家蚕类免疫球蛋白(hemolin)基因的克隆及表达特征和抗菌活性研究

Hemolin是昆虫的一种重要先天性免疫蛋白,属于免疫球蛋白超家族。克隆了家蚕hemolin基因,其序列全长5 100bp,含有5个外显子和4个内含子,基因cDNA编码含410个氨基酸的蛋白质,预测蛋白的分子质量约44.79 kD,pI 5.12。对该基因表达规律和生物学活性的结果研究表明:该基因只在家蚕蛹期脂肪体内特异性转录和表达,并能够被细菌和病毒诱导在幼虫期表达;该基因体外表达获得的重组蛋白具有抗菌生物学活性,能够有效抑制苏云金芽孢杆菌等的生长,由此暗示家蚕Hemolin蛋白可能在蚕体抵御病毒与细菌的感染过程中发挥重要作用。

鳞翅目昆虫Hemolin蛋白的研究进展

鳞翅目(Lepidoptera)是昆虫纲的第二大目,属完全变态的昆虫。在此目昆虫的进化过程中独立进化出一种免疫球蛋白家族成员,即Hemolin蛋白。前人在Hemolin蛋白的研究上积累了大量的信息,但仍存在着许多问题,有些问题还存在着矛盾。Hemolin蛋白在鳞翅目昆虫免疫与发育过程中起着非常重要的作用,研究Hemolin蛋白对理解昆虫的免疫和发育有着重要的意义。文中主要对Hemolin蛋白、Hemolin蛋白的功能及其表达调控的信号通路等方面做了一些梳理和总结,并结合自己的研究提出了一些新的观点。

家蚕天然Hemolin蛋白原核表达

Hemolin蛋白是一种类免疫球蛋白,属于昆虫的一种重要的先天性免疫球蛋白,家蚕(Bombyx mori)Hemolin蛋白与其他昆虫的序列具有高度的同源性,为了进一步分析家蚕Hemolin蛋白的功能,以杆状病毒感染的家蚕蚕蛹为原料,通过抗体亲和层析获得高纯度的天然Hemolin蛋白。结果表明:重组表达菌株pET-32a-hemolin经终浓度为0.1 mmol/L IPTG低温诱导后可在大肠杆菌BL21中成功表达;通过镍离子金属螯合亲和层析并经200 mmol/L咪唑洗脱可以获得较纯的重组Hemolin蛋白;免疫新西兰大白兔产生特异性多克隆抗体通过蛋白A亲和层析柱纯化后可获得高纯度的Hemolin抗体,并经抗体亲和层析获得的天然Hemolin蛋白纯度高,可用于对Hemolin蛋白功能的进一步研究。文章提供的分离纯化高纯度家蚕天然Hemolin蛋白的方法能够推进天然免疫蛋白的纯化,为进一步研究家蚕天然Hemolin蛋白的晶体结构、蛋白质抑菌功能以及抗病毒活性奠定基础。

昆虫免疫防御分子Hemolin的研究进展

Hemolin是昆虫所特有的类免疫球蛋白,在昆虫的免疫防御通路中具有重要的作用.它本身无直接的抗菌活性,但可以延缓昆虫发病的时间.同时也可调控昆虫体内酚氧化物酶的活性,影响黑化进程.此外,Hemolin影响昆虫的发育,并且该蛋白的表达还受到昆虫体内激素的调控.综述了Hemolin各类性质和功能机制的研究进展,在此基础上,对Hemolin的功能进行探讨和总结,并对其研究前景及可能出现的问题进行分析.

双相血培养瓶临床应用探讨

目的 :评价Hemoline双相血培养瓶临床应用情况。方法 :采用Hemoline双相血培养瓶对4 16份血标本进行培养 ,就检出阳性率、菌种分布及阳性检出时间进行评估。结果 :4 16份血标本分离出 72株病原菌 ,阳性检出率 17.3% ;菌种分布于葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、肠杆菌科、非发酵菌、真菌等 16个属 2 1种 ;阳性检出时间多数集中在 2 4～ 72h、<2 4h阳性检出率达 8.4 %、>72h阳性检出率为 6 .9%。结论 :使用Hemoline双相血培养瓶提高了阳性率 ,缩短了培养时间 ,并且检出种类多、范围广 ,而且操作简便 ,结果准确 ,由其替代传统的血培养瓶是切实可行的 。

昆虫类免疫球蛋白结构和功能研究进展

类免疫球蛋白是在无脊椎动物体内发现的唯一的免疫球蛋白家族成员,它对鳞翅目昆虫自身的免疫起着重要的作用。已有研究表明:类免疫球蛋白只存在于鳞翅目昆虫体内,有可溶性和不溶性两种存在方式,在昆虫体内分别具有不同的功能。可溶性类免疫球蛋白通过一些酶和蛋白的作用对入侵昆虫的细菌和病毒进行免疫防御,而不溶性类免疫球蛋白(即以膜结合蛋白的形式出现)对细胞和细胞黏着以及病毒和细菌入侵细胞有着延缓作用。

用KTA explorer 10蛋白纯化系统分离纯化家蚕类免疫球蛋白

类免疫球蛋白(Hemolin)是昆虫的先天性免疫蛋白。为了获取纯度高、具有天然活性的家蚕Hemolin,将被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染的家蚕蛹进行匀浆处理,离心后对上清液进行DEAE弱阴离子交换层析,进而利用Superdex 200凝胶过滤层析获得家蚕Hemolin的初级纯化产物,经质谱鉴定验证后再利用Superdex 75凝胶过滤层析对初级产物做进一步分离纯化。获得的纯化产物采用SDS-PAGE和Western blot检测到单一的大小约45 kD的蛋白质条带。采用该层析技术与条件能有效制备出纯度较高的具有天然活性的家蚕Hemolin。

茶尺蠖类免疫球蛋白基因EoHML的克隆和表达分析

类免疫球蛋白(Hemolin)是一种鳞翅目昆虫特有的免疫相关蛋白,也是唯一的无脊椎动物免疫球蛋白家族成员。本实验应用RACE技术获得了茶尺蠖(Ectropis obliqua Prout)类免疫球蛋白基因的全长c DNA序列,命名为Eo HML(Gen Bank登录号:KM885983),并分析了相关生物信息学特性,检测了病毒感染后基因的表达水平。结果表明,Eo HML基因序列全长1 772 bp,包含1 239 bp的开放阅读框,编码412个氨基酸,预测蛋白分子量大小为45.8 k D,等电点(p I)为8.297,属于典型的分泌型蛋白,且具有昆虫Hemolin基因保守的4个Ig功能区和2个N-glycosylation位点。系统进化分析表明,该蛋白与目前已知的类免疫球蛋白氨基酸序列的亲缘关系都较远,与烟草天蛾(Manduca sexta)类免疫球蛋白氨基酸序列相似度最高,为53%。荧光定量检测结果表明,茶尺蠖核型多角体病毒(Eo NPV)感染茶尺蠖幼虫后该基因表达量显著升高,最高表达量是正常对照的36.5倍,表明茶尺蠖Eo HML基因可能参与了茶尺蠖对Eo NPV的免疫代谢反应。