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人源性肝细胞生长因子稳定转染细胞株的建立(英文)
被引量:
3
1
作者
唐世刚
覃琼华
+1 位作者
罗育林
苏先狮
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2004年第12期8-11,共4页
目的通过实验获得人源性肝细胞生长因子(hHDSSF)稳定转染细胞株,为重组产品的获得奠定基础。方法通过脂质体包裹重组质粒pcDNA3。1hisB-HDSSF转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞;进而通过RT-PCR和NorthernBlot鉴定G418筛选后的单克隆抗性...
目的通过实验获得人源性肝细胞生长因子(hHDSSF)稳定转染细胞株,为重组产品的获得奠定基础。方法通过脂质体包裹重组质粒pcDNA3。1hisB-HDSSF转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞;进而通过RT-PCR和NorthernBlot鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。结果重组质粒pcDNA3.1hisB-HDSSF转染Hela细胞后,第20天可见G418单克隆抗性细胞株的形成。G418抗性Hela细胞株RT-PCR扩增出600bp左右的目的条带;NorthernBlot获得了明显的阳性杂交影。结论我们的实验证实HDSSF表达重组体被成功转入Hela细胞,并稳定表达;从而获得了HDSSF稳定表达细胞株,为进一步研究HDSSF表达、蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。
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关键词
人源性
肝细胞生长因子
细胞转染
细胞株
克隆
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职称材料
重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究
2
作者
唐世刚
苏先狮
《中国感染控制杂志》
CAS
2003年第2期86-88,共3页
目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的...
目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的增殖效应。结果从细胞裂解物中纯化得到20 kD左右的单一蛋白条带,其纯度达89%。细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HepG2,Hela细胞有显著的增殖作用,并表现出良好的量效和时效关系,而对T24,Fibroblast细胞则增殖效果不明显。结论 本研究证实,人源性肝细胞生长因子(HDSSF)转染细胞株中有20 kD左右HDSSF相应蛋白表达,与HDSSF、598 bp开放读码框理论值相一致,且纯度达89%,并发现其有良好的细胞增殖作用。rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质,但它也有一定的选择性,这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关。
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关键词
重组人源性肝细胞生长因子
纯化
生物学活性
蛋白质
冻融法
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职称材料
题名
人源性肝细胞生长因子稳定转染细胞株的建立(英文)
被引量:
3
1
作者
唐世刚
覃琼华
罗育林
苏先狮
机构
中南大学湘雅三医院感染病科
中南大学职工医院湘雅分院
中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心
中南大学湘雅二医院传染科
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2004年第12期8-11,共4页
文摘
目的通过实验获得人源性肝细胞生长因子(hHDSSF)稳定转染细胞株,为重组产品的获得奠定基础。方法通过脂质体包裹重组质粒pcDNA3。1hisB-HDSSF转染Hela细胞,以G418筛选转染细胞;进而通过RT-PCR和NorthernBlot鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。结果重组质粒pcDNA3.1hisB-HDSSF转染Hela细胞后,第20天可见G418单克隆抗性细胞株的形成。G418抗性Hela细胞株RT-PCR扩增出600bp左右的目的条带;NorthernBlot获得了明显的阳性杂交影。结论我们的实验证实HDSSF表达重组体被成功转入Hela细胞,并稳定表达;从而获得了HDSSF稳定表达细胞株,为进一步研究HDSSF表达、蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。
关键词
人源性
肝细胞生长因子
细胞转染
细胞株
克隆
Keywords
human
hepatocyte
dna
synthetic
stimulating
factor
(
hdssf
)
transfect
cell strain
分类号
R575 [医药卫生—消化系统]
下载PDF
职称材料
题名
重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究
2
作者
唐世刚
苏先狮
机构
中南大学湘雅三医院感染病科
中南大学湘雅二医院
出处
《中国感染控制杂志》
CAS
2003年第2期86-88,共3页
文摘
目的获取高纯度的重组人源性肝细胞生长因子(rhHDSSF),并探讨rhHDSSF在体外的生物学活性。方法收获大量培养的表达细胞,以冻融法提取蛋白质;以IMAC pH递减非变性法纯化表达的rhHDSSF;以MTT法测定其对HepG2,T24,Fibroblast和Hela细胞的增殖效应。结果从细胞裂解物中纯化得到20 kD左右的单一蛋白条带,其纯度达89%。细胞增殖实验证实这一蛋白产物对HepG2,Hela细胞有显著的增殖作用,并表现出良好的量效和时效关系,而对T24,Fibroblast细胞则增殖效果不明显。结论 本研究证实,人源性肝细胞生长因子(HDSSF)转染细胞株中有20 kD左右HDSSF相应蛋白表达,与HDSSF、598 bp开放读码框理论值相一致,且纯度达89%,并发现其有良好的细胞增殖作用。rhHDSSF是一种非特异性促细胞增长物质,但它也有一定的选择性,这可能与不同细胞表达的细胞受体差异而导致蛋白信号传导不同有关。
关键词
重组人源性肝细胞生长因子
纯化
生物学活性
蛋白质
冻融法
Keywords
human
hepatocyte
dna
synthetic
stimulating
factor
, recombination, biological activity
分类号
R392.4 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
人源性肝细胞生长因子稳定转染细胞株的建立(英文)
唐世刚
覃琼华
罗育林
苏先狮
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
2004
3
下载PDF
职称材料
2
重组人源性肝细胞生长因子的纯化及其生物学活性的初步研究
唐世刚
苏先狮
《中国感染控制杂志》
CAS
2003
0
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职称材料
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