油茶皂苷通过内质网应激途径诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及其作用机制。方法采用MTT法考察了油茶皂苷对肿瘤细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bip、ATF6、IRE1、Perk、eIF2a和eEF2蛋白质表达的影响。结果油茶皂苷(10～30 mg.L-1)明显抑制HepG2细胞的增殖。同时可激活Caspase信号通路,诱发PARP底物的断裂;进一步上调IRE1表达量及活化Perk、eIF2a和eEF2蛋白。结论油茶皂苷通过内质网应激途径诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡。

白花丹醌对人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721增殖及其Bax/Bcl-2、Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的探索白花丹醌对人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721增殖的影响及其影响机制。方法人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721分别与白花丹醌共培养,通过显微图像、MTT法检测了白花丹醌对上述两种肝癌细胞增殖情况的影响,利用实时荧光定量PCR(Qpcr)检测其Bax/Bcl-2,Cyclin D1mRNA表达的影响。结果显微照像和MTT法测定都表明白花丹醌能明显地抑制两种肝癌细胞的增殖;Qpcr检测表明,对HepG2和SMMC-7721,白花丹醌能明显上调Bax/Bcl-2mRNA比值(P=0.0017和P=0.00104),同时明显下调Cy-clin D1 mRNA水平(P=0.0287和P=0.0165)。结论白花丹醌能抑制HepG2、SMMC-7721的增殖,其机制与Bax/Bcl-2比值上升和Cyclin D1转录水平下降有关。

BC047440-siRNA对肝癌HepG2细胞增殖抑制及其分子机制的初步探讨

目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制肝癌相关基因BC047440的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响并初步分析其抑制增殖的分子机制。方法设计针对BC047440基因的siRNA,构建pGenSil-1-BC047440-siRNA真核表达载体。分别用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenSil-1-BC047440-siRNA、空载体质粒pGenSil-1转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;随后实验分为3组:转染siRNA表达载体组(PP2)、转染空质粒组(PP1)和未处理的亲本HepG2细胞组(PP0)。采用荧光定量PCR检测BC047440mRNA表达变化;CCK-8分析细胞增殖活性;平板克隆形成实验检测单个细胞的增殖能力;最后选取NF-κB下游增殖相关基因c-myc、bcl-2、cyclin D1,用荧光定量PCR检测其mRNA水平的变化。结果成功转染并获得PP1、PP2组抗性克隆,PP2组与PP0组比较,BC047440mRNA水平明显降低,抑制率约为75%;细胞增殖实验中PP2组细胞增殖能力明显降低,平板克隆形成实验结果显示PP2组克隆形成率为(8.42±0.82)%,明显低于PP1组[(39.31±5.39)%]和PP0组[(40.96±3.21)%](P<0.01)。检测NF-κB下游增殖相关的几个基因时发现PP2组c-myc mRNA表达明显降低,约为PP0组的12/25;其余基因无明显变化。结论干扰BC047440基因表达可以抑制肝癌细胞的增殖,初步揭示BC047440基因可以对c-myc起正向调控作用,从而促进肝癌细胞的增殖,提示抑制BC047440基因可能成为控制人肝癌细胞生长的有效靶点。

HDGF在肝癌组织和肝癌细胞HepG2中的表达及其意义

目的:探讨肝癌组织中及肝癌细胞HepG2中HDGF的表达及其意义.方法:收集10对配对的新鲜肝癌及其癌旁组织,提取总RNA,并用同样的方法提取HepG2细胞的总RNA.随后利用M-MLV逆转录酶逆转录成cDNA,RT-PCR检测HDGF在肝癌组织、癌旁组织及HepG2细胞中的表达情况.收集137例肝癌和49例正常对照组织石蜡切片,免疫组织化学检测HDGF在肝癌与非癌组织之间的差异表达,并分析该基因表达与肝癌患者临床病理参数之间的关系.结果:成功提取肝癌及其癌旁组织和HepG2细胞的总RNA.RT-PCR检测显示在肝癌组织及HepG2细胞中HDGFmRNA表达量都明显高于癌旁临近的非癌组织,最高分别为癌旁组织的21.11倍和11.39倍.免疫组织化学分析显示HDGF在肝癌组织中高表达占77.4%,明显高于正常组织(51.5%,P=0.011),且高表达的HDGF与肝癌的临床分期、N分类和T分类呈明显相关(均P<0.05).Cox模型单变量分析显示,N分类、临床分期、HDGF表达水平与患者的生存预后明显相关(P=0.028,0.041,0.000;HR=1.557,1.526,2.316).多变量分析,HDGF表达水平可以作为独立的预后因素影响疾病的发生及发展(P=0.000,HR=0.358).Kaplan-Meier生存分析,过表达的HDGF可明显缩短患者的生存时间.结论:在肝癌组织和HepG2细胞中HDGF高表达.HDGF是肝癌患者一个独立的预后预测因子.

