔期等优点，值得对其进行深入的研究。

肺癌组织血卟啉单甲醚激光诱发药物荧光与激光诱发自体荧光的光谱区别

目的探讨新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)激光诱发药物荧光与激光诱发自体荧光在肺癌组织中的光谱区别。方法15例肺癌病人(药物组)术前3h静脉注射HMME3mg/kg,20例肺癌病人(对照组)术前不注射HMME,使用三倍频Nd∶YAG激光(波长355nm)和多光道分析仪(OMA)对切除肺癌标本的癌组织进行激光诱发荧光光谱测定,82个检测点行组织病理学检查。结果(1)两组肺癌组织主峰(462.4nm±7.1nm与463.6nm±4.9nm)差异无显著意义;(2)药物组于623.4nm±1.6nm处有一明显的特征峰(即药物峰),对照组于主峰右侧平滑下降;(3)以600nm～623nm波段的斜率表示两组特征,结果药物组斜率为负值,对照组斜率为正值,负值越大,说明药物峰越高。结论新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)激光诱发药物荧光与激光诱发自体荧光在肺癌组织中的光谱有明显区别。

血卟啉单甲醚激光诱发荧光光谱区分肺癌组织和正常支气管组织

目的 探讨应用国产新型光敏剂血卟啉单甲醚 (HMME)激光诱发荧光光谱分析方法诊断肺癌的可行性。方法 15例肺癌患者肺切除前 3小时静脉注射HMME 2 .5mg/kg ,使用三倍频YAG激光 (波长 35 5nm)和光学多道分析仪 (OMA)对切除的癌组织和正常支气管组织行激光诱发荧光光谱测定。 43个检测点均行病理检查。结果 15例患者术后 48小时后接受阳光照射 ,无一例发生皮肤光过敏副作用。肺癌组织的荧光强度 ( 314 4 6± 5 0 17)显著低于正常支气管组织 ( 75 430± 890 8) (P <0 .0 0 1)。正常支气管组织光谱在长波区5 80～ 6 0 0nm处有一个小坪 (I580nm/I6 0 0nm =1.0 81± 0 .0 90 ) ,而肺癌组织则平滑下降 (I580nm/I6 0 0nm=1.2 6 0± 0 .15 7)。肺癌组织于 6 2 3 .4nm± 1.6nm处有一明显的特征峰 (即药物峰 )。以I580nm/I6 0 0nm比值为判据 ,诊断肺癌的敏感性、特异性和符合率分别为 80 .0 %、73 .9%和 76 .7% ;以药物峰斜率为判据 ,诊断肺癌的敏感性、特异性和诊断符合率分别为 95 .0 %、91.3 %和 93 .0 %。结论 新型光敏剂血卟啉单甲醚 (HMME)激光诱发荧光光谱能够区分肺癌和正常支气管组织 ,与激光诱发自体荧光相比 ,能够提高诊断肺癌的敏感性。

风湿性关节炎动物模型中血啉甲醚荧光强度的同步检测研究

光动力疗法的疗效依赖于治疗过程中靶组织中光敏剂的含量或浓度 ,而药物在组织中的分布特性是受动物机体调控的 ,因此 ,同一个体不同组织对光敏剂吸收的时间特性需要同时进行检测才能排除个体之间的差异。建立了一套空间三通道激光诱导荧光同步检测装置 ,并用该装置研究了活体大耳白兔风湿性关节炎模型滑膜、软骨和皮肤对血啉甲醚吸收的时间特性。研究结果表明 ,炎性滑膜组织对血啉甲醚的吸收量远大于软骨和皮肤 ,这一差别在静脉给药即刻就很明显 ,在静脉给药后 2 0min内 ,滑膜中的光敏剂药物含量约为软骨和皮肤中的 6倍。因此 ,对于借助血啉甲醚 ,用光动力疗法治疗风湿性关节炎并采用体外照射治疗方案时 ,从注药即刻开始 ,前 2 0min左右进行光照治疗可能是较好的选择。

载药纳米载体联合光敏剂的淋巴靶向性研究

目的:探讨纳米载体(PBCA-NP)联合光敏剂(HMME)应用于家兔腹腔淋巴结组织的淋巴靶向性研究。方法:制备血卟啉单甲醚-聚氰基丙烯酸正丁酯纳米载体(HMME-PBCA-NP)并检测纳米粒的理化性质和体外释放情况;将家兔随机分为两组,分别给予腹腔注射相同剂量HMME-DMSO和HMME-PBCA-NP溶液,检测血浆中HMME含量得到血卟啉单甲醚的药物代谢动力学参数,于不同时间点处死家兔,检测不同组织中的HMME含量,得到血卟啉单甲醚的组织药物分布。结果:成功制备出HMME-PBCA-NP纳米胶束,粒径为160nm左右,包封率为87.9%,载药量为13.4%;与单纯血卟啉单甲醚溶液组相比,纳米组家兔血清及组织到达药物峰浓度时间均向后推迟(6h vs 3h);腹腔注射不同剂型药物6h后,药物浓度在家兔肠系膜淋巴组织中的差值达到最大[(1.2884±0.04695)μg/ml vs(0.0438±0.00558)μg/ml],肉眼观察,纳米载体组家兔肠系膜淋巴结明显肿大。结论:纳米粒经过腹腔注射具有缓释作用;载药纳米载体经过腹腔注射途径具有淋巴靶向性作用。

