三氧化二砷抗肝癌血管新生作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)注射液抗肝癌血管新生的作用及其相关机制。方法:采用MTT法、透射电镜观察、免疫组化、鸡胚尿囊膜(CAM)血管形成实验等方法,观察As2O3注射液对人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长、超微结构、血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达以及对CAM血管形成的影响。结果:As2O3能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞ECV304生长,用药后诱导其出现了典型的细胞凋亡超微结构改变;As2O3对SMMC-7721细胞和ECV304细胞VEGF、EGFR的表达均有抑制作用;As2O3能抑制CAM血管形成。结论:As2O3注射液具有显著抗肝癌血管新生作用,其机制与抑制血管内皮细胞生长、诱导血管内皮细胞凋亡、调控肿瘤血管新生相关因子VEGF和EGFR的表达密切相关。

三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞分化和凋亡的影响

目的探讨三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞BEL-7402的诱导分化和凋亡作用。方法用不同剂量的3-吡啶-3-基-4[（4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基）氨基]-5-甲硫基-1，2，4-三唑（LH-37）与BEL-7402细胞共同培养，以MTT法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用；RT-PCR方法检测细胞甲胎蛋白（α-FP）和白蛋白（Alb）mRNA表达；ELISA法测定细胞仅．FP含量；免疫组织化学检测细胞内激活型Caspase-3表达；Westernblot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白表达；可见光法测定超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活力；荧光显微镜观察凋亡细胞形态；Annexin—V和PI双染流式细胞术测定凋亡细胞数。结果LH-37在10μmol·L^-1mmol·L^-1的浓度范围能抑制细胞增殖，且抑制率随浓度的增加而增高（P〈0．05或P〈0．01），10μmol·L^-1和1．0μmol·L^-1的LH-37使细胞AlbmRNA表达量增高，α-FPmRNA和蛋白质表达量明显下降，Caspase-3和Caspase-9表达量明显增加，Caspase-3阳性细胞明显增加；药物浓度达100μmol·L^-1作用48h后，BEL-7402细胞皱缩，呈现凋亡各期改变，细胞凋亡率高于对照组（P〈0．05）。结论三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌BEL-7402细胞具有抗增殖、促分化和凋亡作用，作用可能与过氧化氢的氧化损伤作用有关。

桦褐孔菌多糖的提取及对肝癌细胞SMMC7721的抗增殖的研究

探讨用超声提取法提取桦褐孔菌中桦褐孔菌多糖的工艺条件及桦褐孔菌多糖对肝癌SMMC7721细胞株的抗增殖作用。设计正交实验,对桦褐孔菌的超声提取工艺进行研究,并用MTT比色法研究桦褐孔菌多糖对肝癌SMMC7721细胞株的抗增殖作用。桦褐孔菌多糖超声提取的最佳工艺条件为95℃、15倍水、20kHz、超声60min,桦褐孔菌多糖在1.0￣16.0μg/mL范围内对肝癌SMMC7721细胞株的增殖均有抑制作用,且表现出浓度相关性。

半夏生物总碱对人肝癌细胞增殖的影响

目的:研究半夏生物总碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响。方法:采用MTT比色法以及集落形成率来测定半夏生物碱对Bel-7402生长抑制作用。结果:半夏生物碱400,200,100μg·ml^(-1)对肝癌细胞Bel-7402有明显抑制作用(P<0.05或0.01),随着半夏生物碱浓度的增加和共同培养时间的延长,抑制作用逐渐增强。结论:半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402生长有一定的抑制作用。

3,4,5-三羟基苯甲酸通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721的凋亡

采用四甲基偶氮唑盐(MTT)观察3,4,5-三羟基苯甲酸(TBA)对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)及线粒体膜电位的变化,用比色法测定Caspase-9和Caspase-3蛋白活性,探讨TBA诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制.研究结果表明,TBA对SMMC-7721细胞生长具有显著的抑制作用并诱导其凋亡,诱导SMMC-7721细胞凋亡作用可能通过线粒体信号传导通路实现.

磷酸化JNK在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中表达的研究

目的观察磷酸化JNK(p-JNK)在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株(Hca-F、Hca-P)中的表达水平,分析其在这两个细胞株中表达的关系及意义,以进一步探讨JNK基因在肝癌淋巴道转移过程中的作用。方法以小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移株(Hca-F)和低转移株(Hca-P)为研究对象,采用Western Blot检测p-JNK在Hca-F和Hca-P两细胞株的表达。结果p-JNK在Hca-F细胞株中的表达显著高于Hca-P,二者间差异有显著性(P<0.01)。结论p-JNK可能在促进肝癌淋巴道转移中发挥作用,本研究为进一步探讨其机制和功能奠定了基础。

