肝癌组织中survivin、VEGF的表达及意义

目的探讨survivin与血管内皮生长因子(VEGF)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测50例HCC组织和20例正常肝组织中survivin、VEGF蛋白的表达,并分析其与HCC临床病理参数的关系。结果50例HCC组织中survivin、VEGF蛋白的阳性表达率分别为64.0%、68.0%,在正常肝组织中的表达率分别为0、10%,两者相比,P均<0.05;survivin、VEGF蛋白表达与HCC临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05);HCC中survivin、VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.886,P<0.05)。结论survivin和VEGF蛋白在HCC中表达率较高,为肝癌的分子靶向治疗提供了新的靶点;survivin和VEGF在HCC中的表达关系密切,对肝癌的发展可能有协同作用;测定HCC中survivin、VEGF蛋白的表达,对判断患者预后及指导治疗有较大帮助。

慢性肝炎及肝炎相关肿瘤与血浆血管内皮生长因子表达的研究

前瞻性评估慢性乙型肝炎及乙肝相关肿瘤与血浆血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的关系。采用酶 联免疫夹心法(ELISA)测定血浆VEGF,分别对20例健康成人、20例慢性乙型肝炎及40例HCC患者测量血浆VEGF 水平。结果显示:乙肝患者VEGF水平显著高于健康成人;乙肝患者VEGF水平低于HBsAg阴性肿瘤;HBsAg阳性 肿瘤患者VEGF水平显著高于HBsAg阴性患者。VEGF表达水平与肝病严重程度成正相关,HBsAg阳性肝细胞癌血 浆VEGF表达显著增加。

下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达对人肝癌Hep3B细胞增殖及凋亡的影响

目的观察肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2在人肝细胞癌细胞中的表达及下调后对增殖生存的影响并探讨其机制。方法以蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时定量逆转录聚合酶链反应法(q RT-PCR)检测肝细胞癌细胞株中肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达,并采用小干扰RNA转染Hep3B细胞株对肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达进行下调,Western blot和q RT-PCR检测转染效率、增殖凋亡相关基因表达;甲基噻唑基四唑检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2蛋白及m RNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、Hep G2、MHCC97H中均有表达,在Hep3B细胞株中表达量最高(F=5.742,P<0.01;F=3.452,P<0.05);与空白对照(si NC)组比较,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2组中P-P21及磷酸化的蛋白激酶B蛋白表达下调(t=8.462,P<0.01;t=9.742,P<0.01),P21、蛋白激酶B及Cleaved Capase-9蛋白表达上调(t=12.247,P<0.001;t=6.452,P<0.01;t=11.634,P<0.001;t=12.273,P<0.001);与si NC组比较,在72 h和96 h,si肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达下调后Hep3B细胞增殖能力下降(t=8.176,P<0.01;t=2.246,P<0.05),Hep3B停留在G1期比例增高,G_2及S期比例减少(t=4.23,P<0.05;t=2.13,P<0.05;t=5.72,P<0.05),凋亡率升高(t=8.633,P<0.01)。结论下调肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2表达通过P21磷酸化及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制肝细胞癌细胞增值及生存,可作为肝细胞癌治疗的靶向候选基因。

携带γ-干扰素的溶瘤病毒CNHK300-mlFN-γ治疗肝癌

目的观察鼠源γ-干扰素（mlFN-γ）基因插入溶瘤腺病毒CNHK300后，该病毒对不同的肝癌细胞株及其裸鼠移植瘤的增殖力及特异性杀伤作用。方法用噻唑蓝（MTT）法观察CNHK300-mlFN-γ（简称CNHK300-Mγ）对人正常肝细胞WRL-68、人肝癌细胞SMMC-7721、HepGII的特异性杀伤作用。裸鼠肝癌SMMC-7721模型观察CNHK300-Mγ、CNHK300和ONYX-015的抗肿瘤疗效，并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中mlFN-1的表达量。结果CNHK300-Mγ能选择性地杀伤肝癌细胞，存肿瘤细胞中半数抑制浓度（IC50）〈1，而在正常肝细胞中为370。肝癌模型中，CNHK300-Mγ治疗组能表达mIFN-1，治疗结束后第3天和第7天血清中的mlFN-γ分别为（23l±101）ng/L和（1733±191）ng／L。CNHK300-Mγ具有明显的肿瘤生长抑制作用，与CNHK300、ONYX2015和对照组的差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论mIFN-1的插入使病毒对肿瘤细胞的杀伤能力提高，CNHK300-M5,具有明显的肿瘤生长抑制作用。

一氧化氮供体经由caspase依赖途径诱导SMMC-7721细胞凋亡

目的研究NO供体——新型偶氮鎓二醇盐衍生物(JS-K)体外对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用。方法用噻唑兰法检测JS-K对细胞增殖的影响;倒置显微镜观察24 h后细胞形态学变化;以Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;以DAF-FM DA荧光探针检测细胞中NO水平;以蛋白免疫印迹法观察JS-K对B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)蛋白表达变化。结果 JS-K能显著抑制细胞增殖,呈一定的剂量、时间依赖性。倒置显微镜观察到JS-K组出现变圆、皱缩等形态学变化;3个浓度JS-K和对照组(5-FU 100μmol·L^(-1))作用细胞24 h,凋亡率分别为(19.12±0.07)%,(40.81±0.03)%,(75.53±0.12)%,(56.70±0.07)%,均高于空白组的(2.72±0.01)%,差异有统计学意义(P<0.05)。3个浓度JS-K作用细胞24 h后,细胞内NO水平分别是(151.2±0.1)%,(248.6±0.2%),(347.6±0.4)%,均高于空白组100%,差异有统计学意义(P<0.05);加入Carboxy-PTIO后,JS-K组NO水平由(318.6±0.2)%降至(307.6±0.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Bax/Bcl-2比值也升高,3个浓度JS-K和对照组依次为(0.54±0.02)%,(1.19±0.03)%,(1.32±0.02)%,(1.20±0.01)%,均高于空白组的(0.20±0.02)%,差异有统计学意义(P<0.05)。加入caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)和caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后,可显著减少JS-K诱导的细胞凋亡。结论 JS-K可通过caspase依赖性途径诱导SMMC-7721细胞凋亡。