新肿瘤光化学诊治剂血卟啉单甲醚对麻醉开胸狗血流动力学的影响

新肿瘤光化学诊治剂血卟啉单甲醚(PSD-044,单体)给麻醉开胸狗静脉内恒速持续输注0.125mg·kg ^(1.)min^(-1)(容积0.625 ml/min)40 min(总量5 mg/kg)对LVSP,±dp/dt_(max),MAP,HR,CO等血流动力学指标的影响。虽均略呈可逆性的、进行性的抑制倾向;但在同样条件下,与输注生理盐水的对照组比较,或与给药组自身药前数据比较均未见有显著的统计学差异。

血卟啉单甲醚介导的声动力对U937细胞增殖影响

研究了聚焦超声激活血卟啉单甲醚对人髓系白血病细胞株U937细胞的增殖抑制作用.通过MTT法检测了频率为1.1 MHz的聚焦超声激活血卟啉单甲醚作用于U937肿瘤细胞的存活率.MTT实验结果显示：声照辐射60 s、强度为2～7 W/cm2的超声对U937细胞的抑制作用呈强度依赖性;单纯血卟啉单甲醚组与对照组相比无显著性差异（P＞0.05）;同等条件下,2 W/cm2超声结合10 ng/L血卟啉单甲醚组对U937肿瘤细胞有明显的协同杀伤作用,与对照组相比有极显著性差异（P＜0.01）.这些结果表明,超声联合血卟啉单甲醚声动力能够特异性抑制U937细胞生长,血卟啉单甲醚有望成为一种新型声敏剂应用于白血病的声动力治疗.

血卟啉单甲醚介导的光动力抗微生物化疗法对牙龈卟啉单胞菌体外杀菌效果的研究

为了研究血卟啉单甲醚(HMME)介导的光动力抗微生物化疗法(PACT)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyrom-onas gingivalis)的杀菌效果,采用荧光分光光度计观察HMME光照后产生活性氧的荧光量,后采用平板菌落计数法检测HMME介导的PACT对牙龈卟啉单胞菌的体外杀菌效果,并用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察各组处理后死活菌的分布情况,使用电泳光散射法检测HMME与牙龈卟啉单胞菌的zeta电位。结果表明:HMME在光照下主要产生单线态氧(P<0.05),其介导的PACT组细菌存活率明显下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.05);CLSM观测PACT组发现大量红色荧光,说明HMME介导PACT可有效杀灭牙龈卟啉单胞菌,HMME与牙龈卟啉单胞菌均为负电位,影响二者结合。HMME介导的PACT可有效杀灭牙龈卟啉单胞菌,为PACT应用于临床治疗牙周炎提供了试验依据,也表明后期需要研发带正电荷的新型光敏剂,以提高光动力杀菌效果。

血啉甲醚对斜纹夜蛾SL细胞的氧化损伤

通过研究血啉甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）对斜纹夜蛾Spodoptera litura（SL）细胞的增殖抑制率IC50、处理后细胞内丙二醛（malondialdehyde,MDA）的生成量、细胞内还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平和细胞器超微结构的变化,明确血啉甲醚对SL细胞的氧化损伤,并探讨将血啉甲醚及其衍生物拓展应用到农业害虫防治领域的可行性。用MTT法测定血啉甲醚光照处理下对SL细胞24h和48h的IC50值分别为8.35μg/mL和7.66μg/mL。硫代巴比妥酸（TBA）法测定表明,血啉甲醚光活化后能导致胞内MDA含量明显升高,且MDA的生成量与其浓度呈正相关;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,光照处理48h时,细胞内MDA生成量达到173.08±3.51nmol/L。5,5′-二硫代双-（2-硝基）苯甲酸（DTNB）法对处理后细胞内GSH水平测定结果表明,光活化后的血啉甲醚处理SL细胞能导致细胞内还原型GSH相对含量随血啉甲醚浓度升高而显著降低;当血啉甲醚浓度为50.000μg/mL,处理48h时,光照处理组细胞内GSH相对含量较之同浓度黑暗处理下降了39.59%。扫描电镜观察显示,6.250μg/mL的HMME处理细胞并光照后,细胞膜表面出现了明显的孔洞,有的细胞出现了花样皱褶和内陷。这些结果表明在血啉甲醚的试验剂量下,SL细胞受到了氧化损伤。