复方甘草酸苷对肝癌合并肝硬化患者术中肝功能的影响

目的:探讨复方甘草酸苷对肝癌合并肝硬化患者肝切除术中肝功能的影响。方法:55例肝癌并肝硬化患者随机分为A、B组,A组手术切皮前静脉滴注复方甘草酸苷(1ml/kg),B组给予等量的生理盐水;术后第1、3、6d抽取外周静脉血检测肝功能指标,并对结果进行统计学处理。结果:A、B组术后第1、3d各项肝功能指标均高于术前,且A组低于B组(P<0.05);术后第6d2组患者肝功指标下降,组间比较无显著性差异。结论:复方甘草酸苷用于肝癌并肝硬化患者肝切除术中有护肝效应。

茜草蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用.方法采用MTT法、形态学、集落形成法,检测蒽醌对人肝癌细胞增殖的抑制结果.结果MTT法显示各个浓度的蒽醌对肝癌SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,呈现出与药物浓度、作用时间的依赖性;生长曲线由＂S＂型逐渐变得低平;倒置显微镜下可见药物组细胞数减少,间隙增大,细胞间出现＂接触性抑制＂;集落形成率降低（P〈0.01）,集落中细胞数减少.结论茜草蒽醌对人肝癌SMMC-7721细胞生长具有抑制作用;蒽醌有可能成为抗肝癌新药,为抗癌新药的开发提供理论与实验依据.

兔VX2肝癌模型肝动脉化疗栓塞后微环境中CD_3^+、CD_4^+T细胞的表达

目的探讨兔VX2肝癌模型中肝动脉化疗栓塞后肝癌微环境中CD+3、CD+4T细胞的表达情况。方法 56只健康清洁级新西兰兔经包块埋植法制作成VX2兔肝癌模型成功2周后,给予肝动脉化疗栓塞+动脉注射中等剂量干扰素-α,术后1周处死动物,分别选取癌组织、癌旁组织及正常肝组织制成石蜡切片,采用免疫组化检测微环境中CD+3、CD+4T细胞的表达情况。结果 50只模型兔在术后1周成功获得标本,病理观察提示肿瘤边缘形成包膜,包膜内和肿瘤间质未见明显血管。免疫组化提示CD+3、CD+4T细胞在三种组织中的表达有显著性差异(P<0.001),其中以癌旁组织最高,其次是癌组织。结论 CD+3、CD+4T细胞通过改变肝癌免疫微环境,在调节肿瘤免疫方面发挥重要作用。

香草醛缩氨基均三唑席夫碱对肝癌细胞分化相关酶和蛋白的影响

目的：研究香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导分化作用。方法：用不同剂量的3-吡啶-3-基-4-[（4-羟基-3-甲氧基-苯亚甲基）氨基]-5-甲硫基-l，2，4-三唑（LH-37）与SMMC-7721细胞共同培养，以MTF法检测细胞增殖和LH-37对细胞增殖的抑制作用；镜下观察细胞形态改变；采用酶联免疫法检测细胞甲胎蛋白含量，金氏法检测细胞碱性磷酸酶活性的变化。结果：LH-37在1×10^-5-1×10^-3mol／L的浓度范围均能抑制细胞增殖且抑制率随浓度的的增加而增高（P〈0．05或P〈0．01），细胞形态和结构向正常肝细胞方向逆转，1×10^-5mol／L和1×10^-6mol／L的LH-37均可使细胞甲胎蛋白含量明显下降，碱性磷酸酶活性明显升高。结论：香草醛缩氨基均三唑席夫碱对人肝癌SMMC-7721细胞具有抗增殖、促分化作用。

肝动脉化疗栓塞术治疗中晚期肝癌的效果

目的观察经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)对中晚期原发性肝癌的疗效。方法采用Seldinger技术,经股动脉穿剌,选择性肝动脉插管灌注化疗联合碘油栓塞治疗中晚期原发性肝癌患者中随机选择52例,共行102次介入治疗。结果显效15.4%(8/52),有效53.8%(28/52),稳定30.8%(16/52)。生存期显著提高,12个月以上生存率达69.2%(36/52)。结论TACE治疗中晚期原发性肝癌疗效确切,能够显著延长生存期,提高生存质量。

原发性肝癌组织中肥大细胞与微血管计数的研究

目的探讨PHC组织中MC和MV计数的相互关系。方法应用ABC免疫组化法对50例PHC手术切除标本常规石蜡包埋切片,分别检测MV和MC计数。结果50例PHC癌组织MV、MC计数均显著高于癌旁组织(MV:69.45±14.68vs35.29±10.95,P<0.01;MC:16.90±5.59vs9.88±3.59,P<0.05);AFU<10μg/mL、有转移、肿块直径>5cm的癌组织MV计数均显著高于AFU>10μg/mL、无转移、肿块直径<5cmMV计数(AFU:71.31±12.03vs57.88±11.69,P<0.05;转移:75.50±13.70vs58.18±11.68,P<0.05;肿块直径:80.33±13.88vs60.71±14.50);癌组织中MC计数与MV计数呈密切正相关(r=0.388,P<0.05)。结论MC、MV计数与PHC的发生、进展关系密切。