鹅去氧胆酸衍生物对HepG2裸鼠肝癌移植瘤的影响

目的探讨鹅去氧胆酸衍生物对HepG2裸鼠肝癌移植瘤的影响。方法将HepG2细胞注射于SPF级BALB/c裸鼠,形成移植瘤后将瘤体接种于裸鼠,接种成功的小鼠随机分为三组(A组、B组与C组),每组6只裸鼠。A组给予生理盐水腹腔注射,B组给予鹅去氧胆酸衍生物按20 mg/(kg·d)进行腹腔注射,C组给予鹅去氧胆酸衍生物按60 mg/(kg·d)的进行腹腔注射。计算三组的抑瘤率,对肝脏组织进行病理分析与肝癌衍生生长因子(HDGF)表达分析。结果所有裸鼠均接种与造模成功。B组、C组的抑瘤率分别为(38.45±2.15)%和(49.28±3.19)%,C组显著高于B组(P <0.05)。A组肝细胞排列紊乱,肿瘤细胞异型性明显,肝小叶组织正常结构消失,假小叶形成; B组与C组的肝脏病理显著改善(P <0.05),癌症细胞巢形成和细胞坏死显著减少(P <0.05)。三组肝脏组织的HDGF mRNA与蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P <0.05),B组与C组均显著低于A组(P <0.05)。结论鹅去氧胆酸衍生物可呈剂量依赖性地在HepG2裸鼠肝癌移植瘤中有效发挥抑瘤作用,改善肝脏病理状况,其作用机制可能与抑制HDGF基因与蛋白表达有关。

白藜芦醇对人肝癌细胞转移的影响及其分子机制

目的观察白藜芦醇的抗肿瘤活性,并探讨其抑制抗血管发生及肿瘤转移的分子机制。方法体外培养HepG2细胞,用12.5、25、50、100μmol/L的白藜芦醇刺激。小室侵袭实验检测HepG2细胞的迁移与侵袭;Western blot法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、血红素氧合酶1(HO-1)的表达以及NF-κB p65亚基核转位。结果 50μmol/L白藜芦醇孵育24 h后,其迁移与侵袭率分别降低了37%和33%;Western blot结果显示白藜芦醇能抑制p65核转位;此外,抑制并沉默HO-1表达后,能显著降低MMP的表达。结论白藜芦醇对MMP的表达影响很大程度上与抑制HO-1-NF-κB信号通路活性有关。

葡萄籽原花青素增强X射线辐射敏感性的实验研究

目的:研究葡萄籽原花青素(GSPs)对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞和人白血病K562细胞的X射线增敏作用,并探讨其作用机制。方法:应用SRB法和集落形成法测定GSPs对三株细胞的X射线增敏作用,单因素方差分析确定各因素对细胞杀伤的贡献,单击多靶模型曲线拟合计算增敏比。结果:SRB检测结果表明,GSPs可以抑制三株细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应;但对不同细胞的增殖抑制作用差异较大,对人白血病K562细胞的抑制作用最强,对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞的抑制作用较弱;对X射线增敏作用结果表明,GSPs对人白血病K562细胞的增敏作用最强,最佳增敏剂量为6.25～12.5μg/mL,对人肝癌HepG2和人宫颈癌Hela细胞的增敏作用相似,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL;集落形成法检测结果表明,应用增敏剂量的GSPs后,对人白血病K562细胞表现出较好的辐射增敏作用,平均致死剂量D0值和准阈剂量Dq减小,细胞对X射线辐射敏感性增加,亚致死损伤修复减少,增敏比为1.94。结论:GSPs可以增强肿瘤细胞对X射线的敏感性,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL,其机理可能通过抗氧化作用,调节细胞细胞内氧平衡,诱导细胞产生G1期阻滞而发挥辐射增敏作用。

莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的观察不同剂量莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤S180的抑瘤作用,以及对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480的体外抑瘤作用。方法 72只二级昆明小鼠采用肿瘤移植法建立小鼠荷瘤动物模型;椒莪软胶囊灌胃给药,剂量分别为0.3、0.6、1.2 ml/kg;氟尿嘧啶22.5 mg/kg作为阳性对照药腹腔注射给药;连续给药15 d,观察药物对肿瘤生长的抑制作用。对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480进行传代培养后,制备不同剂量(椒莪软胶囊0.015 625、0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2、4 mg/ml)含药血清、氟尿嘧啶阳性药血清和肿瘤移植模型不用药对照血清,作用于人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝比色法观察血清对两种细胞的抑制作用。椒莪软胶囊0.0、6.25、12.5、25.0μg/ml给药15 h后,经流式细胞仪测定对人源性肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。结果①椒莪软胶囊0.3、0.6、1.2 ml/kg肿瘤抑制率分别为19.73%、32.22%和46.68%。随着给药剂量的增加,坏死的肿瘤细胞所占比例也相应增加,生长活跃的肿瘤细胞逐渐减少。②抑制作用随剂量升高而作用增强,对人源性肝癌细胞株HepG2体外最低药物物浓度为0.062 5 mg/ml,对大肠癌细胞株SW480体外最低药物浓度为0.125 mg/ml。③椒莪软胶囊可明显促进人源性肝癌细胞株HepG2的细胞凋亡。结论椒莪软胶囊对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用,对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480有明显的抑制作用。椒莪软胶囊在临床具有广阔的应用前景。