不同能量HMME—PDT对离体牙侧支根管内粪肠球菌的杀灭效果

目的观察不同激光能量对血卟啉单甲醚介导的光动力疗法（HMME-PDT）杀灭离体牙侧支根管内粪肠球菌的效果。方法选取人单根管离体前牙80颗，常规根管预备后建立粪肠球菌感染人工模拟侧支根管模型。实验随机分为8组：A组为阴性对照组，以生理盐水冲洗根管；B组为阳性对照组，以5．25％NaC10冲洗根管；其余6组为HMME-PDT处理组，各组以40μg／ml血卟啉单甲醚（HMME）为光敏剂，避光孵育5min后用不同激光功率的532nm半导体激光在根管内上下提拉螺旋照射120s，按照激光功率的不同，分为C组（50mW）、D组（60mW）、E组（70mW）、F组（80mW）、G组（90mW）、H组（100mW）。各组实验牙标本（每个离体牙近中面侧支根管作为实验前标本，远中面侧支根管作为对应的实验后标本）处理前与处理后即刻用20q（锉取侧支根管内碎屑，然后将碎屑转至含5mlTPY液体培养基的试管中，10倍递增连续稀释后厌氧培养24h，菌落计数。结果不同激光功率PDT组和生理盐水冲洗组相比，杀菌率的差异有统计学意义（P〈0．05）；和5．25％NaCl0冲洗组相比，D组、E组、F组、G组、H组杀菌率均明显增高（P〈0．05），而C组与5．25％NaCl0冲洗组杀菌率之间的差异无统计学意义（P〉0．05）；不同激光功率的各PDT组的杀菌率随激光功率的增加而增高，其中F组、G组、H组与C组、D组、E组相比，杀菌率显著提高（P〈0．05），而F组、G组、H组3组间杀菌率的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在本实验条件下，HMME-PDT对人工侧支根管内粪肠球菌的最佳杀菌功率参数为80mW。

用光谱法研究光敏剂血卟啉单甲醚对肿瘤细胞光动力作用的分子机制

测定了光敏剂血卟啉单甲醚对人宫颈癌细胞HeLa光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,HeLa细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm^(-1)和不对称伸缩振动峰1246cm^(-1)蓝移,强度下降:蛋白质酰胺Ⅰ带1656cm^(-1)发生蓝移,酰胺Ⅱ带1546cm^(-1)出现红移;CH_2对称伸缩振动峰2858cm^(-1),峰位蓝移2cm^(-1),峰值明显减弱:细胞的蛋白质和核酸谱峰面积比值D1085/D1546降低。提示细胞中的DNA、蛋白质和磷脂结构受到损伤。结果表明:DNA、蛋白质和磷脂是血卟啉单甲醚光敏作用的主要靶分子。

光动力疗法对侧支根管内粪肠球菌杀灭作用的实验研究

目的观察光动力疗法(Photodynamic therapy,PDT)对离体牙侧支根管内粪肠球菌的杀灭作用。方法选取人类单根管离体前牙60颗,随机分为3组。常规根管预备后,在牙的近远中面距离根尖孔3 mm处制备15#K锉直径(锉尖直径为150μm)的人工侧支根管,建立粪肠球菌感染模型。实验组为PDT组,以40μg/ml血卟啉单甲醚(Hemato-porphyrin monomethylether,HMME)为光敏剂,避光孵育5 min后用激光功率为80 mW的532 nm半导体激光在根管内上下提拉螺旋照射120 s;阳性对照组为5.25%次氯酸钠冲洗组;阴性对照组为生理盐水冲洗组。各组实验牙标本(每个离体牙近中面侧支根管作为实验前标本,远中面侧支根管作为对应的实验后标本)处理前与处理后即刻用20#K锉取侧支根管内碎屑,然后将碎屑转至含5 ml TPY液体培养基的试管中,10倍递增连续稀释后厌氧培养24 h,菌落计数并推算对应的菌液浓度。结果菌落计数统计结果显示:(1)与阴性对照组(生理盐水冲洗组)比较,HMME-PDT处理组和阳性对照组(5.25%次氯酸钠冲洗组)各侧支根管内细菌量均显著下降(P<0.01);(2)HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌的杀灭效果(92.56%)显著优于阳性对照组(76.93%),差异有显著意义(P<0.01)。结论 HMME-PDT对侧支根管内粪肠球菌有很好的杀灭作用,将为根管消毒提供一种新的有效途径。

血卟啉单甲醚荧光光谱对口腔黏膜癌的特异性诊断

目的在金黄地鼠口腔癌模型中确定血卟啉单甲醚荧光光谱对口腔黏膜癌的特异性诊断的可行性。方法选用成年金黄地鼠建立口腔黏膜癌模型,用9,10-二甲基1,2苯并蒽涂布于颊囊表面10周(n=20),小鼠处死前,组织中注射血卟啉单甲醚溶液,通过波长405nm的光纤光谱仪记录黏膜组织的药物荧光光谱,选用光谱参数S作为诊断标准,测量荧光光谱后,处死动物,对需测量的黏膜组织进行染色并记录组织病理学评价结果。结果 HMME染色的光谱显示正常组黏膜无明显染色,癌症组黏膜被染成不同程度的变化,两者呈现显著差异;癌性组织的S值(140≤S≤200)均高于正常组织(S≤10),且具有统计学意义。结论通过血卟啉单甲醚荧光光谱特异性荧光光谱可以作为诊断口腔黏膜恶性病变的一个标准。