去乙酰化酶1在肝癌干细胞更新中的机制研究

目的探讨去乙酰化酶1(Sirtuins,SIRT1)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)更新中的作用及相关的分子机制。方法获取肝CSCs,Western blotting和免疫荧光染色法检测CSCs和非-CSCs中SIRT1表达;包装过表达SIRT1的慢病毒,感染肝脏非-CSCs,Western blotting检测非-CSCs中SIRT1表达,克隆形成实验探讨过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨非-CSCs的自我更新能力,裸鼠体内移植瘤实验探讨非-CSCs和过表达SIRT1的非-CSCs体内致肿瘤性;CSCs转染SIRT1特异性siRNA或NC-siRNA,或经不同浓度(2、4、6、8、12μmol/L)SIRT1特异性抑制剂VT6处理,然后检测CSCs的克隆形成能力、自我更新能力及体内致肿瘤性;Western blotting检测SOX2、c-Myc和Nanog蛋白表达;SIRT1特异性RNA或NC-siRNA与过表达SOX2的质粒共转染CSCs,克隆形成实验探讨CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨CSCs的自我能更新能力。结果 CSCs中SIRT1表达显著高于非-CSCs中SIRT1的表达(P<0.01)。与NC-siRNA转染组相比,si SIRT1转染组克隆形成能力与球体形成能力下均降了,且体内致肿瘤性也显著下降(P<0.01);感染过表达SIRT1的慢病毒后,非-CSCs中SIRT1表达显著高于空载体对照组,且与对照组相比,过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力与球体形成能力均提高(P<0.01),且体内致肿瘤性也显著增强;Western blotting检测结果表明,敲低或抑制SIRT1表达后,SOX2、Nanog表达显著被抑制(P<0.01),而c-Myc的表达无显著变化(P<0.05);过表达SOX2显著逆转了敲低SIRT1表达对克隆形成能力和自我更新能力的抑制作用(P<0.01)。结论 SIRT1在肝脏CSCs的自我更新和致肿瘤过程中发挥重要作用,其可能为肝癌的治疗提供新的靶标。

乙型肝炎转变为肝癌的长期观察

对16例乙型肝炎病人转变为肝癌的临床特点作了长期观察。起病时的肝炎类型为急性无黄疸型3例,慢活肝5例,慢迁肝及肝硬化各4例。转变为肝癌经历最短2年5个月,有11例在10年以后癌变。巨块型肝癌8例,结节型5例,浸润型3例。年龄最小32岁,平均53岁。转变为肝癌的首发症状均为肝区痛疼及痛疼加剧。定期 B 超探查仍是确诊手段。病人转变为肝癌的过程中乙肝病毒标记始终阳性。从发现肝癌至死亡时间平均8个半月。

四藤方对Bel-7402细胞增殖和凋亡作用研究

目的:观察清热解毒中药-四藤方对肝癌细胞Bel-7402增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度四藤方处理人肝癌细胞Bel-7402、人肝细胞HL-7702,WST-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,Western Blot法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)活化。结果:与对照组比较,四藤方对人肝细胞HL-7702增殖无明显影响;100～400μg.mL-1四藤方作用24 h可显著抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,促使细胞Bel-7402凋亡,呈现细胞凋亡形态,并可活化Bel-7402细胞caspase-3。结论:四藤方可以抑制Bel-7402细胞增殖,促Bel-7402细胞凋亡,并可能与活化caspase-3相关。

去甲斑蝥酸钠注射液对人类肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的抑制作用

目的研究去甲斑蝥酸钠注射液对人类肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的影响及可能的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及Transwell实验检测去甲斑蝥酸钠注射液对HepG2细胞迁移、黏附及侵袭力的影响，采用免疫组织化学法分析去甲斑蝥酸钠注射液处理后HepG2细胞基质金属蛋白酶（MMP）-9蛋白的表达情况。结果细胞生长抑制作用随着去甲斑蝥酸钠注射液剂量的增大和作用时间的延长而增强，同一时间随着药物浓度升高，HepG2细胞增殖抑制程度逐渐加强，差异有统计学意义（P〈0．05）。0．25μg／ml药物作用30、60、90和120min后的黏附抑制率分别为48．11％、33．81％、28．97％和16．83％。0．25μg／ml药物作用24h后，HepG2细胞的迁移及侵袭细胞数明显减少，迁移、侵袭抑制率分别为64．19％和58．19％。HepG2细胞MMP-9蛋白表达量随药物浓度的增加而逐渐减少。结论去甲斑蝥酸钠注射液可明显抑制HepG2细胞黏附、迁移和侵袭的能力，其机制可能与MMP-9蛋白的表达有关。