鸡PLA2基因的克隆与原核表达及PLA2蛋白卵黄抗体的制备

【目的】克隆并原核表达鸡PLA2基因,小量制备鸡PLA2卵黄抗体,为大规模制备PLA2卵黄抗体作为饲料添加剂提供参考。【方法】提取鸡胰脏总RNA,利用RT-PCR方法获得鸡PLA2基因,将其克隆至pGEX-4T-1原核表达载体中,构建表达载体pGEX-4T-1-PLA2,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达GST-PLA2融合蛋白。将GST-PLA2融合蛋白免疫青年蛋鸡,每次0.3mg/只,共免疫4次,收集鸡蛋,提取卵黄抗体,采用West-ern Blotting检测抗体的特异性。【结果】成功克隆出了鸡PLA2基因,构建了pGEX-4T-1-PLA2原核表达载体,并诱导表达了分子质量为44.59ku的GST-PLA2融合蛋白。GST-PLA2融合蛋白免疫蛋鸡后获得了卵黄抗体,经West-ern Blotting检查,制备的卵黄抗体具有很好的特异性。【结论】构建了表达鸡PLA2基因的表达系统,并成功的制备了抗鸡PLA2的卵黄抗体。

抗嗜水气单胞菌卵黄抗体的制备及保护效果

从发病的暗纹东方鲀体内分离、鉴定了一株致病性嗜水气单胞菌,测定其毒力,命名为NT-1。以NT-1为抗原,免疫28周龄的罗曼蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价的卵黄抗体,微量凝集试验、ELISA检测其效价及特异性;不同浓度卵黄抗体的粗提液与NT-1菌液混合注射ICR小鼠,检测特异性卵黄抗体的抑菌效果。结果表明,微量凝集试验测得的特异性抗体效价达1∶16以上,ELISA效价达1∶12 800以上;高效价、特异性的卵黄抗体可维持90 d,特异性卵黄抗体ELISA效价达1∶640时对感染NT-1的ICR小鼠的保护率达到了100%。

人肝再生磷酸酯酶2(PRL-2)的原核表达及其鸡卵黄抗体的制备

目的 :原核表达人肝再生磷酸酯酶 2 (PRL 2 )与谷胱甘肽S转移酶 (GST)和 6个串联组氨酸 (6×His)的融合蛋白 ,并制备GST PRL 2特异性鸡卵黄抗体。方法 :将人PRL 2cDNA的全长蛋白编码序列 ,克隆入两种原核表达载体pGEX 4T 2和pET2 1a中 ,在大肠杆菌BL2 1中诱导表达融合蛋白。用Glu tathioneSepharose 4B和Ni NTAagarose亲和柱分别纯化目的蛋白。以纯化的GST PRL 2融合蛋白免疫产蛋母鸡制备多克隆抗体 ,应用 6×His PRL 2对抗体进行亲和层析纯化 ,纯化产物用Westernblot进行分析。结果 :得到高表达量的融合蛋白 ,经亲和层析柱纯化后获得较高纯度的GST PRL 2和 6×HisPRL 2融合蛋白。以GST PRL 2融合蛋白免疫鸡得到抗PRL 2的多克隆抗体 ,Westernblot证实 ,经 6×HisPRL 2亲和层析纯化的抗体 ,能够识别 6×His PRL 2和GST PRL 2融合蛋白 ,但不同GST蛋白起反应 ,表明具有较高的特异性。结论 :利用原核表达的人PRL 2融合蛋白制备的抗PRL 2多克隆抗体具有较好的特异性 ,为研究PRL

抗重组猪三十九肽胆囊收缩素卵黄抗体的制备

制备重组猪三十九肽胆囊收缩素(GST-CCK39),以其为抗原免疫28周龄的蛋鸡,用水稀释脱脂处理,聚乙二醇(PEG)一步法制备高效价卵黄抗体,并用免疫琼脂扩散试验、ELISA、Dot-ELISA检测其效价及特异性。结果表明,免疫琼脂扩散测得特异性抗体效价达1∶16以上,ELISA效价达1∶12 800以上;Dot-ELISA显示所获得卵黄抗体具有较强的特异性;高效价,特异性的卵黄抗体可维持50 d以上。表明用重组蛋白GST-CCK39免疫蛋鸡后能获得效价高、特异性强的卵黄抗体。