蛇葡萄素钠诱导人肝癌HepG2细胞凋亡和对CyclinD1表达的影响

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)对人肝癌HepG2细胞株的抗肿瘤作用,探讨其抗肿瘤作用机制。方法:应用MTT法测定AMP-Na对HepG2细胞的抑制作用,并计算IC50值;流式细胞术检测AMP-Na的诱导凋亡作用和对细胞周期的影响;实时荧光定量PCR检测AMP-Na对HepG2细胞CyclinD1基因mRNA的表达影响。结果:MTT检测结果表明,AMP-Na显著抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应,药物作用24h、48h、72h IC50值分别为226μg/ml、67μg/ml和34μg/ml。流式细胞仪检测表明100μg/ml AMP-Na作用于细胞48 h、72 h凋亡率分别为31.9%、34.0%;可使G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,有明显的G1期阻滞作用;实时荧光定量PCR检测AMP-Na 100μg/ml作用HepG2细胞48 h、72 h后,用药组CyclinD1 mRNA表达分别是对照组的0.551和0.524倍,二者均有显著性差异(P<0.05)。结论:AMP-Na对肝癌HepG2细胞有抗肿瘤效果,其机理可能通过降低细胞周期调节关键的CyclinD1的表达,使细胞停滞于G1期,诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2细胞的抑制作用

目的比较丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对人肝癌HepG2细胞的体外增殖抑制作用。方法采用改良MTT法测定丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2的增殖抑制作用,倒置显微镜下观察两者对HepG2细胞的形态学影响。结果3.4～27.2μmol·L-1丹参酮ⅡA对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,而对应各浓度丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2细胞均无增殖抑制作用。结论丹参酮ⅡA对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用,其与丹参酮ⅡA磺酸钠在抗肝癌的药效方面可能存在差异。

丙泊酚对肝癌HepG2细胞侵袭的影响

目的:研究丙泊酚对肝癌Hep G2细胞侵袭的影响。方法:以0(阴性对照)、1、3、10μg/ml丙泊酚作用于肝癌Hep G2细胞48 h后,采用MTT法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、E-钙黏附素(E-cadherin)、锌指转录因子(Snail)的表达及核因子-κB p65(NF-κB p65)磷酸化水平。结果:与阴性对照比较,1、3、10μg/ml丙泊酚能降低Hep G2细胞活力和侵袭能力,下调NF-κB p65磷酸化水平和Snail表达,上调E-cadherin表达(P<0.01);3、10μg/ml丙泊酚能下调MMP-2、MMP-9表达(P<0.01)。上述效果均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:丙泊酚能抑制肝癌Hep G2细胞侵袭,其机制可能与抑制NF-κB/Snail信号通路有关。

微小RNA-451对HepG2肝癌细胞迁移及侵袭的影响及其机制

目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-451对HepG2肝癌细胞迁移及侵袭的影响及其机制。方法脂质体Lipofeetamine^TM2000将miR451模拟物和miR-451NC转入HepG2细胞中，48h后，实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测miR-451表达，噻唑蓝（M1Tr）法检测细胞活力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，Westernblot法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、波形蛋白（Vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadhefin）表达及磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（P13K／Akt）信号通路激活情况。结果与miR-451NC组比较，miR-451模拟物组miR4511表达量（1．45±0．14比0．20±0．02）显著提高（P=0．006），转染24、48、72h，细胞活力（0．33±0．03比0．38±0．03，0．32±0．03比0．59±0．04．0．25±0．02比0．784-0．06．P=0．009．P=0．000．P=0．000）、细胞迁移能力[（2．454-0．22）mm比（17．32±1．74）m1]3，P=0．000]及侵袭能力（18．27±1．82比194．58±19．28）降低（P=0．000），MMP-2（0．18±0．01比0．84±0．08），MMP-9（0．20±0．02比1．08±0．10），Vimentin（0．16±0．01比1．98±0．20），P13K（0．34±0．03比1．32±0．13）及p-Akt（0．38±0．03比1．02±0．10）表达量显著下调（P=0．000、P=0．000、P=0．000、P=0．000、P=0．000），E-cadhefin（1．00±0．10比0．15±0．10）表达量显著上调（P=0．000）。结论提高miR-451表达能通过抑制P13K／Akt信号通路进而抑制细胞迁移侵袭。

杠柳毒苷体外抑制肝癌细胞和乳腺癌细胞增殖的实验研究

目的探讨杠柳毒苷在体外对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法 MTT法观察杠柳毒苷对人乳腺癌MDA-MB-468细胞和人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察杠柳毒苷对两种肿瘤细胞的细胞增殖周期作用。结果与对照组比较,杠柳毒苷能明显抑制两种肿瘤细胞的增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测发现,杠柳毒苷对乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞持续作用24 h后,可以使G0/G1期细胞增多,G2/M期细胞减少。结论杠柳毒苷具有抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞增殖的作用,并可将乳腺癌MDA-MB-468细胞和肝癌HepG2细胞的细胞生长周期阻滞在G0/G1期。